위염과 위궤양의 일차적 발병 인자로 알려진 Helicobacter pylori의 생육을 억제하고 urease 산물인 암모니아의 축적에 의한 위점막 손상을 완화시킬 목적으로 복분자로부터 H. pylori urease저해물질을 분리정제하고 소재화와 관련된 일부 성질을 규명하였다. 양념 채소류, 차류, 죽류, 건강채소류등의 식용식물, 약용식물, 허브 및 해조류, 총 173종으로부터 극성도에 따라 계통추출한 수용성인 냉수추출물(Fr, 1), methanol 추출물(Fr.4), 열수추출물(Fr.5) 519점을 대상으로 H. pylori urease 저해활성을 검색하였다. 1차 및 2차 저해활성 검색 결과 복분자의 70% acetone추출물이 약 24%의 가장 높은 저해활성을 나타내었으며, 이 추출물을 ethyl acetate와 butanol을 사용하여 ethyl acetate/DW layer(RCE/RCWl)와 butanol/DW layer(RCB/RCW2)로 순차 분획한 후 활성획분인 RCW2 내의 활성 본체를 확인할 목적으로 periodate oxidation과 pronase digestion을 실시한 결과 펩타이드 또는 단백질성 물질로 판명되었다. 저해활성 물질은 DEAE-Toyopearl 650C, Butyl-Toyopearl 650M 및 Sephadex LH-20순의 column chromatography에 의 해 분리 정제되었다. 분리 urease 저해물질, RCW2-IIIc $\alpha$는 HPLC의 gel permeation chromatography에 의해 비교적 순도 높은 분자량 약 13 kDa의 단일 물질임이 확인되었다. 저해활성물질은 열에 안정성을 보이 는 내열성 단백질임을 알 수 있었고 위내 단백분해효소인 pepsin에도 가수분해 저항성을 나타냄으로써 기능성식품의 소재로 높은 소재화 적성을 보였다.
We selected Pleurotus ostreatus from among several edible mushrooms because it has high anti-gout xanthine oxidase (XOD) inhibitory activity. The maximal amount of XOD inhibitor was extracted when the Pleurotus ostreatus fruiting body was treated with distilled water at $40^{\circ}C$ for 48 hr. The XOD inhibitor thus obtained was purified by Sephadex G-50 gel permeation chromatography, ultrafiltration, $C_{18}$ solid phase extraction chromatography and reverse-phase high-performance liquid chromatography with 3% of solid yield, and its XOD inhibitory activity was 0.9 mg/mL of $IC_{50}$. The purified XOD inhibitor was a tripeptide with the amino acid sequence phenylalanine-cysteine-histidine and a molecular weight of 441.3 Da. The XOD inhibitor-containing ultrafiltrates from Pleurotus ostreatus demonstrated dose-dependent anti-gout effects in a Sprague-Dawley rat model of potassium oxonate-induced gout, as shown by decreased serum urated levels at doses of 500 and 1,000 mg/kg, although the effect was not as great as that achieved with the commercial anti-gout agent, allopurinol when administered at a dose of 50 mg/kg.
Vitellogenin (VTG) was purified from serum of $estradiol-l7{\beta}-treated rockfish$(Sebastes schlegeli) by precipitation with $EDTA-Mg^{2+}$ and ammonium sulfate and two step chromatography (anion exchange chromatography and gel permeation chromatography) was performed on FPLC system. Rockfish VTG (rfVTG) was characterized and its properties were determined. The monomers have apparent, molecular mass of about 188 kDa as indicated by SDS-PAGE. Amino acid composition analysis of rfVTG was similar to VTG from other oviparous teleosts. Cysteine and lysine were present at relatively high level. Leucine was present at relatively lower level than in other species. The N-terminal amino acid sequence was evaluated to identify rfVTG. Western blot analysis using an antibody against the purified VTG showed that the antibody reacted with both plasma of $estradiol-l7{\beta}-treated rockfish$ treated male and purified VTG, whereas there was no reaction with male serum of the control. An ELISA was developed using monoclonal and polyclonal antibodies against rfVTG. The assay range was 3.2 ng/mL and 1,000 ng/mL and the value of the intra and inter assay variations were within $9.7{\%}$ and $11.2{\%}$, respectively. Recovery rate was $96.8{\%}$. The sandwich ELISA could be useful for the detection of VTG and could be good for screening of estrogenic compounds.
Mesoporous titanium dioxide ($TiO_2$) thin films were prepared using poly(vinyl chloride)-graft-poly(N-vinyl pyrrolidone) (PVC-g-PVP) as a templating agent via sol-gel process. Grafting of PVC chains from PVC backbone was done by atom transfer radical polymerization (ATRP) technique. The successful grafting of PVP to synthesize PVC-g-PVP was checked by fourier-transform infrared spectroscopy (FT-IR) and gel permeation chromatography (GPC). The carbonyl group interaction of PVC-g-PVP graft copolymer with $TiO_2$ was confirmed by FT-IR. The porous morphologies of the $TiO_2$ films genereated after calcination at $450^{\circ}C$ was characterized by X-ray diffraction (XRD) and scanning electron microscopy (SEM). The mesoporous $TiO_2$ films with 580 nm in thickness were used as a photoelectrode for solid state dye sensitized solar cell (DSSC) and showed an energy conversion efficiency of 1.05% at 100 $mW/cm^2$.
