• 대한의생명과학회지
• /
• 제10권4호
• /
• pp.407-413
• /
• 2004

Heterotrimeric GTP binding proteins (G proteins) transduce signals of a variety of hormones and neurotransmitters. Go is one of the most abundant G proteins in the brain and classified as the Gi/Go family due to their sequence homology to Gi proteins. While the Gi proteins inhibit adenylyl cyclase and decrease the intracellular cAMP concentration, the functions of Go is not clearly understood despite their sequence homology to Gi. The promeylocytic leukemia zinc finger protein (PLZF) is a DNA binding transcription factor and is expressed highly in central nervous system (CNS). Several studies reported that PLZF may be involved in regulation segmentation/differentiation during CNS development. Here, I report that the alpha subunit of Go (Go ) interacts with PLZF. The interaction between Goa and PLZF was verified by using GST pulldown assay and co-immunoprecipitation. Our findings indicate that Goa could modulate gene expression via interaction with PLZF during neuronal or brain development.

• 대한의생명과학회지
• /
• 제12권3호
• /
• pp.139-143
• /
• 2006

Jopock (Jpk) has previously been ascertained that induces both bacterial and mammalian cell death. The Escherichia coli cells expressing Glutathion S-transferase (GST) fused Jpk showed elongated phenotype and inhibited cell growth which led eventual cell death. In an attempt to search the genetic suppressor of the lethal protein Jpk in bacterial cells, we constructed a unidirectional protein expression vector inserting tac promoter next to the C-terminus Jpk in pGEX-Jpk. The function of additional tac promoter was confirmed by substituting lac promoter in Plac-TOPO plasmid. The cells harboring plac- TOPO, which regulates $lacZ{\alpha}$ gene expression under lac promoter, formed blue colonies in 5-bromo-4-3 $indolyo-{\beta}-D-galactoside$ (X-gal) plate. When lac promoter was changed to tac promoter, same results were observed. Since the addition of tac promoter did not affect the toxic effect of Jpk, the pGEX-Jpk-ptac could be a useful vector for the screening of suppressor(s) for Jpk, in which GST-Jpk and a putative Jpk-suppressing protein are coexpressing from two unidirectional tac promoters, which response to the same inducer, $isopropyl-{\beta}-D-thiogalactopyranoside (IPTG)$.

• 한국식품과학회지
• /
• 제31권1호
• /
• pp.252-256
• /
• 1999

한우육의 사태(M. Semitendinosus)를 대상으로 감마선 조사선량(0, 1, 3, 5, 10 kGy)에 따른 지질성분과 항산화 효소 활성도 및 ${\alpha}-tocopherol$ 함량의 변화를 측정하였다. 총 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 및 중성지질 함량에서는 비조사군과 조사군간에 유의적인 차이를 보이지 않았다(p>0.05). 항산화 효소의 활성에서 GST, catalase, SOD 역시 비조사군과 조사군간에 유의적인 차이를 보이지 않았다(p>0.05). 한편, 등심부위의 ${\alpha}-tocopherol$ 함량은 감마선 조사선량이 증가함에 따라 유의적으로 감소되었다(P<0.05).

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제28권1호
• /
• pp.199-204
• /
• 1999

This study has attempted to examine the effect of Artemisia iwayomogi extract on antioxidant and liver function related enzymes in rats fed high fat diet along with B( )P administration. The activities of the serum glutamic oxaloacetic transaminase, glutamic pyruvate transaminase and alkaline phosphatase of the rats fed Artemisia iwayomogi ethanol extract were decreased compared to the control. Similarily, the activities of the enzymes were also decreased when the combination of B( )P and ethanol extracts were administered compared to the group adminstered only B( )P. On the other hand, high fat diet increased the above liver function related enzymes. The activities of antioxidant enzymes including GST, catalase and Cu,Zn SOD were significantly increased by feeding the extracts (p<0.01) in addition to the increase of tocopherol contents in the serum. These results suggest that Artemisia iwayomogi extracts can protect cell membranes from the damages by free radicals or hydroperoxides and further may lead to the protection from cancer risks.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제37권3호
• /
• pp.203-209
• /
• 1994

