We studied on the proteomic characteristics of Toxoplasma gondii KI-1 tachyzoites which were originally isolated from a Korean patient, and compared with those of the well-known virulent RH strain using 2-dimensional electrophoresis (2-DE), mass spectrometry, and quantitative real-time PCR. Two-dimensional separation of the total proteins isolated from KI-1 tachyzoites revealed up to 150 spots, of which 121 were consistent with those of RH tachyzoites. Of the remaining 29 spots, 14 showed greater than 5-fold difference in density between the KI-1 and RH tachyzoites at a pH of 5.0-8.0. Among the 14 spots, 5 from the KI-1 isolate and 7 from the RH strain were identified using MALDI-TOF mass spectrometry and database searches. The spots from the KI-1 tachyzoties were dense granule proteins (GRA 2,3,6, and 7), hypoxanthine-guanine-xanthine phosphoribosyltransferase (HGRPTase), and uracil phosphoribosyltransferase (UPRTase). The spots from the RH strain were surface antigen 1 (SAG 1), L-lactate dehydrogenase (LDH), actin, chorismate synthase, peroximal catalase, hexokinase, bifunctional dihydrofolate reductase-thymidylate synthase (DHTR-TS), and nucleosidetriphosphatases (NTPases). Quantitative real-time PCR supported our mass spectrometric results by showing the elevated expression of the genes encoding GRA 2,3, and 6 and UPRTase in the KI-1 tachyzoites and those encoding GRA 7, SAG 1, NTPase, and chorismate synthase in the RH tachyzoites. These observations demonstrate that the protein compositions of KI-1 and RH tachyzoites are similar but differential protein expression is involved in virulence.
Purpose: To examine the prevalence and clinical manifestations of eosinophilic esophagitis (EoE) in Korea children. Methods: The study was designed as a 1:2 matching case-control study. Using information from the endoscopic database of a tertiary center, we retrospectively reviewed the medical records of patients aged 18 years or younger who underwent upper gastrointestinal endoscopy between January 2014 and December 2017. A total of 21 patients were diagnosed with EoE based on current diagnostic criteria. In addition, 42 controls with normal esophageal biopsy findings matched to each EoE case by sex, age (±1 months), and season were randomly selected during the study period. Results: The mean age of EoE diagnosis was 12.1±4.0 years and the male-to-female ratio was 2:1. The proportion of allergic diseases in patients with EoE (28.6%) was higher than that in the controls (6.8%) (p=0.04). Most EoE patients tested for allergy were positive for at least one antigen, which was significantly different to the controls (88.2% vs. 47.4%, p=0.01). Characteristic endoscopic findings of EoE were noted in 19 patients (90.5%), but 2 patients (9.5%) showed normal esophageal mucosa. The clinical symptoms of EoE were improved by a proton-pump inhibitor in 10 patients (50.0%), and by an H2 blocker in 9 patients (45.0%). Only one patient (5.0%) required inhaled steroids. Conclusion: While EoE is rare in the Korean pediatric population, the results of this study will improve our understanding of the clinical manifestations of the disease.
The fruits of Foeniculum vulgare (Foeniculi Fructus) have been widely used in Chinese medicine as an antiemetic, ameliorating stomach ailments and as an analgesic. In order to establish its potential for antiallergic use, inhibitory actions of the fruit on 5-lipoxgenase (5-LOX) and ${\beta}$-hexosaminidase release were evaluated. The 70% ethanol extract of this plant material (FR) considerably inhibited 5-LOX-catalyzed leukotriene production from A23187-induced rat basophilic leukemia (RBL)-1 cells. The $IC_{50}$ was $3.2{\mu}g/ml$. From this extract, 12 major compounds including sabinene, fenchone, ${\gamma}$-terpinene, ${\alpha}$-pinene, limonene, p-anisylacetone, panisylaldehyde, estragole (4-allylanisole), trans-anethole, scopoletin, bergapten and umbelliferone were isolated. And it was found that several terpene derivatives including ${\gamma}$-terpinene and fenchone as well as phenylpropanoid, trans-anethole, showed considerable inhibitory action of 5-LOX. In particular, the $IC_{50}$ of trans-anethole was $51.6{\mu}M$. In contrast, FR and the isolated compounds did not show considerable inhibitory activity on the degranulation reaction of ${\beta}$-hexosaminidase release from antigen-treated RBL-2H3 cells. Against arachidonic acid-induced ear edema in mice, FR and trans-anethole showed significant inhibition by oral administration at doses of 100-400 mg/kg. In conclusion, FR and several major constituents are 5-LOX inhibitors and they may have potential for treating 5-LOX-related disorders.
