위염과 위궤양을 일으키는 Helicobacter pylori는 그 감염 환자에서 강한 항체형성을 유도하는 urease를 생산한다. 식물체를 이용하여 H. pylori에 대한 식용백신 모델을 제조하기 위하여 H. pylori의 urease 유전자를 지니고 있는 pH808 plasmid로부터 750bp의 ureA DNA를 PCR에 의해서 증폭한 후 이를 담배식물에서 발현이 되도록 조작하였다. 재분화된 형질전환 식물체로부터 ureA 유전자의 도입과 mRNA발현 및 단백질합성을 분석하였다. CaMV 35S promoter에 의한 ureA 유전자의 발현은 SDS polyacrylamide 전기영동 및 immunoblot실험에서 박테리아로부터의 재조합 단백질과 같은 크기의 30 kDA UreA 단백질이 생산되었음을 확인할 수 있었다.
본 연구를 수행하기 전에 H. pylori에 대한 어떠한 치료도 받지 않은 114명의 소화기 궤양 환자들을 내시경 검사를 하는 동안, 114개의 H. pylori 균주를 위 전정부로부터 분리하였다. H. pylori를 검출하기 위하여 rapid urease test, SSA와 cagA 유전자의 PCR증폭을 수행하였고, CagA 발현 검출을 위하여 Western blot을 수행하였다. H. pylori에 감염된 환자들은 omeprazole. clarithromycin (a macrolide), amoxicillin을 모두 사용하는데 3제 요법(triple therapy)으로 치료하였다. 치료가 중단되고 6주 후에 내시경 검사에서 세균 박멸률을 측정하였다. 내성률은 각각 clarithromycin이 $20.2\%$. amoxicillin이 $0.0\%$였다. Clarithromycin 내성은 H. pylori의 23S rRNA 유전자에 있는 A2142G돌연변이에 의한 것이 $87\%$이었다. A2142G돌연변이의 clarithromycin의 MIC값($32\~>256\;{\mu}g\ml$)은 A2143G돌연변이의 MIC값($4\~128\;{\mu}g/ml$)보다 더 높았다. Clarithromycin에 감수성을 가진 H. pylori는 박멸되었으나 clarithromycin내성을 가진 H. pylori는 박멸되지 않았다(P = 0.0001). 이러한 결과들은 CagA 발현에는 어떠한 영향도 받지 않았으며 H. pylori의 clarithromycin 내성은 치료 실패의 가장 중요한 이유임을 제시하였다. 우선적으로 실시되는 생검 배양에 대한 H. pylori의 항생제 감수성 시험은 감염된 환자들에 대한 3제 요법을 선택하기 이전에 필히 실시되어야 하며 국내에서 clarithromycin에 대한 1차 내성의 높은 빈도는 H. pylori의 감염증 치료에 심각한 문제점을 야기시켰다.
Objective: The present study was conducted to evaluate invasive and noninvasive diagnostic methods for detection of Helicobacter pylori (H. pylori) in patients admitted with dyspeptic complaints and to compare sensitivities and specificities. Method: Sets of four gastric biopsy specimens were obtained from a total of 126 patients included in the study. The presence of H. pylori was determined by invasive tests including culture, rapid urease test, polymerase chain reaction (PCR) and histopathology. Among noninvasive tests, urea breath test, serological tests and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were performed. Results: H. pylori was isolated in 79 (62.7%) gastric biopsy cultures, whereas positivity was concluded for 105 (83.3%) patients by rapid urease test, for 106 (84.1%) by PCR, for 110 (87.3%) by histopathology, for 119 (94.4%) by urea breath test, and for 107 (84.9%) by ELISA. In the present study, the culture findings and histopathological examination findings were accepted as gold standard. According to the gold standard, urea breath test had the highest sensitivity (96.5%) and the lowest specificity (30%), whereas culture and histopathology had the highest specificities (100%). Conclusion: The use of PCR invasively with gastric biopsy samples yielded parallel results with the gold standard. PCR can be recommended for routine use in the diagnosis of H. pylori.