$^{14}C-{\alpha}-endosulfan$(100 nM, $41\;{\mu}g$)을 공시어의 각 조직(간, 신장, 소화관) 추출액에 처리하여 대사물질의 생성과 이에 미치는 cofactor의 영향을 시험관내 반응으로 비교한 결과, 105,000 g soluble fraction에서 phase I system에 해당되는 cofactor의 첨가시 공시어의 간 조직에서 가장 높은 대사물질 생성율을 보였고 phase II system에서는 NADPH를 cofactor로 첨가하였을 때 간과 신장조직에서 높은 대사물질 생성율을 보였다. 하지만 소화관 조직에서는 GSH 단독처리나 GSH+NADPH의 혼합처리시 높은 대사물질 생성율을 보였다. 또한 microsomal fraction에서는 phase I system에 해당되는 cofactor의 첨가시 공시어의 소화관 조직에서, phase II system의 경우 NADPH 단독처리나 NADPH+GSH 혼합처리시 대사물질의 생성이 가장 많았다. 이러한 결과로 보아 공시어의 간과 신장에서는 MFO에 의한 대사작용이, 소화관에서는 GST에 의한 대사작용이 활발하다고 할 수 있었다. 공시어의 각 조직에서 높은 생성율을 보인 대사물질은 EA(endosulfan alcohol), EE(endosulfan ether), EHE(endosulfan hydroxyether)이었으며 in vivo 시험에서와 마찬가지로 endosulfan sulfate는 검출되지 않았다. 이 실험에서 ${\alpha}-endosulfan$은 잉어체내에서 ${\beta}-endosulfan$으로 이성화되었다가 EA로 가수분해되거나 직접 EA로 가수분해되어 다시 EE나 EHE로 산화되며 EHE는 EL(endosulfan lactone)로 산화되는 것으로 제안할 수 있었다.

• 미생물학회지
• /
• 제45권4호
• /
• pp.416-418
• /
• 2009

번데기동충하초의 간독성 회복 효과를 HaM/ICR 계열의 흰쥐를 이용하여 검정하였다. 벤조피렌 복강주사시, 혈중의 aspartate aminotransferase (AST) 및 alanine aminotransferase (ALT)의 효소활성과 간조직의 lipid peroxide (LPO) 농도는 대조군과 비교시 급격히 증가하여 간독성을 유발하였다. 그러나, 벤조피렌 대조군과 비교시, 번데기 동충하초 배양액의 경구 투여시 AST와 ALT의 효소활성 및 LPO 농도는 감소하였으며, 벤조피렌에 유도된 간 조직의 glutathione 농도 및 glutathione S-transferase 효소활성은 증가하여 간독성을 회복하였다. 실험결과는 번데기 동충하초 균사체 배양액이 벤조피렌 유발 간독성에 대해 회복 효과가 있음을 보여준다.

