농도와 기간에 따른 바이러스 감염 및 항바이러스제인 amantadine병행 첨가 시 Maddin Darby canine kidney (MDCK) 세포 내의 free radical 해독계 효소인 glutathione S-transferase (GST)와 lactate dehydrogenase (LDH)의 활성 변동을 상호비교 관찰하였다. 바이러스에 감염된 MDCK세포는 감염 3일 후 1 TCID$_{50}$ 군은 80%이상, 10 TCID$_{50}$ 군은 거의 대부분의 단층세포가 탈락되는 병변 효과가 나타났다. Amantadine cytotoxic dose %가 증가함에 따라 MDCK 세포 내의 GST 및 LDH 활성은 농도에 따라 유의하게 감소되었고, 감염배지 내 LDH 활성은 대조군 보다 유의한 증가를 보였다. 인플루엔자 바이러스 type A 접종농도와 기간에 따른 MDCK세포 내의 GST및 LDH활성은 1 및 10 TCID$_{50}$ 감염군에서 감염 3일 후부터 유의하게 감소되었고, 감염배지 내의 LDH활성은 10배 이상 증가되었다. 인플루엔자 바이러스 type A 100 TCID$_{50}$ 감염과 amantadine병행 첨가 시 GST 및 LDH 활성은 바이러스만 감염한 군 보다 MDCK세포 내에서 대조군에 비하여 감소율이 낮았고, 감염배지 중 LDH 활성 역시 증가율이 낮았다. 또한 바이러스 감염 후 amantadine 90 $\mu\textrm{g}$/ml 첨가 시에 세포 내와 감염배지 중에서 가장 낮은 감소와 증가를 나타냈다.
Phase II 효소계는 자연계에 존재하는 다양한 화학물질과 천연소재들에 의해 유도되며, 이들의 유도는 화학적 발암물질과 그 밖의 여러 가지 독성물질들로부터 생체를 보호하는데 중요한 역할을 한다. 특히, phase II 효소 중 QR은 quinone류 자체에 대한 보호효과가 있고 다른 암예방 효소계와 공통으로 유도되며, 항암 작용이 있는 많은 화합물에 의해 유도되어지기 때문에 암예방 물질 탐색의 지표가 되는 대표적인 효소로 많이 이용된다. 본 연구에서는 제주도에서 자생하는 귤류 중 지각을 이용하여 메탄올추출물을 제조한 후 대표적인 암예방계 효소로 알려진 quinone reductase 및 glutathion S-transferase의 유도 활성을 조사하였다. 우선 QR 및 GST 유도활성 측정에 앞서 각 시료의 Hepa 1c1c7 세포에 대한 독성을 조사하여 시료자체의 세포독성을 관찰하였으며, 이 결과를 바탕으로 QR, GST 유도 활성을 측정할 시 세포독성을 거의 나타내지 않는 각각 시료의 최대 처리 농도를 결정하였다. 총 6개의 지각 분획물 중 mouse 유래 Hepa 1c1c7 세포주에서는 hexane 충과 chloroform 충에서 QR, GST의 활성이 $200{\mu}g/mL$에서 각각 1.8배, 1.5배 이상으로 증가되어 높은 QR 및 GST의 유도활성을 보였다. 따라서 지각의 hexane 층이나 chloroform층에 존재하는 높은 QR및 GST의 유도활성이 나타나는 물질을 분리 정제하여 앞으로 계속적인 연구가 진행되어야 할 것이다.
We examined the effects of polysaccharides extracted from Asterina pectinifera on the activities of quinone reductase (QR), glutathione S-transferase (GST), ornithine decarboxylase (ODC), cyclooxygenase (COX)-2 and glutathione (GSH) levels in HT-29 human colon adenocarcinoma cells. We found that the polysaccharides extract induced QR activity in a dose-dependent manner over a concentration range of $20-60\;{\mu}g/ml$ and increased GST activity as much as 1.4-fold over controls. GSH levels were increased 1.3- and 1.5-fold with the extract at 40 and $60\;{\mu}g/ml$, respectively. The activity and protein expression of ODC in 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)-induced colon cancer cells was inhibited by the extract. The polysaccharides suppressed TPA-induced prostaglandin (PG) production. These data indicate that polysaccharides from A. pectinifera increase phase II detoxification enzyme activity and inhibit ODC and COX-2 activities in HT-29 human colon adenocarcinoma cells. Consequently, this effect may contribute to the protective effect of polysaccharides from A. pectinifera against colon cancer.
