A biocontrol bacterium Bacillus licheniformis N1 grown in nutrient broth showed no chitinolytic activity, while its genome contains a gene which encodes a chitinase. The gene for chitinase from B. licheniformis N1 was amplified by PCR and the deduced amino acid sequence analysis revealed that the chitinase exhibited over 95% identity with chitinases from other B. licheniformis strains. Escherichia coli cells carrying the recombinant plasmid displayed chitinase activity as revealed by the formation of a clear zone on chitin containing media, indicating that the gene could be expressed in E. coli cells. Chitinase gene expression in B. licheniformis N1 was not detected by RT-PCR analysis. The protein was over-expressed in E. coli BL21 (DE3) as a glutathione S-transferase fusion protein. The protein could also be produced in B. subtilis 168 strain carrying the chitinase gene of N1 strain. The crude protein extract from E. coli BL21 carrying GST fusion protein or culture supernatant of B. subtilis carrying the chitinase gene exhibited enzyme activity by hydrolyzing chitin analogs, 4-methylumbelliferyl-$\beta$-D-N,N'-diacetylchitobioside and 4-methylumbelliferyl-$\beta$-D-N,N',N"-triacetylchitotrioside. These results indicated that even though the chitinase gene is not expressed in the N1 strain, the coding region is functional and encodes an active chitinase enzyme. Furthermore, B. subtilis 168 transformants expressing the chitinase gene exhibited antifungal activity against Fulvia fulva by suppressing spore germination. Our results suggest that the proper engineering of the expression of the indigenous chitinase gene, which will lead to its expression in the biocontrol strain B. licheniformis N1, may further enhance its biocontrol activity.
Sohn, Eun Jeong;Shin, Min Jea;Kim, Dae Won;Son, Ora;Jo, Hyo Sang;Cho, Su Bin;Park, Jung Hwan;Lee, Chi Hern;Yeo, Eun Ji;Choi, Yeon Joo;Yu, Yeon Hee;Kim, Duk-Soo;Cho, Sung-Woo;Kwon, Oh Shin;Cho, Yong-Jun;Park, Jinseu;Eum, Won Sik;Choi, Soo Young
BMB Reports
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제49권7호
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pp.382-387
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2016
Reactive oxygen species generated under oxidative stress are involved in neuronal diseases, including ischemia. Glutathione S-transferase pi (GSTpi) is a member of the GST family and is known to play important roles in cell survival. We investigated the effect of GSTpi against oxidative stress-induced hippocampal HT-22 cell death, and its effects in an animal model of ischemic injury, using a cell-permeable PEP-1-GSTpi protein. PEP-1-GSTpi was transduced into HT-22 cells and significantly protected against H2O2-treated cell death by reducing the intracellular toxicity and regulating the signal pathways, including MAPK, Akt, Bax, and Bcl-2. PEP-1-GSTpi transduced into the hippocampus in animal brains, and markedly protected against neuronal cell death in an ischemic injury animal model. These results indicate that PEP-1-GSTpi acts as a regulator or an antioxidant to protect against oxidative stress-induced cell death. Our study suggests that PEP-1-GSTpi may have potential as a therapeutic agent for the treatment of ischemia and a variety of oxidative stress-related neuronal diseases.