KCSYJT medicines controlled $CD4^+/IFN-\gamma$, and $CD4^+/CD25^+/foxp3^+$ revelation that an experiment that motive allergy immune reponse because an in vitro experiment stimulates T cells of a NC/Nga mouse same time by anti-CD40/rmIL-4, and interleukin-$1{\beta}$, IL-6, TNF-$\alpha$, and TGF-$\beta$ mRNA outturn that bear in T and B cells decreased remarkably by KCSYJT medicines. Intracellular staining of splenocytes anti-CD40/rmIL-4 plus rmIL-4 stimulated as described in a, assessed after 24 h, KCSYJT exerts a mainly immunosuppressive effect that acts at least partially through suppression of the transcription factor GATA3 expression in $CD4^+$ T cells. We found that skin lesions, which were clinically and histologically very similar to human AD, mite antigen-induced dermatitis on the face, neck, ears and dorsal skin of inbred NC/Nga mice. Result that Th1 cell and Th2 cell observe to be shifted by cytokine expression with GATA3 regulation by KCSYJT medicines could know that KCSYJT medicines can use usefully in allergy autoimmnune diease.
Kim, Tae-Ho;Seo, Kyoung-Won;Lee, Young-Heun;Hwang, Cheol-Yong;Lee, Young-Won;Youn, Hwa-Young
Journal of Veterinary Clinics
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v.27
no.4
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pp.462-467
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2010
A Maltese (5-years old, castrated male) and a Yorkshire Terrier (8-years old, intact female) were referred to Seoul National University Hospital for Animals with ataxia, circling, depression and anorexia. It was suspected to meningoencephalitis of unknown etiology (MUE) based on neurological signs, magnetic resonance imaging findings, cerebrospinal fluid analysis and canine distemper virus antigen test. Immunosuppressive dose of corticosteroid was initially chosen to treat in two dogs. However, the clinical signs were relapsed and side effects had arisen including polyuria, polydipsia, calcinosis cutis, liver enzyme elevation, weight gain and abdominal distension. Combination therapy of cytosine arabinoside (CA) and prednisolone (PDS) was tried. With this combination, the clinical signs were resolved and the side effects were alleviated. The dose of PDS was tapered to 0.5 mg/kg q48h in one case and the PDS was discontinued in the other case. These cases suggested that combined CA and PDS therapy may be significantly useful for the treatment of MUE uncontrolled by PDS alone.
Poncirus trifoliata (L.) Raf (Rutaceae) fruits (PTFE) has been used for the treatment of allergic disease. IgE is normally one of the least abundant immunoglobulin (Ig) isotypes in the serum of both humans and several species of experimental animals: however a number of different stimuli can result in profound increases in IgE levels relative to other isotypes. In rodents, infection with many parasitic helminths can cause approximately 100-fold elevation in IgE within 2 wks. Immunization of mice with small amounts of protein antigens on alum also results in 10-fold to fold increase in total serum IgE, much of it specific for the immunizing antigen. In this experiment, I investigated the effect of an aqueous extract of Poncirus trifoliata (L.) Raf (Rutaceae) fruits (PTFE) on a in vivo and in vitro IgE production. PTFE dose-dependently inhibited the serum levels of IgE induced by antigens. The regulation of IgE synthesis is influenced by T cells and T cell derived factors. IL -4, a T cell-derived cytokine, has been shown to stimulate murine IgE synthesis both in vitro and in vivo. Current evidence suggests that IL-4 induces IgE synthesis in the mouse by stimulating H chain isotype switch. Lipopolysaccharide (LPS) plus IL-4 cause about l00-fold increase in IgE secretion by murine B cells. The effects of PTFE on the IL-4-dependent IgE response by mouse whole spleen cells were studied. Whole spleen cells were cultured for 7 days in the presence of LPS plus IL-4 and PTFE and the supernatants were assayed for IgE. IL-4 dependent IgE production of LPS-stimulated whole spleen cells was inhibited by PTFE. Moreover, in the present study using U266Bl human IgE-bearing B cells, I found that PTFE inhibited the production of IgE activated by LPS plus IL-4. These results indicate that PTFE have antiallergic activity by inhibition of IgE production from B cells.
The increased potential for vascular smooth muscle cell (VSMC) growth is a key abnormality in the development of atherosclerosis and post-angioplasty restenosis. Abnormally high activity of platelet-derived growth factor (PDGF) is believed to play a central role in the etiology of these pathophysiological situations. Here, we investigated the anti-proliferative effects and possible mechanism(s) of murrayafoline A, a carbazole alkaloid isolated from Glycosmis stenocarpa Guillamin (Rutaceae), on PDGF-BB-stimulated VSMCs. Murrayafoline A inhibited the PDGF-BB-stimulated proliferation of VSMCs in a concentration-dependent manner, as measured using a non-radioactive colorimetric WST-1 assay and direct cell counting. Furthermore, murrayafoline A suppressed the PDGF-BB-stimulated progression through $G_0/G_1$ to S phase of the cell cycle, as measured by [$^3H$]-thymidine incorporation assay and cell cycle progression analysis. This anti-proliferative action of murrayafoline A, arresting cell cycle progression at $G_0/G_1$ phase in PDGF-BB-stimulated VSMCs, was mediated via down-regulation of the expression of cyclin D1, cyclin E, cyclin-dependent kinase (CDK)2, CDK4, and proliferating cell nuclear antigen (PCNA), and the phosphorylation of retinoblastoma protein (pRb). These results indicate that murrayafoline A may be useful in preventing the progression of vascular complications such as restenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty and atherosclerosis.