Water extract from Prunella vulgaris L. (PVW) was tested for colon cancer chemopreventive activity by measuring the activities of cytochrome P450 1A1, phase Ⅱ detoxification enzyme [quinone reductase (QR) and glutathione S-transferase (GST)] and ornithine decarboxylase (ODC) and glutathione (GSH) levels in cultured human colorectal adenocarcinoma HT-29 cells. PVW significantly inhibited 7,12-dimethylbenz[a]anthracene (DMBA)-induced cytochrome P450 1A1 activity at 10 and 50 ${\mu}g/ml$. PVW induced QR activity in a dose-dependent manner over a concentration range of $1{\sim}50\;{\mu}g/ml$. GST activity was also induced with the treatment of PVW in HT-29 cells. In addition GSH levels were increased with PVW. PVW inhibited ODC activity, a key enzyme of polyamine biosynthesis, which is enhanced in tumor promotion. These results suggest that Prunella vulgaris L. has colon cancer chemopreventive activity by inhibiting cytochrome P450 1A1 and ODC activities and by increasing phase Ⅱ enzyme activity and GSH levels.
In order to understand the mechanism of the regulation of drug metabolizing enzyme gene expression, we have studied the induction of CYP1A1 and GSTα, μ, π enzymes in Japanese monkey and rhesus monkey after the treatment with 3-methylcholanthrene (3MC) and di-n- butyl phthalate (DBP) and bisphenol A (BPA). The levels of mRNA were measured_by RT-PCR in brain, intestine and liver. In the case of adult monkey, treatment with 3MC induced CYP1A1 mRNA in brain by 2-fold. The treatment with DBP induced CYP1A1 mRNA. Effects of 3MC and DBP on GST mRNA expression was not clear. But GSTμ was slightly inhibited by the treatment with 3MC and DBP. GSTα was not induced by the treatment with 3MC and DBP in brain. GSTπ was slightly induced by the treatment with 3MC and DBP in brain. In the case of fetus monkey, the basal levels of fetus CYP1A1 mRNA and GSTs mRNA were relatively low compared to adult monkey. As the age of monkey increased, the basal levels of CYP1A1 mRNA were also increased. 3MC induced the expression of CYP1A1 mRNA in liver, whereas it didn't significantly induce CYP1A1 mRNA in brain. The levels of GSTμ and GSTα were not changed by the treatment with 3MC and DBP. GSTπ was slightly induced by the treatment with 3MC and DBP.
전력-종속 데이터 반전 기법(power-dependant data inversion: PDI)을 이용하는 저전력 PRAM을 제안하였다. PRAM은 많은 쓰기 전류를 오랜 시간동안 필요로 하기 때문에 많은 쓰기 전력을 소모하게 되고, #1#과 #0#을 저장하는데 사용하는 전력이 다르다. PDI는 이런 특성을 이용하여 원본 데이터와 반전된 데이터를 저장하기 위해 필요한 전력을 비교한 후, 전력을 적게 소모하는 데이터를 저장한다. PDI 기법은 각 데이터마다 추가적인 반전 비트를 사용 하지만, 기존의 쓰기 기법과 비교하여 최대전력과 평균전력을 각각 50%와 37.5% 이하로 크게 줄일 수 있다. 8bit 데이터를 저장하기 위한 평균 전력은 반전 비트의 영향으로 41%이하가 된다. 128$\times$8bits 1K-bit PRAM 칩을 0.5${\mu}m$ GST 셀을 갖는 0.8${\mu}m$ CMOS 공정으로 구현하였다.