$30{\sim}70%$ 황산암모늄 분획, Fast Q 음이온 교환수지 및 Phenyl Agarose 수지를 통해 돼지간유래의 methenyltetrahydrofolate synthetase를 정제하였으며 정제도는 119이었다. SDS-PAGE 및 HPLC를 이용한 gel permeation column chromatography에 의해 이 효소는 분자량이 23 kDa인 단량체로 확인되었다. 최적 온도와 최적 pH는 각각 $35^{\circ}C$ 와 6.5이었다. 이 효소는 tetranitromethane 및 1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl)-carbodiimide (EDC)에 의해서만 활성이 감소되었는데, 이는 티로신과 카르복실산이 효소의 활성부위에 존재한다는 것을 나타낸다. 활성부위의 pH 실험으로부터 2개의 티로신이 기질의 결합에 관여하며 하나의 카르복실기가 촉매반응에 관여한다는 사실이 관찰되었다. 따라서 이 효소는 2개의 티로신이 ATP와 5-formylTHF과 결합하며 하나의 카르복실기가 일반염기로서 촉매한다는 것을 알 수 있다.
본 연구는 누에 실 샘으로부터 얻은 Bambyx mori 피브로인의 효소 가수분해 시 그 분자량 및 구조적 특성을 파악하고자 하였다. Gel filtration chromatography(GFC)에 의해 B. mori 피브로인을 순수 분리한 결과 회수율이 약 70% 이상으로 기존의 방법(막과 튜브 분리법)에 비해 약 40% 이상 높았다. 이는 GFC법이 고 순수 고 수율의 B. mori 피브로인을 얻을 수 있는 방법임이 확인되었다. Gel permeation chromatography에 의한 분자량 측정 결과 누에 체내 피브로인, 염화칼슘 용해 물 및 효소 가수분해물이 각각 평균분자량 108,000 Da 내외, 65,000 Da 내외 및 1,000 Da 내외임을 알 수 있었다 또한 효소 가수분해에 의한 구조적 변화를 $^{13}C-NMR$로 알아본 결과, B. mori 피브로인의 메인 골격에 해당되는 glycine, alanine 및 serine 등의 골격 피크가 관찰되어졌으며, 특히 효소가수분해 시 glycine를 의미하는 40-44 ppm 부근의 피크가 높게 나타난 것으로 보아 -G-A-G-A-반복 구조가 분해되었고, 이로 인해 분자량이 현저히 저하되었을 것으로 생각되어진다.
산화는 아스팔트에서 대형분자(LMS : Large Molecular Size) 양의 증가를 야기하고 바인더의 경화에 주요 원인이 되므로 바인더 산화를 저감시키면 도로 및 공항 포장의 공용수명 연장을 기대할 수 있다. 바인더 산화는 혼합물을 도로에 깔기 전에 가열된 골재와 혼합하는 동안과 아스팔트 포장이 시공된 후 공용기간 동안에 일어난다. 본 연구에서는 바인더를 단기 및 장기노화 처리 후 LMS의 양적 증가를 HP-GPC (High-Pressure Gel-Permeation Chromatography)의 자료에 근거하여 해석하였다 개질 아스팔트는 LMS의 증가율이 아스팔트의 종류에 따라 다를 지라도 단기노화 후 LMS의 20-30%증가. 장기노화 후 2배 이상의 증가를 나타냈다. 본 연구에서 개질 아스팔트의 노화특성을 관찰하기 위하여 사용된 개질제는 선행 연구에서 큰 역학적 특성 향상을 보인 LDPE(Low-Density Polyethylene)와 SBS(Styrene-Butadiene-Styrene block copolymers) 를 사용하였다. LDPE로 개질한 바인더는 단 장기노화 후 LMS의 증가 비율이 상당히 낮았다. 이와 같이 낮은 LMS의 증가는 LDPE 개질 아스팔트가 노화 처리되는 동안에 일반 아스팔트보다 덜 노화가 진행된다는 것을 의미한다 이는 아스팔트 시멘트 내에 분산된 LDPE 입자가 산화 노화작용을 방해하기 때문인 것으로 보인다.