Background: Helicobacter pylori (H. pylori) is a well known major cause of gastric cancer and even when asymptomatic infected patients are at elevated risk. Functional dyspepsia (FD) is also one of the most common gastrointestinal diseases, which greatly impacts the quality of life. H. pylori infection and psychosocial stress are frequently associated with FD but limited studies have confirmed the relationships, especially in Southeast Asian countries. Here we aimed to investigate the prevalence and impact of H. pylori infection, anxiety and depression on Thai FD patients. Materials and Methods: This cross-sectional study was conducted in a tertiary care center in Thailand, during February 2013-January 2014. All FD patients were diagnosed and categorized by Rome III criteria into epigastric pain syndrome (EPS) and postprandial distress syndrome (PDS) groups. The Hospital Anxiety and Depression Scale was used to evaluate psychological status. The presence of H. pylori was defined as positive with H. pylori culture, positive rapid urease test or positive histology. Results: Three hundred FD patients were included, 174 (58%) female. Overall mean age was 54.8+15.1 years. There were 192 (64%) patients with PDS and 108 (36%) with EPS. H. pylori infection was demonstrated in 70 (23.3%) patients. Anxiety and depression were documented in 69 (23%) and 22 (7.3%), respectively. H. pylori infection, anxiety and depression were significantly higher in PDS than EPS patients (27.1% vs 16.7%; p=0.04; OR=1.86; 95%CI=1.01-3.53 and 29.7% vs 11.1%; p=0.0002; OR=3.4; 95%CI=1.7-7.1 and 10.4% vs 1.9%; p=0.006; OR=6.2; 95%CI=1.4-38.9, respectively). Conclusions: H. pylori infection, anxiety and depression were commonly found in Thai FD patients and more prevalent in PDS than EPS. H. pylori eradication might be the key to success for the treatment of Thai FD patients and prevent the development of gastric cancer.
한국인의 주된 위 건강의 저해인자인 Helicobacter pylori를 저해하는 젖산균을 타락과 김치에서 분리하여 특성을 분석하고자 하였다. 전통발효 젖산균음료인 타락 5개와 김치 30종을 안동 지역과 수도권의 시장에서 구입하고, 젖산균을 전통적인 분리방법에 따라 15주를 분리하였다. 이들 젖산균에 대하여 H. pylori 생육 저해 활성이 높은 두 개의 젖산균을 선택하여 동정하였다. 이들 젖산균은 전형적인 생화학적인 특성과 16S DNA의 분석을 통하여 타락에서 분리된 균은 Streptococcus thermophilus LAB kw15로 김치에서 분리된 균은 Leuconostoc mesenteroides LAB kw5로 동정하였다. 이들 분리 균주 배양액을 중성으로 조정한 후 첨가하여 배양할 때 H. pylori의 생육을 현저히 저해하였으며, H. pylori와의 혼합 배양에서도 H. pylori의 생육을 저해하는 것으로 나타났다. 그러므로 이 분리 젖산균의 대사산물이 H. pylori의 생육을 저해하고 있는 것으로 나타나, 기능성 젖산균으로의 활용이 가능할 것으로 판단된다.
The antagonistic activities of 30 strains of lactobacilli against Helicobacter pylori were determined and Lactobacillus helveticus CU631 has been selected as the strain which possesses the strongest inhibitory effect in the disc diffusion assay showing inhibition zone diameter of $10{\pm}1.5mm$, whereas those of L. plantarum and L. fermentum have been shown to be $4.0{\pm}0.6mm$. H. pylori G88016 revealed the highest vacuolating toxin producing activity among the 8 strains, the inhibitory activity of L. helveticus CU631 in vacuolating toxin producing activity of H. pylori manifested in the co-culture of two strains and in the 5:5 mixture of supernatant of the two strains. Both L. helveticus CU631 and cell free culture supernatant had a strong inhibitory activities in urease and cytotoxin producing activities of H. pylori NCTC11637 and CJH12. An accelerated proteolytic activity of water soluble peptides by L. helveticus CU631 during the refrigeration storage has been manifested in the cream cheese. DNA seqences of 16S-23S ribosomal RNA spacer region showed typical pattern among the various strains of L. helveticus, which could be used in the identification of L. helveticus CU 631.