The hepatitis C virus is associated with the development of liver cirrhosis and hepatocellular carcinomas. Among the 10 polyproteins produced by the virus, no function has been clearly assigned to the non-structural 5A (NS5A) protein. This study was designed to identify the hepatocellular proteins that interact with NS5A of the HCV. Yeast two-hybrid experiments were performed with a human liver cDNA prey-library, using five different NS5A derivatives as baits, the full-length NS5A (NS5A-F, amino acid (aa) 1~447) and its four different derivatives, denoted as NS5A-A (aa 1~150), -B (aa 1~300), -C (aa 300~447) and D (aa 150~447). NS5A-F, NS5A-B and NS5A-C gave two, two and 10 candidate clones, respectively, including an AHNAK-related protein, the secreted frizzled-related protein 4 (SFRP4), the N-myc downstream regulated gene 1 (NDRG1), the cellular retinoic acid binding protein 1 (CRABP-1), ferritin heavy chain (FTH1), translokin, tumor-associated calcium signal transducer 2 (TACSTD2), phosphatidylinositol 4-kinase (PI4K) and $centaurin{\delta}$ 2 ($CENT{\delta}2$). However, NS5A-A produced no candidates and NS5A-D was not suitable as bait due to transcriptional activity. Based on an in vitro binding assay, CRABP-1, PI4K, $CENT{\delta}2$ and two unknown fusion proteins with maltose binding protein (MBP), were confirmed to interact with the glutathione S-transferase (GST)/NS5A fusion protein. Furthermore, the interactions of CRABP-1, PI4K and $CENT{\delta}2$ were not related to the PXXP motif (class II), as judged by a domain analysis. While their biological relevance is under investigation, the results contribute to a better understanding of the possible role of NS5A in hepatocellular signaling pathways.
감초 세근의 추출물 및 glycyrrhizin과 그 효소분 해물의 생리활성 실험에서, 전체적으로 추출물의 효과가 단일 물질인 glycyrrhizin과 그 효소분해물보다 좋았으며 특히 에탄을 추출물의 효과가 더 좋았다. 여러 인간 암세포 성장저해 실험에서는 추출물 및 glycyrrhizin과 그 효소분해물은 모두 1.0 mg/ml의 농도에서 50%이상의 억제율을 보였으며, 특히 추출물들이 더 좋은 억제율을 나타내었다. 돌연변이 유발 억제실험에서는 물 : 에탄올(1 : 1 v/v) 추출물이 약 50% 억제 효과를 나타내었으며, 면역기능 실험에서 에탄을 추출물이 1.0 mg/ml의 농도에서 B세포는 1.3배, T세포는 1.2배의 촉진 활성을 보였다. 혈당강하실험에서는 물 추출물이 1.0 mg/ml의 농도에서 68%, 에탄을 추출물 65%, 물 : 에탄올(1 : 1 v/v) 추출물이 62%의 높은 활성을 보였으며 glycyrrhizin과 그 효소분해물은 40% 이상의 효과를 보였다. GST활성은 1.0 mg/ml의 농도에서 에탄을 추출물이 257%, 물 추출물 239%, 물 :에탄올(1 : 1 v/v) 추출물은 231%의 높은 생리 활성능을 보였으며 glycyrrhizin과 그 효소분해물도 200%이상의 좋은 효과를 보였다. 이상의 결과로 볼 때 추출열과 추출용매 등에 의해 감초에서 분해된 여러 가지 monomer들이 풍부하게 존재하는 crude 추출물들의 생리활성이 glycyrrhizin과 그 효소분해물보다 더 좋은 효과를 보였다는 것을 알 수가 있었으며 이러한 추출물에 대한 연구가 더 필요하다고 하겠다.
본 연구는 칡청국장 및 칡청국장 캡슐함유 식이가 체중, 지방축적, 지질대사 등에 미치는 효능을 알아보기 위하여 선천성 비만 및 인슐린 비의존성 당뇨병의 모델동물인 ob/ob 마우스를 대상으로 정상대조군(NC: 일반식이군), 양성대조군(PC: 2% 청국장함유군), 칡청국장 2% 함유군(AR: 2% 칡청국장), 칡청국장 캡슐군(ARC: 2% 칡청국장 캡슐함유)으로 나누어 10주간 실험하였다. 체중 및 식이효율은 칡청국장 캡슐군에서 정상대조군에 비하여 유의하게 감소하였다. 혈청 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, 중성지방, 혈당 및 동맥경화지수는 칡청국장 캡슐군에서 정상대조군에 비하여 유의하게 감소하였다. 칡청국장 캡슐군에서 지방간의 전형적인 지방축적의 억제효과를 보였다. 간조직의 SOD, CAT, GST 활성은 칡청국장 캡슐군에서 정상대조군에 비하여 유의하게 증가하였다. 이에 칡 추출물 청국장 및 캡슐형태의 투여는 지방함량의 저하효과, 혈당강하효과, 항산화계의 활성도 증가 등의 효과를 통하여 항비만기능이 있으며, 칡청국장 캡슐형의 기능성이 높다는 사실을 확인할 수 있었다.
