• 한국어병학회지
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• 제28권1호
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• pp.27-35
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• 2015

Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV)는 세계적으로 담수와 해산어에 심각한 경제적 손실을 야기시키는 주요바이러스이다. 이매패류는 감염어로부터 해수로 방출된 바이러스를 여과섭식작용을 통해 축적하는 것으로 알려져 있어 carrier로써의 가능성이 보고된 바 있으므로. 본 연구에서는 이를 확인하기 위해 국내 어류 양식장 주변에 서식하는 참굴(Crassotrea gigas)과 담치(Mytilus edulis)를 샘플링하였고, RT-PCR법을 통해 바이러스를 검출하여 패류 내 VHSV존재를 확인하였다. 기존 병성감정기관에서 사용하는 primer로는 IVa genotype만을 검출할 수가 있었기 때문에 Glycoprotein(G) gene의 conserved region에 대한 primer를 제작하여 VHSV의 4가지 타입 모두 검출할 수 있게 하였고 이를 본 연구에 사용하였다. 총 84개 중 22개의 시료가 nested PCR을 통해 양성으로 확인되었고, 이 중 6개의 양성시료를 시퀀싱하여 유전학적 분석을 실시하였다. 그 결과 국내 여러 지역의 패류에서 검출된 VHSV는 모두 IVa genotype으로 아주 제한적인 결과를 보여주었으며, 이는 국내 어류에게 질병을 일으키는 VHSV의 타입은 IVa genotype이라는 이전의 보고와 상응하는 결과를 나타냈다고 할 수 있다. 결론적으로 본 연구에서는 양식장 주변에 서식하는 이매패류의 여과섭식작용으로 인한 축적되는 바이러스로 인한 전염가능성과 패류 내 존재하는 바이러스와 어류에서 질병을 발생시키는 바이러스와의 상호관계를 조사하였으며, 향후 다른 genotype의 유입 및 검출을 위한 연구는 계속적으로 필요하다고 생각된다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1995년도 제3회 추계심포지움
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• pp.107-113
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• 1995

Basement membrane laminin is a multidomain glycoprotein that interacts with itself, heparin and cells. The distal long arm plays major cell and heparin interactive roles. The long arm consists of three subunits (A, B1, B2) joined in a coiled-coil rod attached to a terminal A chain globule (G). The globule is in turn subdivided into five subdomains (Gl-5). In order to analyze the functions of this region, recombinant G domains (rG, rAiG, rG5, rGΔ2980-3028) were expressed in Sf9 insect cells using a baculovirus expression vector. A hybrid molecule (B-rAiG), consisting of recombinant A chain(rAiG) and the authentic B chains (E8-B)was assembled in vitro. The intercalation of rAiG into E8-B chains suppressed a heparin binding activity identified in subdomain Gl-2. By the peptide napping and ligand blotting, the relative affinity of each subeomain to heparin was assigned as Gl> G2= G4> G5> G3, such that G1 bound strongly and G3 not at all. The active heparin binding site of G domain in intact laminin appears to be located in G4 and proximal G5. Cell binding was examined using fibrosarcoma Cells. Cells adhered to E8, B-rAiG, rAiG and rG, did not bind on denatured substrates, poorly bound to the mixture of E8-B and rG. Anti-${\alpha}$6 and anti-${\beta}$1 integrin subunit separately blocked cell adhesion on E8 and B-rAiG, but not on rAiG. Heparin inhibited cell adhesion on rAiG, partially on B-rAiG, and not on E8. In conclusion, 1) There are active and cryptic cell and heparin binding activities in G domain. 2) Triple-helix assembly inactivates cell and heparin binding activities and restores u6131 dependent cell binding activities.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권4호
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• pp.232-239
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• 1991

Caboxymethyl cellulase (CMCase) I was purified from the induced culture filtrate of Penicllium verruculosum F-3 by ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-50 chromatography and Bio-gel P-150 filtration. The purified enzyme was assumed to be a glycoprotein consisting of 8.5% carbohydrate and having a molecular weight of 70.000 in SDS-polycrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The purified enzyme-specific anti-CMCase I IgG was obtained by rabbit immunization and protein A-sepharose CL-4B chromatography. The fungal poly($A^+$) RNA was isolated from the total RNA of the mycelium grown under cellulase induction conditions by oligo(dT)-cellulosse chromatography. The translation products in vitro were prepared by translating the isolated poly ($A^+$) RNA in rabbit reticulocyte lysate and analyzed by SDS-PAGE and fluorography. Of the translation products, CMCase I was identified by the immunoprecipitation against anti-CMCase I IgG.

