목화의 Glutathione S-Transferase(GST) cDNA를 cloning한 뒤 담배식물체에서 과발현시킨 뒤 유전자의 기능을 분석하였다. Northern blot 분석으로 목화의 GST 유전자가 성공적으로 담배식물체의 염색체에 도입된 것을 확인하였다 Type I Type II의 전사체들이 인지되었고 이 보고에서는 Type II 전사체들의 역할을 기술하였다. Type II 전사체들을 발현하는 형질전환 식물체들은 야생형 또는 비형질전환체와 비교하였을 때 약 1.5배 이상의 GST 효소활성을 나타내었다. GST 효소의 활성은 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB)와 글루타치온을 기질로 사용하여 측정하였다. 담배식물체에서 목화 GST CDNA의 과발현은 이 유전자가 기능을 갖는 단백질로 번역이 될 수가 있다는 것을 보여준다. 형질전환된 담배 유묘를 저온($15^{\circ}C$)과 광이 있는 상태에서 키워 GST유전자의 역할에 대한 기능을 시험하였다. GST 유전자의 형질 전환체들은 대조구의 유묘들과 비교하여 보았을 때 성장이 좋았다. 소금에 대한 내성 시험에서도 효과를 보였다. 0, 50, 100, 150, and 200 mM NaCl농도에서 생장시험을 하였다. 50, 100 mM NaCl농도에서 GST 형질전환 유묘들은 성장이 대조구에 비하여 유의성을 보였으나 0, 150, 그리고 200mM의 소금농도에서는 성장의 차이를 보이지 않았다.
Kim Hong-Gyum;Kim Byung-Chul;Kim Kyunghoon;Park Eun-Hee;Lim Chang-Jin
Journal of Microbiology
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제42권4호
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pp.353-356
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2004
In a previous study, a gst gene was isolated from the fission yeast Schizosaccharomyces pombe. This gene was dubbed gstI, and was characterized using the gstI -lacZ fusion plasmid pYSH2000. In this work, four additional fusion plasmids, pYSHSDl, pYSHSD2, pYSHSD3 and pYSHSD4, were constructed, in order to carry (respectively) 770, 551, 358 and 151 bp upstream regions from the translational initiation point. The sequence responsible for induction by aluminum, mercury and hydrogen peroxide was located in the range between -1,088 and -770 bp upstream of the S. pombe gstI gene. The same region was identified to contain the nucleotide sequence responsible for regulation by Papl, and has one putative Papl binding site, TTACGTAT, located in the range between $-954\~-947$ bp upstream of the gstI gene. Negatively acting sequences are located between -1,088 and -151 bp. These findings imply that the Papl protein is involved in basal and inducible transcription of the gstI gene in the fission yeast S. pombe.
The youngkaechulgamtang (Y) composed of four herb drugs, including Hoelen (H). Cinnamomi Ramulus (C). Atractylodis Rhizoma Alba (A) and Glycyrrhizae Radix (G). In oriental medicine literatures, Youngkaechulgamtang is described to be effective in headache, inflammation, uremia, gastritis, diarrhea and hypertension. To estimate the clinical effectiveness of Youngkaechulgamtang, several pharmacological experiments were carried out. The results are summerized as follows; On acetaminophen-induced hepatotoxicity, C+A, Y-G, Y-H, MIX and Y showed the significant elevation of glutathione-S-transferase. But, C+A, Y-G, Y-H, MIX and Y showed the significant suppression of serum aminotransferases. On ANIT-induced cholestasis, U (Ursodesoxycholic acid 50 mg/kg)+$Y_l$ (760 mg/kg) showed the significant increase of bile juice volume. $Y_l,\;Y_2$ (1520 mg/kg), U, $U+Y_l$ showed the remarkable increase of cholic acid. U and $U+Y_l$ showed the significant decrease of total bilirubin. From these results, it is suggest that Y shows liver protective effect against various hepatic injury. Especially, Youngkaechulgamtang was more effective than mixture of 4 ingredients in the elevation of glutathione-S-transferase in acetaminophen-induced hepatotoxicity.