Background and Objectives: Individual genetic susceptibilities to chemical carcinogens have been recognized as a major important host factors in human cancers. The cytochrome P450 family (CYPs) and glutathione S-transferase(GST) have been reported to be associated with risks to the smoking-related human cancers. Inactivation of tumor suppressor genes like p53 playa key role in tumor progression. The purpose of this study is to demonstrate an association between p53 overexpression and the prevalence of the genetic polymorphisms of CYP1A1 and GSTs in Korean head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Materials and Methods: The polymorphisms of CYPIA1 and GSTs were analyzed by PCR and PCR-RFLP in 98 Korean head and neck squamous cell carcinoma patients. The expression of p53 was analyzed by immunohistochemistry with anti-p53 Ab (DO7). Results: Overexpression of p53 detected in 45.9% of HNSCC. The odds ratio for p53 overexpression in GSTM1(-), GSTT1(-), GSTP1(val/val) and CYP1A1(val/val) were 1.53, 1.83, 1.17 and 1.47, respectively. Among the combined genotypes, the odds ratio of the CYP1A1 val/val, GSTM1 (-), CYP1A1 val/val, GSTT1(-), and CYP1A1 val/val, GSTT1(-) were 2.0, 2.34 and 4.68, respectively. Conclusion: Based on our results, it might be suggested that p53 overexpression is slightly increased in GSTM1(-), GSTT1(-), GSTP1 val/val, CYP1A1 val/val genotypes. The further study is needed to evaluate the relationship and mechanism between the p53 overexpression and the specific CYP1A1 and GSTs genotypes.
Dietary effect of soyfiber beni-koji (SBK) with chitosan-ascorbate (CA) on the level of serum lipids in rats fed a high fat diet was investigated The experimental groups which were divided into high fat diet control group(HC-group), $2\%\;SBK+0.1\%$ CA mixture diet group(CA1-group), $2\%\;SBK+0.15\%$ CA mixture diet group(CA2-group), and $2\%\;SBK+0.2\%$ CA mixture diet group (CA2-group) were fed for 4 weeks. Weight gains in CA2- and CA3-group were $5.3\%\;and\;9.5\%$ lower than that of HC-group, respectively, while there was no significant difference in feed intakes, feed efficiency ratio and organs weight Level of serum triglyceride in $C_3-group\;was\;21\%$ lower than that of HC-group. Level of serum total cholesterol and LDL-cholesterol in CA2- and CA3-group were $22.1\~22.7\%\;and\;58.6\~64.3\%$ lower than those of HC-group, respectively. Atherogenic index decreased with the higher level of CA. Level of lipid peroxide in CA3-group was $24\%$ lower than that of HC-group, while there was no significant difference in GSH(Glutathione-S-transferase) content O type activities of XOD(xanthine oxidase) in the treated groups were lower, especially the activity in CA3-group was $51.6\%$ lower than that of HC-group. Also, O/T ratio of XOD was lower, showing $21.7\~23.5\%$ in treated groups and $34.0\%$ in HC-group(p<0.05). GST activities were 332.52 units in HC-group and $350.28\~355.63$ units in the treated groups, but there were no significant differences among them.
싸리버섯 메탄올 추출물이 간독성 물질인 B$({\alpha})$P을 투여한 마우스에서 간 손상 억제 효과 및 cytochrome P-450 1A1 발현에 미치는 영향을 살펴보았다. B$({\alpha})$P 투여로 인한 혈청 ALT와 AST의 활성, 간 조직증의 lipid peroxide 함량, cytochrome P-450 함량, AD 및 AH 활성이 유의적으로 증가하였으며 싸리버섯 메탄올 추출물의 투여시 이들 활성 및 함량이 유의적으로 감소하였다. 반면, 간 조직중의 GSH 함량, GST, r-glutamylcysteine synthetase의 활성은 B$({\alpha})$P만 투여한 군에 비해 싸리버섯 메탄올 추출물을 투여시 증가하였다. 또한 immuno blotting 결과로부터 B$({\alpha})$P 투여에 의해 현저히 증가되었던 cytochrome P-450 1A1 isozyme 단백질 함량이 싸리버섯 메탄올 추출물의 투여로 감소됨을 확인하였다. 이와 같은 결과로부터 싸리버섯 메탄올 추출물은 B$({\alpha})$P에 의한 간 손상에 대한 보호 효과가 있는 것으로 사료된다.
