• 한국환경과학회지
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• 제28권2호
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• pp.249-257
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• 2019

Ulmus davidiana Nakai (UDN) has been traditionally used as a herbal medicine to treat inflammatory diseases in Korea. In the present study, we investigated the anti-ecotoxic potential of a 116 kDa glycoprotein isolated from UDN (UDN glycoprotein) in human intestinal epithelial INT-407 cells. We demonstrated that UDN glycoprotein ($20{\mu}g/mL$) could inhibit the production of lactate dehydrogenase (LDH) induced by toluene, an ecotoxic substance. Additionally, we found that the toluene-induced intestinal cytotoxicity was mediated by the phosphorylation of p38 Mitogen-Activated Protein Kinase (MAPK) via the production of intracellular Reactive Oxygen Species (ROS). The UDN glycoprotein significantly decreased the levels of ROS production and p38 MAPK activation in toluene-stimulated INT-407 cells. Moreover, the UDN glycoprotein inhibits the phosphorylation of nuclear factor-kappa B ($NF-{\kappa}B$), which is responsible for the production of LDH, in toluene-stimulated INT-407 cells. Collectively, our data indicate that UDN glycoprotein is a natural antioxidant and a modulator of ecotoxicity signaling pathways in human intestinal epithelial cells.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제35권2호
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• pp.118-122
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• 2017

Porcine pseudorabies virus (PRV) causes the Aujeszky's disease (AD) which is economically important disease in the swine industry worldwide. Killed or live vaccines have been used to control this disease, but their efficacy and side effects remain problems to be solved. To solve these problems, in this study, production of recombinant PRV glycoprotein gB, gC and gD was investigated in insect expression system. Glycoprotein gB, gC and gD are regarded as the major immunogenic antigens in PRV. Abundant production and immunogenicity of glycoprotein gB, gC and gD were confirmed by SDS-PAGE and Western blot analysis, respectively. Optimal infection dose and time were also determined for the production of each recombinant PRV glycoprotein. Confirmation of glycosylation of recombinant gB, gC and gD suggested their usefulness as antigens for the development of diagnosis kit or vaccines for Aujeszky's disease.

• 한국식품과학회지
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• 제41권1호
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• pp.93-99
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• 2009

꾸지뽕 당단백질이 간의 조직에 존재하는 항산화계 해독효소의 활성을 증가시켜서 $CCl_4$로 유도된 간독성화 과정에서 생성된 ROS에 의해 야기되는 산화적 스트레스를 억제하는 scavenger로서 기능을 가지고 있는 것으로 분석된다. 또한 혈청 중 LDH 활성증가는 간 및 기타조직의 질환 및 악성 종양 등에서 나타나는 소견으로 LDH를 내포한 조직이 파괴될 때 혈액으로 흘러나와 혈중 LDH가 상승하며, 혈액 중 지질과산화 반응은 생체조직막의 다가불포화지방산 유리기에 의해 산화적 분해를 일으키는 지표로 사용되는 TBARS의 수치, DNA 염기의 deamination 등을 유도함으로써, 유전자의 돌연변이(mutagenesis)로 인한 세포독성을 일으키는 NO 등의 수치가 유의적인 수준으로 억제될 뿐만 아니라, 염증 매개시 단백질인 NF-kB(p50)을 억제함으로써 $CCl_4$에 의한 간독성 과정에서 촉진된 염증 신호전달기전을 억제할 수 있었다. 따라서 꾸지뽕 당단백질은 탁월한 천연 항산화제로서 간의 독성 및 염증 반응을 억제하는 것으로 실험결과 분석된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제10권3호
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• pp.355-362
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• 2000

The Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) glycoprotein B (gB) gene in the pHLA-21 plasmid was inserted into a baculovirus (Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus) expression vector (lacZ-HcNPV) to construct a recombinant virus gB-HcNPV expressing gB. Spodoptera frugiperda cells infected with this recombinant virus synthesized and processed gB of approximately 120 kDa, which cross-reacted with the monoclonal antibody to gB. The recombinant gB was identified on the membrane of the insect cells using an immunofluorescence assay. Antibodies to this recombinant raised in mice recognize the viral gB and neutralized the infectivity of the HSV-1 in vitro. These results show that the gB gene has the potential to be expressed in insect cells. They also demonstrate that it is possible to produce a mature protein by gene transfer in eukaryotic cells, and indicate the utility of the lacZ-HcNPV-insect cell system for producing and characterizing eukaryotic proteins. Furthermore, the neutralizing antibodies would appear to protect mice against HSV. Accordingly, this particular recombinant protein may be useful in the development of a subunit vaccine.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제29권2호
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• pp.207-213
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• 2014