식이성 아연의 급여 수준이 카드뮴을 투여한 흰주의 체내대사에 미치는 영향을 구명하고자 간손상 정도의 지표로 쓰이는 효소와 간해독 과정에 관여하는 효소의 활성을 생화학적 측면에서 관찰한 결과는 다음과 같다. 식이성 아연결핍군의 체중증가량, 식이섭취량 및 식이효율은 유의적으로 감소하였으며, 과잉군에서는 유의적이지는 않았으나 증가하는 경향이었다. 카드뮴은 체중 및 식이섭취량에 유의적인 영향을 미치지는 않았다. 간조직중의 GSH-Px, GST 및 catalase 활성은 식이성 아연 과잉과 결핍군 모두에서 감소하였는데, 특히 결핍시의 활성 감도는 유의적이었다. 카드뮴은 GSH-Px와 GST의 활성을 유의적으로 감소시켰으며, GST는 아연 과잉시 활성 감도 정도가 결핍군에 비하여 다소 억제된 것으로 나타났다. Catalase 활성은 카드뮴 투여시 아연결핍군에서 유의적인 감소가 있었으나 과잉군과 정상군에서는 그 감소가 유의적이지는 않았다. 간조직중의 LPO 함량은 식이성 아연 결핍시 유의적인 증가를 나타내었으며, 카드뮴은 아연 결핍보다 과잉시 LPO 생성이 지연되는 것으로 나타났다. GSH 함량은 결핍과 과잉군 모두 정상군에 비하여 유의적으로 감소를 나타내었으며, 카드뮴은 아연 결핍과 정상군의 GSH 함량을 유의적으로 감소시켰는데 정상군의 감소 정도가 가장 크게 나타났다. 혈청 AST와 ALT 활성은 정상군에 비하여 아연 결핍과 과잉시 증가하였으며, 특히 결핍시에 증가 정도가 크게 나타났다. 카드뮴은 AST 활성을 현저하게 증가시켰으나 각 군간에 유의성은 나타나지 않았다. 또한 카드뮴은 아연결핍군과의 정상군의 ALT의 활성을 유의적으로 증가시켰으며 과잉군의 경우 결핍군에 비하여 그 증가가 억제되었다. LDH 활성은 아연 공급수준에 따른 차이가 나타나지 않았으나, 카드뮴 투여는 그 활성을 유의적으로 증가시켰으며 아연과징군이 결핍군 보다 활성을 억제하는 것으로 나타났다. ALP는 아연결핍군의 활성 감소가 유의적이었으며, 카드뮴은 각 군의 활성을 유의적으로 증가시켰으나 아연 공급수준이 높아질수록 그 활성이 감소하였다.
본 연구에서는 간손상에 대한 해독제의 연구 및 안전성 평가연구로서 H$_2$-rcccptor길항제와 한방에서 건위역으로 이용되는 생약추출물 (생강, 정향 및 후박나무의 수피추출물, 강활, 시호, 토복령 및 금은화)이 화합물로 유발된 간독성에 미치는 효과를 고찰하였다. 또한 식물의 2차 대사산물로서 식품, 의약품 및 화장품 향신료 등의 첨가제로 이용되는 monotcrpcnoids중 $\alpha$-pinene, limonenc, gcraniol 및 cincol 이 phase II 효소계중 glutathione S-transferase(GST)의 class alpha 및 mu family계 효소와 microsomal cpoxidc hydrolase(mEH)의 발현에 미치는 영향을 관찰하였다.
일반적으로 상업화된 타원계는 회전 검광자(회전 편광자), 혹은 위상변조방식이 주를 이루고 있다. 회전 검광자나 위상변조방식의 타원계는 모터를 회전시키거나 위상을 변조시키는 방법에 의존하므로 하나의 타원상수쌍 ( ,Ψ)를 얻는데 수십 $\mu\textrm{s}$ - 수십 ms의 측정시간을 필요로 한다. 그러나, 예를 들어 상변화형 광기록매체인 Ge$_2$Sb$_2$Te$_{5}$(GST)와 같이 수십 ns 시간간격으로 비정질상과 결정상이 변화하면서 정보 데이터를 저장하거나 소거하게 되는 경우 비정질상에서 결정상으로 바뀌는 과정의 결정화과정을 측정하고 분석하기 위해서는 수 ns로 측정할 수 있는 장비가 필요하다. (중략)
A gene coding for phosphoketolase, a key enzyme of carbohydrate catabolism in heterofermentative lactic acid bacteria(LAB), was cloned from a Lactobacillus paraplantarum C7 and expressed in Escherichia coli. The gene is 2,502 bp long and codes for a 788-amino-acids polypeptide with a molecular mass of 88.7 kDa. A Shine-Dalgarno sequence(aaggag) and an inverted-repeat terminator sequence are located upstream and downstream of the phosphoketolase gene, respectively. The gene exhibits an identity of >52% with phosphoketolases of other LAB. The phosphoketolase of Lb. paraplantarum C7(LBPK) contains several highly conserved phosphoketolase signature regions and typical thiamine pyrophosphate(TPP) binding sites, as reported for other TPP-dependent enzymes. The phosphoketolase gene was fused to a glutathione S-transferase(GST::LBPK) gene for purification. The GST::LBPK fusion protein was detected in the soluble fraction of a recombinant Escherichia coli BL21. The GST::LBPK fusion protein was purified with a yield of 4.32mg/400ml by GSTrap HP affinity column chromatography and analyzed by N-terminal sequencing. LBPK was obtained by factor Xa treatment of fusion protein and the final yield was 3.78mg/400ml. LBPK was examined for its N-terminal sequence and phosphoketolase activity. The $K_M\;and\;V_{max}$ values for fructose-6-phosphate were $5.08{\pm}0.057mM(mean{\pm}SD)$ and $499.21{\pm}4.33{\mu}mol/min/mg$, respectively, and the optimum temperature and pH for the production of acetyl phosphate were $45^{\circ}C$ and 7.0, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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