Jee, Jung-Hoon;Keum, Yoo-Hwa;Bae, Jun Sung;Lee, Chae Won;Yang, Chan Yeong;Choi, Sang-Hoon;Kang, Ju-Chan;Park, Kwan Ha
한국어병학회지
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제32권2호
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pp.113-121
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2019
Effects on glutathione-related antioxidant parameters were examined after a chronic exposure of olive flounder, Paralichthys olivaceus to dietary 4-tert-octylphenol (4-tert-OP). Fish were fed diets containing 4-tert-OP at 0, 1, 5 and 10 mg/kg diet for 6 weeks. Antioxidant parameters examined were reduced glutathione (GSH) contents and enzyme activities of glutathione reductase (GR), glutathione S-transferase (GST) and glutathione peroxidase (GPx) in tissue homogenates of the liver, kidney and gill. It was observed that all parameters examined increased although there were some differences in dose responses and temporal patterns in the increase. GSH contents increased after exposure to 4-tert-OP in the three organs examined. However, the GSH increase was evident only after 4 weeks in the liver whereas it was elevated after 2 weeks in the kidney and gill. GR activity exhibited a significant increase in response to 4-tert-OP at 1 mg/kg in all three organs, however, its activity returned to control levels when exposed to 5 and 10 mg/kg. Hepatic GST activity showed an earlier increase at week 2 in contrast to the kidney and gill where they increased after 4 weeks of 4-tert-OP exposure. Temporal patterns in GPx activity changes to 4-tert-OP exposure were dissimilar among the organs: hepatic activity increased from week 2 through week 6; renal activity increased transiently at week 2; gill levels were higher through weeks 4 - 6. The results suggest that elevation of several GSH-related antioxidant parameters can be considered as evaluation criteria for 4-tert-OP-induced oxidative stress in a fish.
본 실험은 가수분해 시킨 유청단백질과 Lb. casei HY2782의 세포 추출물을 인간 전립선 세포에처리하여 세포 내 glutathione 농도 상승효과와 산화제 tbutyl hydroperoxide (TBHP)에 의한핵산 손상 방지 효과를 알아보기 위한 실험으로 전립선 세포 RWPE1 cells와 PC3MMM2 cells에 hydrolyzed WPI(500g/m)를 48시간 동안 처리 시, 가수분해 시키지 않은 WPI 보다 각각 28.2%, 38.4%씩 GSH 농도가 증가하는 것을 유의적으로 확인할 수 있었고(p<0.05), 카제인의 경우 RWPE1 cells and PC3MMM2 cells에 처리 시 가수분해 시킨 카제인과의 유의차가 보이지 않았으며 (p<0.05), glutathione 합성저해제인 Buthionine sulfoximin (BSO) 처리 시 Glutathione 농도가 현저하게 낮아지는 것을 확인할 수가 있었다(Anderson, 1998). 전립선 세포 RWPE1 cells 와 PC3MMM2 cells에 Lb. casei HY2782 세포 추출물 처리 시 PC3MMM2 cell에서는 GSH의 농도가 유의적으로 증가하는 것을 확인 할 수 있었고(p<0.05), RWPE1 cell에서는 증가 성향을 확인 할 수가 있었다.가수분해 시킨 유청단백질과 Lb. casei cell 세포추출물 처리 시 산화제에 의한 세포의 DNA 손상 억제정도와 사멸율의 변화를 확인 한 결과, 가수분해 WPI를 처리 후 Oxidant tbutyl hydroperoxide (TBHP)(500mM)를 이용하여 PC3MMM2 세포에 산화적인 스트레스를 주었을 시, TBHP만 처리한 구에서는 62.0%의 생존율을 나타내었고, glutathione 합성저해제인 BSO를 첨가시킨 처리구에서는 33.7%의 생존율을 나타내었다. 가수분해 시킨 WPI와 카제인 처리구에서는 각각 86.7%, 63.6%의 생존율을 나타내었고, WPI와 BSO를 함께 처리한 구에서는 71.5%의 생존율을 나타내었다. 이는 BSO에 의해 GSH의 생성이 저해되어 나타난 결과로 보여지며(Anderson, 1988), 가수분해시킨 WPI 가 가수분해 시킨 카제인보다는 높은 생존율을 나타내는 것을 유의적으로 확인할 수가 있었다. (p<0.05) Lb. casei 세포 추출물처리에 의한 생존율에서는 가수분해시킨 WPI와 유사한 수준의 82.4%의 생존율을 보였다. 가수분해시킨 유청단백질과 Lb. casei cell 세포추출물에 의한 세포에서의 glutathione 농도 증가에 의해 산화제에 의한 DNA의 손상이 적었던 것으로 사료되어지고, 이로 인해 생존율이 높았던 것으로 판단된다.