The structural proteins of classical swine fever virus (CSFV) consist of nucleocapsid protein C and envelope glycoprotein $E^{rns}$ (E0), E1 and E2. Among them, E2, the most immunogenic of the CSFV glycoproteins, induces a protective immune response in swine. In this study, to determine the optimal expression conditions of glycoprotein E2 using baculovirus system, we investigated the influence of insect cells and media to the expression of recombinant E2. Recombinant virus containing glycoprotein E2 coding gene was constructed with bApGOZA DNA. Expression of the glycoprotein E2 was analyzed by SDS-PAGE and Western blot analysis using anti-CSFV E2 monoclonal antibodies. Expression of glycoprotein E2 in Sf21 cells was first observed after 3 days and reached a maximum on the 5th day after infection. Furthermore, the highest levels of glycoprotein E2 expression were observed at multiplicity of infection (MOI) of 5. When three different insect cell lines (Sf21, High-Five and Se301) were tested, High-Five cells showed the highest production. In addition, four different serum-free and serum-supplemented media, respectively, were tested for the expression of glycoprotein E2 and the budded virus (BV) titers. As a result, serum-supplemented medium provided the best conditions for protein production and the BV yield.

• Toxicological Research
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• 제27권3호
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• pp.167-172
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• 2011

We demonstrate that glycoprotein isolated from Dioscorea batatas (GDB) activates macrophage function. Analysis of the infiltration of macrophages into peritoneal cavity showed GDB treatment significantly increased the recruitment of macrophages into the peritoneal cavity. In order to further confirm and investigate the mechanism of GDB on macrophage activation, we analyzed the effects of GDB on the cytokine expression including IL-$1{\beta}$, TNF-${\alpha}$, and IL-6 in mouse peritoneal macrophages. GDB increased the expression of IL-$1{\beta}$, TNF-${\alpha}$, and IL-6. Cytokine induction by GDB was further confirmed by RT-PCR and ELISA in mouse macrophage cell line, RAW264.7 cells. Treatment of RAW264.7 cells with GDB produced strong induction of NF-${\kappa}B$ DNA binding and MAPK phosphorylation, markers for macrophage activation and important factors for cytokine gene expression. Collectively, this series of experiments indicates that GDB stimulates macrophage activation.

• 한국식품과학회지
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• 제39권2호
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• pp.209-216
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• 2007

본 연구에서는 뽕잎 당단백질의 활성을 알아보기 위하여 뽕잎 당단백질의 안정성 및 특성을 알아보고, hydroxyl 라디칼, superoxide anion 라디칼, DPPH 라디칼 등의 활성 산소종에 대한 항산화 효과를 살펴보았다. 또한 Raw 264.7 세포에 환경호르몬의 일종인 BPA와 뽕잎 당단백질(32 kDa)을 함께 처리 하여, 뽕잎 당단백질의 활성산소종과 NO의 소거 능력뿐만 아니라 염증 매개성 단백질들 [$NF-{\kappa}B(p50)$와 iNOS]의 활성 억제능력 대하여 평가하였다. 뽕이 당단백질은 금속이온에는 다소 약하지만 온도와 pH에는 안정적인 특징을 지니고 있었으며, 탁월한 hydroxyl 라디칼, superoxide anion 라디칼, DPPH 라디칼 소거 능력을 가지고 있었다. 이러한 항산화 능력을 지닌 뽕잎 당단백질을 BPA와 함께 Raw 264.7 세포에 처리한 결과, BPA만 처리된 Raw 264.7 세포의 활성 산소종 양은 8시간째에, 그리고 NO 양은 24시간째에 현저히 증가한데 반해, BPA와 함께 뽕잎 당단백질을 처리한 Raw 264.7 세포에서는 같은 시간 동안에 농도에 비례하여 활성 산소종 및 NO양이 유의적으로 감소한 것을 알 수 있었다. 또한 8시간 동안 BPA처리에 의해 활성화된 Raw 264.7 세포의 $NF-{\kappa}B(p50)$와 iNOS 단백질들은 함께 처리한 뽕잎 당단백질의 농도에 비례하여 현저히 억제되었다. 따라서, 이러한 결과를 종합해 보면, 뽕잎 당단백질은 높은 안정성과 강력한 항산화 효과를 가지고 있었으며, 이러한 항산화 효과가 환경 호르몬(BPA)에 의한 활성산소종 및 NO 생성을 저해할 뿐만 아니라, $NF-{\kappa}B(p50)$와 iNOS의 활성을 억제함으로써 Raw 264.7 세포의 염증 신호전달을 막는데 영향을 끼쳤을 것으로 생각 된다.