이물질(xenobiotics) 대사에 관여하는 간장 microsome과 cytosol 효소 활성에 indole, indole-3-carbinol 및 benzofuran이 미치는 영향을 검색하기위하여 마우스에 이들 약물을 각각 5 mmole/kg씩 10일간 투여하여 다음 몇 가지의 성적을 얻었다. Benzofuran은 microsome 효소인 aniline hydroxylase, 7-ethoxycoumarin O-deethylase, p-nitrophenol UDPGA-transferase, epoxide hydrolase와 cytosol 효소인 glutathione S-tranferase, NADH : quinone reductase, UDP-glucose dehydrogenase의 활성도를 증가시켰다. 그러나 benzofuran과는 구조적으로 furan ring내의 N원소가 O원소로 치환되었을 뿐 주된 구조가 유사한 indole과 indole-3-carbinol 투여로는 UDPGA-transferase와 NADH: quinone reductase의 활성도 증가를 볼 수 없었으며, 특히 indole은 NADPH : cytochrome C reductase만을 증가시킨데 비하여 구조상 indole에 carbinol (methanol)기가 붙은 indole-3-carbinol은 수종의 mixed function oxidase와 아울러 특히 epoxide hydrolase의 활성도 역시 증가시켰다. 이러한 결과는 benzofuran과 indole-3-carbinol에 의한 epoxide hydrolase 활성도 증가의 기전의 일부를 설명할 수 있을 것으로 생각된다.
This study examined effects of crude oil on the phase II drug-metabolizing enzymes UDP-glucuronosyl transferase (UDPGT) and glutathione S-transferase (GST) in mussel Mytilus edulis and rockfish Sebastes schlegeli, a representative bivalve and a culture fish, respectively. This work also intended indirectly to evaluate the post impact recovery from the massive oil tanker spillage accidents occurred during the summer of 1995 in the sea area off Yosu City, Chonnam. For these, enzyme activities of UDPGT and GST were examined in the fish and mussel following laboratory exposure to fresh crude oil, weathered oil, field-obtained oil residues, or in the field biota samples. Decreased GST activity was observed in rock fish following exposure to oil-soluble fraction (OSF) of fresh oil. A similar diminished GST activity was also observed after OSF of artificially weathered oil. OSF of field oil residues retrieved from the spillage area approximately 1 year later also exerted a slight inhibition of GST to rockfish. There was neither a change in UDPGT in rockfish, nor were there changes in mussel in both enzymes to any oil fractions. We could not observe any difference in the two enzymes either in rockfish or mussel sampled from the field during $1.5{\sim}2.0$ years post spillage, indicating that their enzyme systems might had been recovered by the sampling time. In conclusion, it seems that the inhibition of GST activity in rockfish is a biomarker response to crude oil exposure. The results, however, must be interpreted with care, as the inhibition nay reflect various factors such as oil concentration, duration and water temperature.