• BMB Reports
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• 제31권6호
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• pp.548-553
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• 1998

A minor anionic isoperoxidase named $A_{3n}$, was isolated from Korean radish (Raphanus sativus L.) root. Purification of the enzyme was accomplished by CMcellulose chromatography, DEAE-Sephacel chromatography, and Sephadex G-75 gel filtration. The enzyme was a glycoprotein with molecular weight of approximately 31,000 as determined by SDS-PAGE and 33,000 by Sepadex G-150 gel filtration, which is by far the smallest among the reported isoperoxidases. The pI value was 3.5. The optimum pH of the enzyme was 6.5 for guaiacol and $H_2O_2$, and the $K_m$ values for guaiacol and $H_2O_2$ were 13.3 mM and 1.5 mM, respectively. Kinetic studies with various substrates revealed that only A3n, unlike other isoperoxidases from radish, did not use scopoletin as a substrate and had very low $K_m$ value of 0.25 mM for ferolic acid among naturally occurring phenolic substrates.

• 한국가금학회:학술대회논문집
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• 한국가금학회 2003년도 제20차 정기총회 및 학술발표회
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• pp.95-96
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• 2003

본 연구에서는 VSV-G(vesicular stomatitis virus G glycoprotein)로 포장된 MoMLV(Moloney murine leukemia virus) retrovirus vector system을 이용하여 GFP가 발현되는 형질전환 닭을 생산하고자 하였다. GFP 유전자를 retroviral vector 내의 RSV(Rous sarcoma virus) promoter의 조절 하에 도입한 후, Gp293 세포주에서 virus 형태로 생산하였으며, 이 virus를 초원심분리로 고농축하여 stage X 계란의 배 반엽 층에 주입하여 GFP가 발현되는 형질전환 닭을 생산하였다. 생산된 닭에서의 GFP의 발현은 epifluorescence stereomicroscope를 이용하여 확인하였다. 이 방법은 기존의 여러 형질전환 가금 방법에 비하여 기술적인 용이성과 경제성을 가지므로(Muramatsu, Park and Okumura 1998), 매우 효율적이고 주목할 만한 형질전환 가금 생산 방법으로 사료된다. 형질전환 가금의 생산에서 retrovirus vector를 이용하는 방법은 다양한 종류의 표적세포에 대하여 retrovirus 고유의 감염성에 의한 외래 유전자의 전이가 용이하고, 전이된 유전자가 진정염색질 영역 내로 선택적으로 도입될 수 있으며 유전적으로 안정성을 나타내므로 매우 효과적인 방법이다. 그러나 가금에서는 초기 배 발달에 의한 급격한 세포의 수적 증가로 인해 고감염성 virus의 획득이 요구되므로, 본 연구에서는 virus의 농축에 있어 보다 안정적이고 숙주 범위에 있어서 pantropic한 VSV-G에 기반을 둔 retrovirus vector system을 확립하였다. 이 system은 기존의 형질전환 닭의 생산방법에 비해 외래 유전자의 전이에 있어서 매우 효과적인 것으로 확인되었으며, 또한 여러 유용한 생리활성물질을 분비하는 형질전환 동물의 생산에 있어서 상당한 기여를 할 것으로 사료된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제58권2호
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• pp.135-141
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• 2005