위에 군집을 형성하는 그람 음성 박테리아인 Helicobacter pylori는 위암을 일으킬 수 있는 1급 발암 인자로, H. pylori의 성장을 억제하거나 제거하는 물질을 탐색하는 연구가 꾸준히 진행되어 왔다. 오수유는 운향과에 속하는 오수유의 열매를 일컫는 생약으로 한방에서는 설사 및 복통에 사용되던 약재이다. 오수유 추출물이 H. pylori의 성장을 억제한다는 보고는 있었으나 병원성 요인에 어떤 영향을 주는지에 대한 연구는 보고된 바가 없었다. 본 연구에서는 각기 다른 메탄올 농도에서 추출한 오수유 추출물의 H. pylori 성장 억제 효과를 비교하였으며 또한 오수유 추출물이 H. pylori의 병원성 인자에 미치는 영향을 연구하였다. 95% 메탄올 오수유 추출물이 가장 낮은 최소저해농도(MIC) 값을 보였으며, 이 95% 추출물을 대상으로 하여 MIC 미만 농도에서 H. pylori의 병원성 인자의 발현 변화를 확인하였다. 95% 메탄올 오수유 추출물은 H. pylori의 주요 병원성 인자인 cagA, vacA 그리고 ureB의 mRNA 및 단백질의 발현을 억제하였으나 흥미롭게도 ureA의 발현은 증가시켰다. 하지만 H. pylori의 배양액과 세포내의 암모니아의 량이 현저히 낮아졌음을 확인하였고, 이는 오수유 추출물이 ureB의 mRNA 및 단백질의 발현을 억제하여 H. pylori의 urease 활성을 억제한다는 것을 확인하였다. 오수유 추출물의 병원성 인자 조절 기전에 대해서는 좀 더 연구가 필요할 것으로 보이나, 본 연구 결과는 오수유 추출물이 H. pylori로 인한 부정적 영향을 줄여줄 것으로 생각한다.
김치로부터 강력한 H. pylori 생육 저해활성을 보이는 균주를 분리, 동정하여 Lb. plantarum NO1으로 명명하였다. Lb. plantarum NO1은 H. pylori 뿐만 아니라 그람 양성균 및 그람 음성균들에 넓은 범위의 저해활성을 나타내었다. Lb. plantarum NO1의 배양 상징액을 H. pylori배양액에 첨가한 후 H. pylori의 urease 활성을 측정한 결과 Lb. plantarum NO1의 강한 urease 억제활성($40{\sim}60%$ 저하)을 확인할 수 있었다. AGS위암 세포주에 H. pylori를 부착시킨 후 Lb. plantarum NO1의 배양액을 첨가하여 AGS세포에서 H. pylori 탈착능을 측정한 결과 Lb. plantarum NO1은 유산균 배양액 무첨가보다 33% 이상 높은 H. pylori 탈착능을 나타내었으며, 비교구로 사용된 Lb. rhamnosus GG, Lb. sakei SI3에 비해 더 우수한 H. pylori 탈착능을 나타내었다. 분리균주의 장내 생존성 여부 확인을 위하여 내산성, 인공위액에서 2시간동안 처리한 결과 Lb. plantarum NO1이 초기균수$(10^9CFU/ml)$를 유지하면서 높은 저항성을 나타내었다. Oxgall 농도 0.3%와 0.5%의 인공담즙에서 24시간 처리한 후에도 초기균수$(10^9CFU/ml)$를 유지하였다. 뿐만 아니라 인공위액에서 생존한 균주를 연속적으로 인공담즙으로 처리하였을 때에도 높은 생존율$(10^8{\sim}10^9CFU/ml)$를 유지하였다. Lb. plantarum NO1의 용혈성 반응 유무 결과 용혈반응이 일어나지 않았으므로 인체에 안전하다는 것을 간접적으로 확인할 수 있었다. 본 연구에서 김치로부터 분리한 H. pylori억제 유산균 Lb. plantarum NO1은 장내에 생존 가능성도 높으며, 동시에 위에서 효과적으로 H. pylori를 억제 할 수 있을 것으로 기대되어진다.