• 대한의생명과학회지
• /
• 제2권2호
• /
• pp.175-185
• /
• 1996

모든 진핵세포에 존재하며 세포의 성장 및 분화에 주로 관계되는 신호전달물질의 하나인 Mitogen-activated protein(MAP)kinase의 mitogen에 의한 핵내 활성화와 기질 인산화에 대해 알아보기 위해 본 실험을 수행하였다. P388세포를 10% fetal bovine serum이 첨가된 DMEM배지에 배양한 후, 혈청이 들어있지 않은 배지에서 24시간 더 배양하고 serum 및 PMA를 농도별로 처리하여 세포성 장을 위한 최적 농도를 확인한 결과 serum은 5-20% 농도에서 세포성장을 촉진시켰고 PMA는 실험한 모든 농도에서 세포성장을 거의 촉진시키지 못하는 경향을 확인하였다. 이어 P388 세포를 serum 및 PMA로 10 분간 활성화하여 파쇄한후 세포질분획과 핵분획으로 분리하여 각 분획을 10% gel 상에서 전기영동 하여 nitrocellulose paper에 옳긴 후 anti-ERKI antibody를 이용해 확인해본 결과 serum, PMA로 처리된 세포 모두에서 MAP kinase의 핵내 이동이 관찰되었으며 특히 세포질 내에 주로 존재하는 42, 44 Kd의 MAP kinase isoform중 42 Kd의 isoform이 주로 핵내로 이동되는 것이 관찰되었다. MAP kinase의 기질인산화 실험을 위해 serum으로 활성화시킨 세포를 파쇄하여 SP-sephadex C-50, Phenyl superose, Mono Q column의 순서로 chromatography를 시 행하여 MAP kinase를 부분분리 하였다. 이와 같이 얻은 MAP kinase를 가지고 면역 T세포에 존재하는 tyrosine kinase인 $p56^{lck}$ 의 N-terminal peptide로 구성된 GST-fusion protein에 대한 인산화를 확인하였다. 또한 세포에서 분리한 MAP kinase를 가지고 transcription factor의 하나인 c-Jun protein에 대한 인산화실험을 실시한 결과 MAP kinase에 의해 인산화 됨이 확인되었다. 이상의 결과를 통해 P388세포는 (1)세포 성장시 외부 신호를 G-protein-coupled receptor/protein kinase C/MAP kinase의 경로보다는 주로 tyrosine kinase receptor protein/Ras/MAP kinase의 경로를 이용하여 핵으로 전달하는 것으로 추측되 며 (2) mitogen의 처리로 활성화된 MAP kinase중 주로 42 Kd isoform이 핵내로 이동하고, 분리한 MAP kinase가 GST-fusion protein과 transcription factor인 c-Jun을 모두 인산화 시키는 결과로 보아 MAP kinase의 isoform에 따라 표적 compartment가 다르고 결과적으로 표적 기질에 차이가 있을지 모른다고 간접적으로 추론할 수 있다.

• Nutrition Research and Practice
• /
• 제16권6호
• /
• pp.729-744
• /
• 2022

BACKGROUND/OBJECTIVES: 4-Hydroxy-2-nonenal (HNE) is a biomarker for oxidative stress to induce inflammation. Methionine is an essential sulfur-containing amino acid with antioxidative activity. On the other hand, the evidence on whether and how methionine can depress HNE-derived inflammation is lacking. In particular, the link between the regulation of the nuclear factor-κB (NF-κB) signaling pathway and methionine intake is unclear. This study examined the link between depression from HNE accumulation and the anti-inflammatory function of ⳑ-methionine in rats. MATERIALS/METHODS: Male Wistar rats (3-week-old, weighing 70-80 g) were administered different levels of ⳑ-methionine orally at 215.0, 268.8, 322.5, and 430.0 mg/kg body weight for two weeks. The control group was fed commercial pellets. The hepatic HNE contents and the protein expression and mRNA levels of the inflammatory mediators were measured. The interleukin-10 (IL-10) and glutathione S-transferase (GST) levels were also estimated. RESULTS: Compared to the control group, hepatic HNE levels were reduced significantly in all groups fed ⳑ-methionine, which were attributed to the stimulation of GST by ⳑ-methionine. With decreasing HNE levels, ⳑ-methionine inhibited the activation of NF-κB by up-regulating inhibitory κBα and depressing phosphoinositide 3 kinase/protein kinase B. The mRNA levels of the inflammatory mediators (cyclooxygenase-2, interleukin-1β, interleukin-6, inducible nitric oxide synthase, tumor necrotic factor alpha) were decreased significantly by ⳑ-methionine. In contrast, the protein expression of these inflammatory mediators was effectively down regulated by ⳑ-methionine. The anti-inflammatory action of ⳑ-methionine was also reflected by the up-regulation of IL-10. CONCLUSIONS: This study revealed a link between the inhibition of HNE accumulation and the depression of inflammation in growing rats, which was attributed to ⳑ-methionine availability. The anti-inflammatory mechanism exerted by ⳑ-methionine was to inhibit NF-κB activation and to up-regulate GST.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
• /
• 제54권4호
• /
• pp.449-458
• /
• 2003