배경 및 목적 : Multidrug Resistance-1 (MDR1) 유전자는 다약제내성에 관여하는 P-glycoprotein을 암호화한다. MDR1 유전자의 다형성은 P-glycoprotein의 발현과 기능의 차이를 일으켜 항암화학요법 반응에 영향을 미칠 수 있을 것이다. 저자들은 소세포폐암 환자에서 MDR1 유전자의 다형성과 일배체형에 따른 항암화학요법에 대한 반응을 조사하였다. 대상 및 방법 : 경북대학병원에서 병리적으로 소세포폐암으로 진단받고 etoposide-cisplatin 항암화학요법을 받은 54명을 대상으로 하였다. 전혈 5cc에서 DNA를 추출하고 PCR-RFLP법을 통해 MDR1 유전자 엑손 21의 2677G>T 다형성과, 엑손 26의 3435C>T 다형성을 조사하고 다형성과 일배체형에 따른 항암화학요법의 반응을 조사하였다. 결 과 : 2677G>T 유전자형에 따른 항암화학요법의 반응은 유의한 차이가 없었다. 3435 CC 유전자형은 3435 CT+TT 형에 비해 치료 반응율이 유의하게 높았다 (P = 0.025). 유전자형 분석 결과와 일치되게 2677G/3435C 일배체형은 다른 일배체형에 비해 치료반응을 보이는 경우가 유의하게 많았다 (P = 0.015). 결 론 : 소세포폐암에서 MDR1 유전자의 2677G>T와 3435C>T 다형성 및 이들 다형성의 일배체형은 etoposide-cisplatin 항암화학요법의 반응을 예측할 수 있는 지표로 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

• 한국어병학회지
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• 제11권2호
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• pp.129-136
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• 1998

1997년 3월 전라남도 및 경상남도의 해산어 육상 및 가두리 양식장에서 양성 중이던 넙치가 HRV(hirame rhabdovirus, Rhabdovirus olivaceus) 감염증과 유사한 증상을 나타내어 그 원인을 조사한 결과 새로운 rhabdovirus가 분리 되었다. 분리 바이러스(DF-9708)는 RTG-2 및 EPC 세포주에서 $15^{\circ}C$로 배양하였을 때 랩도바이러스 특유의 세포변성효과(CPE)를 나타내었으나 CHSE-214에서는 증식되지 않았다. 투과전자현미경으로 감염 세포내의 바이러스 입자 형태를 관찰해본 결과 bullet-shape의 크기 $70nm{\times}100\sim150nm$으로 인벨롭을 가진 바이러스였다. 분리바이러스는 pH 3 및 diethyl ether의 처리 조건에서는 감염성을 상실하였고, 열($50^{\circ}C$ 5 min, $60^{\circ}C$ 1 min)에도 약한 성상을 나타내었다. DNA 저해제인 IUdR $10^{-4}$M 처리에 의해서는 바이러스 감염가에 영향을 받지 않았다. 분리 바이러스는 Anti-HRV(8401-H) rabbit serum에 의해서만 중화 되었고, 전염성 조혈기 괴사증 바이러스(IHNV), 연어과 레오바이러스(CSV), 바이러스성 선회병 바이러스(RVS) 및 전염성 췌장괴사증 바이러스(IPNV) 등의 국내에서 분리되어지는 바이러스 항체로는 중화되지 않았다. 초원심법으로 정제한 분리 바이러스를 전기영동 한 결과 polymerase(L), glycoprotein(G), nucleoprotein(N) 및 2개의 matrix proteins(M1 및 M2)으로 구성되어져 있었으며, 각 단백질의 분자량은 L, 160 kDa; G, 55 kDa; N, 45 kDa; M1, 26 kDa; M2, 22 kDa의 크기로 계산되었다. 새롭게 분리된 바이러스는 외부증상으로는 기존의 HRV 감염과 유사한 점을 나타내었으나 그 바이러스학적 특성에 있어 약간의 차이점이 있어 본 분리바이러스를 우선 Nubchi rhabdovirus(NRV)(HRV-like)로 부르기로 한다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제32권3호
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• pp.159-166
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• 2008