본 연구에서는 전통 가자미식해에서 분리한 LAB에 의한 H. pylori 억제효과를 살펴보았다. 가자미식해에서 분리한 40종의 LAB는 L. plantarum, L. brevis, Lc. mesenteroides, and W. paramesenteroides 등으로 확인되었다. 40종의 LAB중 liquid inhibition assay에 의해 H. pylori 억제효과가 있는 것으로 판단되는 10 종류의 젖산균을 선별하였다. 선별된 젖산균 배양액을 1%, 5%, and 10% 농도로 적용하였을 때 H. pylori 52, 51, e-53와 309에 대해서 생육 억제효과가 나타났다. LAB 배양 상등액의 pH를 7.0으로 조절하여 적용시켰을 LAB 10 종류 모두 5%와 10%의 농도에서 H. pylori 52와 LAB 7 종류의 10% 농도에서 H. pylori e-53에 대해 억제효과를 나타내었다. 그것은 또한 urease 활성을 억제시키는 영향도 나타내었다. 결과적으로 가자미식해에서 분리한 L. plantarum spp., L. brevis spp., Lc. mesenteroides spp., W. paramesenteroides spp. 등에 의해 H. pylori가 제균되거나 억제되는 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
목적: H. pylori 대변항원(Helicobacter pylori stool antigen; HpSA) 검사는 H. pylori 감염 여부를 진단하는 데 이용되는 비침습적 검사이지만, 소아에서 제균요법 후 H. pylori 대변항원검사의 유용성에 대한 연구가 거의 이루어지지 못한 상태이다. 본 연구에서는 소아에서 H. pylori의 제균 여부를 확인하는 데 있어 enzyme immunoassay에 의한 HpSA 검사의 진단 정확도를 평가하고자 하였다. 연구방법: 2001년 1월부터 2003년 10월까지 서울대학교병원 소아과에서 146명의 소아(평균 연령 $9.3{\pm}4.3$세)를 대상으로 총 164회의 H. pylori 대변항원검사(Primier platinum HpSA)를 시행하였다. H. pylori 감염여부를 확인하기 위해 모든 환아에서 H. pylori 대변항원검사와 상부위장관내시경에 의한 위점막 생검을 병행하였다. H. pylori 감염이 확인되어 사제요법(omeprazole, amoxicillin, metronidazole, bismuth subcitrate)을 1주 동안 시행 받은 환아들에서는 치료 종결 후 최소 4주가 경과하였을 때 위내시경과 H. pylori 대변항원검사를 반복 실시하였다. H. pylori 대변항원검사는 OD값이 0.16 이상일 때 양성, 0.14~0.16 사이는 감염 미확정, 0.14 미만은 음성으로 판정하였다. 결과: 1) 제균 전 시행한 131회의 위내시경 조직검사 결과 28명이 H. pylori 양성이었고 나머지 103명은 H. pylori 음성이었다. 동시에 시행한 H. pylori 대변항원검사 결과에서 30명이 H. pylori 양성이었고, 101명이 음성으로 판정되었다. 따라서 제균요법 시행 전 H. pylori 대변항원검사의 민감도, 특이도, 양성 예측치, 음성 예측치는 각각 96.4%, 97.1%, 90% 그리고 99%이었다. 2) 제균요법 4주 후 33명의 환아에서 시행한 위내시경에 의한 조직검사에서 H. pylori는 24명에서 음성이었으나 9명은 여전히 양성이었다. 동시에 시행한 H. pylori 대변항원검사는 10명에서 양성, 23명에서 음성이었다. 따라서 제균요법 후 H. pylori 대변항원검사의 민감도, 특이도, 양성 예측치, 음성 예측치는 각각 88.9%, 91.7%, 80% 그리고 95.7%이었다. 결론: 소아에서 H. pylori 대변항원검사는 제균 후에도 높은 진단 정확도를 보였다. 따라서 H. pylori 대변항원검사는 소아에서 제균요법 후 균 박멸여부를 확인하는 데에도 매우 유용한 비침습적인 검사방법이라고 하겠다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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