방사선조사를 이용하여 돈피유래 올리고펩타이드를 제조하고자 하였다. 생박돈피를 chopper를 이용하여 조분쇄한 후 $-20^{\circ}C$ 아세톤으로 탈지하였고, $\gamma$-ray irradiator를 이용하여 0, 20, 40, 50, 100, 150, 200, 250, 300 kGy의 총 흡수선량을 얻도록 탈지돈피에 방사선조사를 하였다. 탈지돈피의 pH는 150 kGy이상에서 소폭 증가하였고, SDS-PAGE에서 방사선조사선량이 증가할수록 분자량 24 kDa이하의 저분자 물질이 점차 증가하였고, 효소처리를 병행했을 때 $\alpha$- 및 $\beta$-나선구조의 100 kDa 및 200 kDa의 콜라겐 밴드가 소실되는 반면에 24 kDa의 밴드가 형성되고 있으며, 방사선 조사선량이 증가할수록 10% SDS-polyacrylamide gel 하단에 콜라겐 분해 물질로 예상되는 저분자 물질이 축적되는 현상을 보였다. 방사선조사선량에 따른 수용성 단백질의 용해도, 점도 및 탁도를 측정한 결과 방사선조사선량이 증가할수록 용해도가 증가하고 점도 및 탁도가 감소하는 현상을 보였고, 방사선을 조사한 돈피에 papain 1%를 첨가하여 수용성 단백질을 추출한 경우 비 효소처리구에 비하여 점도가 낮아지는 현상을 보여 돈피 단백질이 papain에 일정수준 가수분해되고 있음을 알 수 있었다. 300 kGy로 방사선을 조사한 돈피 가수분해물을 gel permeation chromatography한 결과 분자량 9,000, 2100, 860, 170 Da의 분획물을 확인하였다. 이상의 결과는 환경오염 문제를 최소화하고 제조공정을 단순화하여 경제성 있는 콜라겐 유래 기능성 올리고펩타이드를 제조함에 있어 방사선조사기술(RT: Radiation Technology)이 고분자물질의 저분자화에 직접 이용될 수 있는 기술로 실용화되어 환경오염을 최소화할 수 있는 대체기술로 가능할 것으로 생각된다.
난백 lysozyme은 박테리아 세포벽을 선택적으로 분해하므로 식품 가공 및 저장용 천연 식품보존제로서의 이용 가치가 높다. 농도(0.25, 0.5, 1.0%, w/v)를 달리한 난백 용액을 예비여과하여 얻은 여액(PFS)과 PFS를 $35^{\circ}C$에서 한외여과하여 얻은 여액(PMS)의 단백질 농도와 lysozyme 농도를 측정하고 비활성도와 purification factor를 계산하여 최적 분리 농도를 결정하였다. 난백 용액의 각 단계별 lysozyme의 분리 정제도를 겔 크로마토그래피와 전기영동으로 확인하였으며, PM30 막에 대한 난백 단백질의 막 침착도는 SEM으로 관찰하였다. 예비여과와 한외여과 단계를 거치면서 lysozyme 이외의 비효소성 단백질은 99% 이상이 제거되었다. 비활성도는 0.25% PMS>0.50% PMS>1.0% PMS 순이었으며 PFS에 비해 PMS의 비활성도는 한외여과 단계를 거치면서 최저 18배에서 최고 31배까지 증가하였으므로, 비활성도와 purification factor가 가장 높은 0.25% 난백 용액을 최적 농도로 결정하였다. 난백 용액(0.25%, w/v)의 겔투과 크로마토그래피 결과 비효소 획분은 대부분 ovalbumin으로 판명되었으며, 전기영동 결과 PMS내에는 고순도의 lysozyme이 존재하였다. 분자량이 큰 단백질들이 $0.9{\mu}m$의 두께로 한외여과 막 표면에 침착되었으나, SEM 관찰 결과 이들 침착 단백질의 대부분은 0.1 N NaOH로 세척시 제거되는 것으로 나타났다. 따라서, polysulfone계의 PM30 막을 사용한 한외여과 공정이 고순도의 lysozyme만을 선택적으로 분리하는데 매우 효과적이었다.
This experiment was carried out to investigate the crack of coated Nitrocellulose Lacquer on flatand edge-grained boards of Quercus acutissima, ring-porous wood, and Betula platyphylla var. japonica, diffuse-porous wood, by variations of moisture contents at 7, 13 and 21%. Cold check system was used as an accelerating method for crack development, in which one cycle of the system consisted of 10 replications of each unit cycle, $60^{\circ}C$ for 4hr followdd by $-20^{\circ}C$ for 4hr. The analysis of Nitrocellulose Lacquer characteristics was made by means of water permeation measurement, F.T.I.R. spectroscopy, N.M.R. spectroscopy, gel permeation chromatography, gas chromatography, and D.S.C. The results obtained were as follows: 1. The number of cracks increased with the increasing moisture content of board. 2. The crack of coated film on flat-grained board was fewer in number than on edge-grained board. 3. The crack occurred in Quercus acutissima was more numerous on edge-grained board but less frequent on flat-grained board compared with that in Betula platyphylla var. japonica, respectively. 4. The cold crack vertically developed to the grain both in Quercus acutissima and Betula platyphylla var. japonica. 5. Water permeability in intermediate coated film was lower than in under and top coated film, but the difference was not confirmed between under and top coated film.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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