본 연구는 vesicular stomatitis virus G glycoprotein (VSV-G)으로 피막이 형성되는 replication-defective MoMLV-based vector를 이용한 hTPO 헝질전환 닭의 생산에 관한 연구이다. 실험에 사용한 retrovirus vector의 구조는 hTPO 유전자의 발현 조절을 위해 internal promoter인 hCMV promoter를 이용하였으며 외래 유전자의 발현을 증가시키기 위해 woodchurk hepatitis virus posttranascriptional regulatory element (WPRE) 서열을 도입하였다. 재조합한 vector는 GP2 293 포장세포에 도입하여 virus를 생산하였으며 이 virus를 이용하여 감염시킨 여러 표적세포에서 hTPO의 발현과 생물학적 활성을 확인하였다. 재조합 hTPO의 생물학적 활성은 시판되고 있는 재조합 hTPO에 비해 우월한 것으로 확인되었다. hTPO 형질전환 닭의 생산을 위하여 1,000배 이상 고농도로 농축된 virus를 stage X 단계의 계란의 배반엽 층에 미세주입하여 대리난각 방법으로 배양하였다. 미세주입한 132개의 계란 중 21일 후에 11개의 계란에서 병아리가 부화하였으며 그중 4마리가 형질전환 개체로 확인되었다. 그러나 생산된 4마리 중 3마리가 부화 후 1개월 이내에 원인불명으로 사망하였다. 본 연구의 의의는 상업적 이용 가능성이 있는 생물학적 활성을 가진 사람의 cytokine 단백질의 대량 생산을 위한 생체 반응기로서의 형질전환 닭 개발의 시례를 제공하는데 있다.

• 한국동물위생학회지
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• 제44권2호
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• pp.73-83
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• 2021

Although many swine farms continuously vaccinated to sow to prevent Porcine epidemic diarrhea(PED), PED has occurred annually in swine herds in Jeonbuk province, Korea. In the present study, the small intestine and feces samples from 17 farms where severe watery diarrhea and death of newborn piglets occurred in 2019 were collected, amplified by RT-PCR and determined the complete nucleotide sequences of the spike (S) glycoprotein genes of nine Jeonbuk PEDV isolates. The spike (S) glycoprotein is an important determinant for molecular characterization and genetic relationship of PEDV. These nine complete S gene isolates were compared with other PEDV reference strains to identify the molecular diversity, phylogenetic relationships and antigenicity analysis. 9 field strains share 98.5~100% homologies with each other at the nucleotide sequence level and 97.3~100% homologies with each other at the amino acid level. The nine Jeonbuk PEDV isolates were classified into G2b group including a genetic specific signal, S-indels (insertion and deletion of S gene). In addition, comparisons the neutralizing epitopes of S gene between 9 field strains and domestic vaccine strains of Korea mutated 12-15 amino acids with SM-98-1 (G1a group) and mutated 0-3 amino acids with QIAP1401 (G2b group). Therefore, the development of G2b-based live vaccines will have to be expedited to ensure effective prevention of endemic PED in Korea. In addition, we will need to be prepared with periodic updates of preventive vaccines based on the PEDV variants for the re-emergence of a virulent strain.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제5권2호
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• pp.136-140
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• 2000

A sensitive and quantiative method for the structural analysis of oligosaccharide was established for the glycoform analysis of glconproproteins. Inthis study, n-linked oligosaccharides of human IgG and bovine transferin were analyzed for the evaluation of the methydrate moiety ofthe method. Chrbohydrate moiety of glycoprotein was relased by hydrazinolysis and purified by paper chromatography. The oligosaccharides were labeled with a fluorescent bye, 2-aminobenzamide, for the enhancement of detection sensitivity. sialylated (acidic) oligosaccharides were separated from neutral oligosaccharide by employing a strong anion-exchange column(MonoQ) followed by the treatment with sialidase. Enzymatically desiayated fractions and neutral fractions of oligosaccharides were applied to normal-phase HPLC to resolve the peaks according to glucose unit (GU). The structure of separated molecules was further determined by sequential digestion with exoglycosidases. As a result, disialylated biantennary complextype oligosaccharide was found to be a major sugar chain in bovine transferrin (63%). In human IgG, core fucosylated asialobiantennary complex oligosaccharides were dominant. These results coincided well with reported results.