Six-week-old Sprague Dawley rats were fed the diets of 20% casein or soy protein. Two weeks after the feeding, hepatocellular chemical carcinogenesis was initiated by diethylnitrosamine(DEN), and promoted by the diet containing 0.01% 2-acetylamino-fluorene(AAF) and two-thirds partial hepatectomy(PH). The animals were sacrificed at 8 weeks after the DEN injection. The area of placetal glutathione S-trnasferase(GST-P) positive foci, the activities of several enzymes in cellualr antioxidant enzyme systems and glucose 6-phosphatase were determined to investigate the mechanism of the anticarcinogenic effect by the dietary proteins. In another set of experiments, the drinking water of rats fed casein was supplemented with 1.5% inositol hexaphosphate(InsP6) to elucidate whether it has the comparable anticancer action of soy protein. The area and number of GST-P positive foci in the soy protein group were significantly(p<0.05) lower than those inthe casein group. The livers of rats fed casein showed moderate fattydegeneration and larger hyperplastic nodules than those of rats fed soy protein. In another set of experiments, the area and number of GST-P positive foci in the rats fed casein supplemented with InsP6 were not significantly different from those in the rats fed casein or soy protein. The lipid peroxidation of rats fed different protein sources showed no significant difference. Glutathione S-transferase(GST) activities were increased significantly(p<0.05) by carcinogen treatment in all dietary groups. Glucose 6-phosphatase(G6Pase) activities were decreased by carcinogen treatment, and hence showed a reverse relationship(r=-0.695, p<0.01) to the GST-P positive foci. Therefore, the activities in the rats fed casein were lower than those in the rats fed soy protein. These results suggest that the soy protein seems to be more anti-carcinogenic than casein by decreasing the preneoplastic lesion and by increasing the membrane stability but inositol hexaphosphate, a component of soy protein, may not be protective against hepatocarcinogenesis.
실험동물에 있어서 간조직의 손상 정도에 미치는 xenobiotics의 투여기간에 의한 영향을 검토할 목적으로 hepatotoxin의 일종인 bromobenzene의 투여 횟수에 의한 간손상 정도와 이의 기전을 구명 한 결과는 다음과 같다. 흰쥐에 1일 간격으로 bromobenzene (400 mg/kg)을 복강으로 1회, 3회 및 6회 투여한 실험군을 대상으로 하여 실시한 실험에서 혈청 alanine aminotransferase (ALT)의 활성 및 체중 당 간 무게는 bromobenzene을 1회 투여 한 1일째에는 대조군과 별다른 변동을 볼 수 없었으나 3회 투여 한 3일째에는 유의하게 증가되었으며, 이후 6일째 6회 투여한 실험군에서는 체중 당 간 무게 및 혈청 ALT활성이 3일째 보다 현저히 감소되어 오히려 대조군과 유사하였다. 이와 같이 투여 횟수의 증가에 따른 간손상의 정도가 투여 횟수와 비례하지 않은 것이 어떠한 기전에 의해서 나타나는지를 구명하기 위해 bromobenzene 대사에 관여하는 간조직 중 aniline hydroxylase 및 glutathione S-transferase 활성과 glutathione (GSH) 함량을 측정한 결과, 이들 대사효소 및 GSH 이용률이 bromobenzene 6회 투여군에서 1회 및 3회 투여군 보다 높게 나타났다. 이상 실험 결과를 종합해 볼 때 어떤 독성물질이 생체에 계속 폭로 시 어느 시점에서 중독현상이 경감되는 것은 이 독성물질의 대사율을 증가시켜 해독하려는 생리적응현상이 일어 날 수 있다는 가설을 제시할 수 있다.
The effects of some coumarins(coumarin, 7-hydroxycoumarin, scopoletin and esculetin) were investigated on pumpkin(Cucurbita maxima Duch.) seedlings and on pumpkin glutathione S-transferases(GSTs). Coumarin and esculetin suppressed the growth of seedlings, especially the elongation of roots as well as hypocotyls. Among the compounds tested, only esculetin inhibited the activity of a particular pumpkin GST by 50%, CmGSTU3 toward 1-chloro-2, 4- dinitrobenzene(CDNB) and at a concentration of 22 ${\mu}M$. Both ethylacetae(EtOAc) and water fractions in pumpkin seedlings and different organs of one-month-old pumpkin plants contained esculetin or similar hydrophobic fluorescent substances as well as hydrophilic substances, which showed different degrees of inhibitory effects on CmGSTU3 activity.