Hepatitis B virus (HBV) is a major cause of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. With recent identification of HBV receptor, inhibition of virus entry has become a promising concept in the development of new antiviral drugs. To date, 10 HBV genotypes (A-J) have been defined. We previously generated two murine anti-preS1 monoclonal antibodies (mAbs), KR359 and KR127, that recognize amino acids (aa) 19-26 and 37-45, respectively, in the receptor binding site (aa 13-58, genotype C). Each mAb exhibited virus neutralizing activity in vitro, and a humanized version of KR127 effectively neutralized HBV infection in chimpanzees. In the present study, we constructed a humanized version (HzKR359-1) of KR359 whose antigen binding activity is 4.4-fold higher than that of KR359, as assessed by competitive ELISA, and produced recombinant preS1 antigens (aa 1-60) of different genotypes to investigate the binding capacities of HzKR359-1 and a humanized version (HzKR127-3.2) of KR127 to the 10 HBV genotypes. The results indicate that HzKR359-1 can bind to five genotypes (A, B, C, H, and J), and HzKR127-3.2 can also bind to five genotypes (A, C, D, G, and I). The combination of these two antibodies can bind to eight genotypes (A-D, G-J), and to genotype C additively. Considering that genotypes A-D are common, whereas genotypes E and F are occasionally represented in small patient population, the combination of these two antibodies might block the entry of most virus genotypes and thus broadly neutralize HBV infection.
Although little information is available on the underlying mechanisms, various genetic factors have been associated with tissue-specific responses to radiation. In the present study, we explored the possibility whether organ specific gene expression is associated with radiosensitivity using samples from brain, lung and spleen. We examined intrinsic expression pattern of 23 genes in the organs by semi-quantitative RT-PCR method using both male and female C57BL/6 mice. Expression of p53 and p21, well known factors for governing sensitivity to radiation or chemotherapeutic agents, was not different among the organ types. Both higher expression of sialyltransferase, delta7-sterol reductase, leptin receptor splice variant form 12.1, and Cu/Zn superoxide dismutase (SOD) and lower expression of alphaB crystalline were specific for spleen tissue. Expression level of glutathione peroxidase and APO-1 cell surface antigen gene in lung tissue was high, while that of Na, K-ATPase alpha-subunit, Cu/ZnSOD, and cyclin G was low. Brain, radioresistant organ, showed higher expressions of Na, K-ATPase-subunit, cyclin G, and nucleolar protein hNop56 and lower expression of delta7-sterol reductase. The result revealed a potential correlation between gene expression patterns and organ sensitivity, and Identified genes which might be responsible for organ sensitivity.
Park Jong-Sun;Cho Jae-Youl;Kim Sung-Soo;Bae Hyun-Jin;Han Jeung-Whan;Lee Hyang-Woo;Hong Sung-Youl
Archives of Pharmacal Research
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v.29
no.5
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pp.384-393
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2006
Protein carboxylmethylation methylates the free carboxyl groups in various substrate proteins by protein carboxyl O-methyltransferase (PCMT) and is one of the post-translational modifications. There have been many studies on protein carboxylmethylation. However, the precise functional role in mammalian systems is unclear. In this study, immunoglobulin, a specific form of $\gamma-globulin$, which is a well-known substrate for PCMT, was chosen to investigate the regulatory roles of protein carboxylmethylation in the immune system. It was found that the anti-BSA antibody could be carboxylmethylated via spleen PCMT to a level similar to $\gamma-globulin$. This carboxylmethylation increased the hydrophobicity of the anti-BSA antibody up to 11.4%, and enhanced the antigen-binding activity of this antibody up to 24.6%. In particular, the Fc region showed a higher methyl accepting capacity with 80% of the whole structure level. According to the amino acid sequence alignment, indeed, 7 aspartic acids and 5 glutamic acids, as potential carboxylmethylation sites, were found to be conserved in the Fc portion in the human, mouse and rabbit. The carboxylmethylation of the anti-BSA antibody was reversibly demethylated under a higher pH and long incubation time. Therefore, these results suggest that protein carboxylmethylation may reversibly regulate the antibody-mediated immunological events via the Fc region.
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