에탄올 투여에 의한 산화적 손상에 대하여 비타민 A의 보충급여 영향을 조사하고자 흰쥐에게 AIN-76 요구량에 2배 수준으로 retinyl acetate와 $\beta$-carotene을 보충한 식이를 5주간 급여한 후 20% 에탄올 용액(3g/kg B.W)을 급성으로 복강내에 투여하였다. 그런 다음 간조직에서 생성되는 지질과산 화물 함량, 간조직에서의 관련 효소활성도와 항산화비타민의 함량을 분석한 결과는 다음과 같다. 간조직에서의 지질과 산화물 함량은 대조군에 비하여 $\beta$-carotene 공급군에서 유의적인 감소를 나타내었다. 그러나 retinyl acetate 공급군과 $\beta$-carotene 공급군 사이에서의 유의적인 차이를 나타내지 않았다. SOD 활성은 대조군에 비해 retinyl acetate 공급군이 높았고, catalase 활성과 GSH-Px 활성은 실험군 간에 유의적인 차이가 없었다. GST 활성은 에탄올만을 투영한 대조군에 비해 retinyl acetate와 $\beta$-carotene을 공급한 군에서 유의적으로 감소되었다. 간조직 내 retinol 함량은 대조군에 비해 retinyl acetate 공급군에서 유의적으로 높게 나타났으며, 이는 에탄올 급여로 인한 간조직 비타민 A의 소모를 retinyl acetate의 급여로 인해 완화시킨 것으로 여겨진다. 그러나 혈청에서는 실험군 간에 유의적인 차이가 없었다. 간조직내 $\alpha$-tocopherol의 함량은 retinyl acetate와 $\beta$-carotene 공급군에서 증가하는 경향을 나타내었다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 금성적인 에탄올의 투여에 대해 retinyl acetate나 $\beta$-carotene을 보충 급여한 경우 항산화효소계 중 superoxide dismutase의 활성이 유도되는 경향을 보였으며, 대표적인 항산화비타민으로 알려진 $\alpha$-tocopherol의 간조직 내 수준이 증가하는 것으로 나타났다.
홍삼의 물추출물을 장기간 흰쥐에 급여했을 때 흰쥐 간의 이물질대사효소 활성도 유도에 미치는 영향을 조사하였다. 홍삼 물추출물의 급여농도는 25 mg/kg body weight이었으며, 간의 이물질대사효소 유도제는 항경련제 PB (80 mg/kg)와 발암제 3-MC (20 mg/kg)을 사용하였다. 간에서 이물질대사에 관여하는 cytochrome P-450의 함량, cytochrome P-450 dependent monooxygenase인 ECOD와 BPDM, cytochrome P-450 reductase와 GST의 활성도는 PB와 3-MC 투여에 의해서 대조군과 홍삼투여군 모두 크게 증가되었다. 흰쥐의 나이가 3개월에서는 두 유도제를 투여했을 때 이물질대사효소의 활성은 대조군이 인삼투여군에 비해 상대적으로 더 많이 유도되었다. 그러나 12개월에서는 두 시험군 모두 유도정도가 감소하였으나 홍삼투여군은 그 활성도 감소정도가 대조군에 비해 상대적으로 크지 않았다. 한편 두 그룹 모두 이물질대사 효소 중 cytochrome $B_5$ 함량과 cytochrome $b_5$ reductase의 활성도는 PB와 3-MC 투여에 의해서 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. 따라서 이러한 결과는 흰쥐에 홍삼의 장기간 급여는 간에서 효소유도제의 이물질대사효소유도 정도를 조절하여 무독화에 기여할 수 있다는 것을 의미한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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