연구배경 : Cyclosporin A(CsA)와 tacrolimus(FK506)은 현재 임상에서 널리 쓰이는 면역억제제이다. CsA와 FK506이 $I{\kappa}B/NF-{\kappa}B$ 경로에 미치는 영향에는 세포에 따라 다양한 효과가 알려져 있다. 그러나 CsA와 FK506이 기관지 상피세포에서 $I{\kappa}B/NF-{\kappa}B$ 경로에 미치는 효과에 관해서는 알려져 있지 않고, 각종 염증 세포에서의 차이에 관해서도 보고가 미미한 실정이다. 본 연구에서는 비염증세포인 기관지상피세포와, 폐의 염증에 중요한 역할을 하는 염증 세포(폐포대식세포, 단핵구, 림프구)에서 CsA와 FK506이 $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해에 미치는 영향과 그 기전을 평가하였다. 방 법 : 비염증세포로는 BEAS-2B와 A549 세포주를 이용하였다. FK506 또는 CsA 전처치 후 TNF-${\alpha}$로 자극하고 anti-$I{\kappa}B{\alpha}$ 항체를 이용한 Western blot으로 $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해 여부를 관찰하였다. 염증세포로는 폐포대식세포, 말초혈액 단핵구 및 림프구를 이용하였고, 역시 FK506 또는 CsA 전처치 후 TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, LPS로 자극하고 anti-$I{\kappa}B{\alpha}$ 항체를 이용한 Western blot으로 $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해 여부를 관찰하였다. IKK의 활성도는 GST-$I{\kappa}B{\alpha}$를 기질로 이용한 in vitro immune complex kinase assay로 평가하였다. 결 과 : 사용된 모든 세포에서 CsA와 FK506은 $I{\kappa}B{\alpha}$의 발현에 영향을 미치지 않았다. 기관지 상피세포에서 TNF-${\alpha}$ 자극에 의한 $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해는 CsA의 전처치로 억제되었으나, FK506의 전처치로는 억제되지 않았다. 단핵구, 림프구 및 폐포대식세포에서 외부자극에 의한 $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해는 CsA 또는 FK506의 전처치로 억제되었으나 IKK활성은 억제되지 않았다. 결 론 : CsA와 FK506은 각각 기관지 상피세포와 단핵구, 림프구, 폐포대식세포에서 외부 자극에 의한 $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해를 억제하는데, 이는 IKK 활성화의 억제가 아닌 다른 경로를 통하는 것으로 생각된다.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제36권5호
• /
• pp.521-526
• /
• 2007

홍삼분말이 $B(\alpha)P$의 투여에 의한 간 독성이 유발된 생쥐에서의 글루타치온 및 과산화지질 함량, 항산화효소 활성에 미치는 영향을 살펴보았다. $B(\alpha)P$ 투여에 의해 증가된 혈청내 ALT와 AST의 활성이 홍삼분말 전 처리군에서는 감소하였다. 간 조직중의 글루타치온 함량은 $B(\alpha)P$ 단독군에서는 감소되었다가 홍삼분말 투여시 유의적인 증가를 보였고, 지질과산화물 함량은 $B(\alpha)P$ 투여시 증가되었다가 홍삼분말의 투여시 유의적으로 감소되었다. 간 조직중의 SOD, catalase 그리고 GSH-Px의 활성도 $B(\alpha)P$ 투여로 유의적으로 증가되었다가, 홍삼분말의 투여로 이들 활성이 유의적으로 감소하였다. 반면, GST 활성은 $B(\alpha)P$ 단독군에서는 감소되었다가 홍삼분말 투여시 유의적인 증가를 보였다. 이상의 결과로 홍삼분말은 항산화효소의 활성에 의한 $B(\alpha)P$에 의한 간 손상에 대한 보호효과를 가지는 것으로 사료된다.