연령이 다른 흰쥐에 있어서 bromobenzene에 의한 간 손상의 정도 차이와 이의 기전을 알아보기 위하여 5주령 및 10주령 흰쥐에 bromobenzene을 체중 kg 당 400 mg을 격일로 5회 전처치함과 동시에 bromobenzene전처치 및 대조군에 bromobenzene을 다시 투여한 뒤 처치하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Bromobenzene 전처치로 인한 간 무게, 혈청 alanine aminotransferase, xanthine oxidase 활성 및 간 조직중 과산화지질의 함량 증가율과 간 세포질의 단백질 감소율은 10주령군이 5주령군 보다 높았다. 이 결과는 10주령이 5주령 보다 bromobenzene 투여로 인한 간 손상이 심하게 나타남을 시사해 주고 있다. 한편, 간 조직 중 aniline hydroxylase 활성은 10주령에 있어서 bromobenzene 전처치군 및 대조군 모두 5주령 보다 높게 나타나는 반면 glutathione S-transferase 활성은 10주령이 5주령 보다 낮게 나타났다. 또한 이들 실험동물에 bromobenzene을 재 투여한 다음 경시별로 간 조직 중 glutathione 함량을 측정한 바 10주령이 5주령 보다 glutathione 감소율이 낮게 나타났다. 이상 실험결과를 종합해 볼 때 bromobenzene 투여시 10주령이 5주령 실험군 보다 간 손상이 심하게 나타났으며, 이는 생체내의 bromobenzene 처리능력이 5주령 보다 10주령이 저하되기 때문에 나타난 결과라고 사료된다.
Oxidative stress leads to the induction of cellular oxidative damage, which may cause adverse modifications of DNA, proteins, and lipids. The production of reactive species during oxidative stress contributes to the pathogenesis of many diseases. Antioxidant defenses can neutralize reactive oxygen species and protect against oxidative damage. The aim of this study was to assess the antioxidant status and the degree of DNA damage in Korean young adults using glutathione s-transferase (GST) polymorphisms. The GSTM1 and GSTT1 genotypes were characterized in 245 healthy young adults by smoking status, and their oxidative DNA damage in lymphocytes and antioxidant status were assessed by GST genotype. General characteristics were investigated by simple questionnaire. From the blood of the subjects, GST genotypes; degree of DNA damage in lymphocytes; the erythrocyte activities of superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase; plasma concentrations of total peroxyl radical-trapping potential (TRAP), vitamin C, ${\alpha}$- and ${\gamma}$-tocopherol, ${\alpha}$- and ${\beta}$-carotene and cryptoxanthin, as well as plasma lipid profiles, conjugated diene (CD), GOT, and GPT were analyzed. Of the 245 subjects studied, 23.2% were GSTM1 wild genotypes and 33.4% were GSTT1 wild genotype. No difference in erythrocyte activities of superoxide dismutase, catalase, or glutathione peroxidase, and the plasma TRAP level, CD, GOT, and GPT levels were observed between smokers and non-smokers categorized by GSTM1 or GSTT1 genotype. Plasma levels of ${\alpha}$- and ${\gamma}$-tocopherol increased significantly in smokers with the GSTT1 wild genotype (p < 0.05); however, plasma level of ${\alpha}$-carotene decreased significantly in non-smokers with the GSTM1 wild genotype (p < 0.05). DNA damage assessed by the Comet assay was significantly higher in non-smokers with the GSTM1 genotype; whereas DNA damage was significantly lower in non-smokers with the GSTT1 genotype. Total cholesterol and LDL cholesterol levels were significantly higher in non-smokers with the GSTT1 genotype than those with the GSTT1 wild genotype (p < 0.05). In conclusion, the GSTM1 genotype or the GSTT1 wild genotype in non-smokers aggravated their antioxidant status through DNA damage of lymphocytes; however, the GSTT1 wild type in non-smokers had normal plasma total cholesterol and LDL-cholesterol levels. This finding confirms that GST polymorphisms could be an important determinant of antioxidant status and plasma lipid profiles in non-smoking young adults. Further study is necessary to clarify the antioxidant status and/or lipid profiles of smokers with the GST polymorphism and to conduct a study with significantly more subjects.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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