• 한국동물학회지
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• 제32권4호
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• pp.337-350
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• 1989

본 연구에서는 SDS/polyacrylamide젤 전기영동과 2차원 전기영동을 사용하여 Gerris paludum(소금쟁이)의 난 형성 동안 난소 단백질과 혈림프 단백질을 비교하였다. 또한 난물질의 구성성분인 glycoprotein의 양상을 살펴 보았다. 결과는 다음과 같다. 난을 갖지 않는 5령의 난소 단백질의 양상을 성체의 산란 무 난소 단백질 퍼턴과 유사하였다. 난 발달동안의 난소의 단백질중 M.W 66,000-110,000 사이의 단백질이 난을 갖지 않은 난소 단백질에 비해 많은 양이 존재하였다. 난을 갖지 않은 난소에서는 glycoprotein은 나타나지 않았다. glycoprotein은 5령의 난 발달이 진행됩에 따라 점차적으로 증가하였다. 산란후 성체의 난소에서는 5령의 난을 갖지 않는 난소에서처럼 glycoprotein은 나타나지 않았다. 또한, M.W 66,000-110,000 사이의 혈림프 단백질은 5령의 난 형성 동안 양적으로 증가하였다. 이러한 결과는 난소 단백질 중 일부를 혈림프로부터 얻을 것이라는 사실을 제시하는 것이다. 발달하고 있는 난의 glycoprotein은 이 단계의 혈림프에서도 점차 증가하였다. 낮은 분자 영역에서 하나의 band (M.W. 9,500)가 난을 갖지 않는 5령과 성체의 혈림프에서 분리되었다. 이 단백질은 고분자량의 영역(M.W. 66,000-110,000)에서 나타나는 glycoprotein 전구체라고 생 각된다. 2차원 전기영동에서는 난을 갖지 않은 난소 단백질이 난을 가지고 있는 난소 단백질에 비해 적은 spots로 분리되었고 그 양도 적었다. M.W 45,000-110,000 사이의 band들은 2차원 전기영동에서 산성쪽으로 분리되어 나타났다. 특히, M.W. 102,000의 분자량을 가지는 band는 4개의 spots bl, b2, b3 및 b4로 분리되었다. 반면에 M.W 24,000이하의 단백질들은 산성쪽의 단백질보다 염기성쪽으로 분리되었다. Gepris paludum의 난황 형성과정에 있어서 세포내 기관(= 세포 소기관)의 기작이 난세포의 난황단백질 합성과 관계를 가지고 있었다.

• KSBB Journal
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• 제16권6호
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• pp.547-553
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• 2001

본 연구에서는 민방이나 한방에서 천연 약재로 많이 사용하고 있는 느릅나무 뿌리껍질(유근피)로부터 수용액 추출물을 분리하여 이 중 단백다당체를 분리하여 성분분석 및 단백다당체가 갖고 있는 면역활성에 의한 항암효과를 실험적으로 제시하였다. 느릅나무 추출물 당단백질의 화학적 조성을 보면 총당함량은 55.8∼72.1%였고, 총산성당 함량은 30.0∼30.5%, 총단백질 함량은 5.0∼6.1%으로 수용성 고분자이며, 50 내지 500 kDa 범위의 분자량을 나타내었다. 그리고, 단백다당체를 구성하는 주요 당성분으로는 글루크론산, 람노스아라비노스, 글루코스, 갈락토스 등이었다. 단백다당체의 면역활성 검정에 따르면 면역세포의 증식을 자극하는 mitogen 역할을 하며, 특히 T세포에 의한 면역증강 효과를 나타내었다 B16 흑색종 이식 마우스를 이용한 생체내 면역활성에 의한 항암효과를 조사한 결과 유의성 있는 항암효과를 나타내었으며, 느릅나무 추출물인 단백다당체가 3mg/kg 군에서 가장 강한 항암효과를 나타내어 용매대조군에 대해 약 140% 생존연장효과를 나타내었다.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제30권6호
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• pp.540-545
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• 2022

Betulin is a triterpenoid natural product contained in several medicinal plants including Betulae Cortex. These medicinal plants have been used for controlling diverse inflammatory diseases in folk medicine and betulin showed anti-inflammatory, antioxidative, and anticancer activities. In this study, we tried to examine whether betulin exerts a regulative effect on the gene expression of MUC5AC mucin under the status simulating a pulmonary inflammation, in human airway epithelial cells. Confluent NCI-H292 cells were pretreated with betulin for 30 min and then stimulated with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) for 24 h or the indicated periods. The MUC5AC mucin mRNA expression and mucin glycoprotein production were measured by reverse transcription - polymerase chain reaction (RT-PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), respectively. To elucidate the action mechanism of betulin, effect of betulin on PMA-induced nuclear factor kappa B (NF-kB) signaling pathway was also investigated by western blot analysis. The results were as follows: 1) Betulin significantly suppressed the production of MUC5AC mucin glycoprotein and down-regulated MUC5AC mRNA expression induced by PMA in NCI-H292 cells. 2) Betulin inhibited NF-κB activation stimulated by PMA. Suppression of inhibitory kappa B kinase (IKK) by betulin led to the inhibition of the phosphorylation and degradation of inhibitory kappa B alpha (IκBα), and the nuclear translocation of NF-κB p65. This, in turn, led to the down-regulation of MUC5AC glycoprotein production in NCI-H292 cells. These results suggest betulin inhibits the gene expression of mucin through regulation of NF-kB signaling pathway, in human airway epithelial cells.