율무의 simazine에 대한 내성이 GSH와의 conjugation에 의한 약제의 불활성화 반응에 기인하는지 여부를 검정하기 위하여 화본과 작물인 옥수수와 비교하여 약제의 흡수 및 대사속도, GSH 함량 및 GST 활성, GST isozyme의 발현 양상 및 작용점에서의 약제에 대한 감수성의 차이를 조사하였다. 율무와 옥수수 모두 배양액중에 포함된 simazine에 대하여 약제처리 초기부터 빠른 흡수를 보였으며, 처리 12시간 후에는 두 초종 간의 흡수속도에 있어서 차이가 인정되지 않았다. 율무에 흡수된 simazine은 GSH-simazine conjugate의 형태로 신속히 대사되었으며, 특히 약제처리 $1{\sim}6$시간 까지의 처리 초기에는 율무에서의 대사속도가 옥수수에 비하여 약 2배정도 빠르게 나타났다. 두 초종 모두 초엽부에서 가장 높은 GSH 함량 분포를 보였다. 초종별로는 율무에서의 GSH 함량이 옥수수에 비하여 전반적으로 높게 나타났으며, 특히 율무의 초엽부와 근부에서 옥수수에 비하여 GSH함량이 각각 1.5배와 2.3배씩 높게 나타났다. GST[CDNB] 활성은 초종 간에 차이가 인정되지 않았으나, GST[simazine] 활성에 있어서는 옥수수에 비하여 율무의 모든 조직에서 약 2배 정도 높은 활성을 보였다. 두 초종 모두 지상부에서의 GST[simazine]활성이 근부에 비하여 $20{\sim}30%$ 정도 높게 나타났다. 율무와 옥수수에서 나타난 simazine에 대하여 특이성을 갖는 GST 활성의 차이를 이해하기 위하여 FPLC-anion exchange 컬럼을 이용하여 GST isozyme 활성을 조사하였다. 율무에 있어서 GST[CDNB] 활성을 보이는 1개 피크와 GST[simazine] 활성을 보이는 2개의 피크가 옥수수의 활성 피크와 같은 NaCl 농도범위에서 나타났으며, 이들의 활성은 옥수수에 비하여 높게 나타났다. 옥수수에서는 나타나지 않은 1개의 GST[simazine] 활성 피크가 율무에서 검출되었으며, 이 GST[simazine] 활성은 CDNB에 대하여 전혀 활성을 나타내지 않았기 때문에 율무에 simazine 특이성의 다른 GST isozyme이 존재함을 시사해 주고 있다. 율무와 옥수수의 완전 엽으로부터 추출한 엽록체 thylakoid막에 의한 전자전달 활성은 simazine $1{\sim}100\;{\mu}M$ 수준에서 매우 유사한 경향으로 억제되었다. 이상의 결과들은 율무의 simazine 내성이 흡수된 약제가 GSH와의 conjugation에 의하여 신속히 불활성화됨으로써 나타나며, 이러한 simazine 대사활성의 차이는 식물체에 내재하는 GSH 함량 및 GST 활성과 밀접한 상관성이 있음을 시사해 주고 있다.
활성산소의 세포막 파괴 효과로부터 보호작용과 항산화 활성이 강한 균주를 선별하기 위하여 33균주에 대한 세포네 glutathione 함유율과 linoleic acid 산화억제활성을 측정하였다. Lactobacillus casei CU4114 25.15 umol/g으로 가장 높은 함유율을 보이고 있으며Lactobacillus rhamnosus CU4201, Lactobacillus plantarum CU4203이 14.0umol/g으로 통계적인 유의성을 나타내는 수준으로 높은 함유율을 나타내었다. 포자형 성균주중의 glutathione 함유율 측정 결과 Lactobacillus sporogenes CU4109, Sporolactobacillus inulinus CU4110 은 Bacillus coagulans 균주의 GSH 함유율보다 유의성이 인정되는 높은 함유율을 나타내었다. L. acidophilus CU4111, L. casei CU4114, L. brevis CU4206, L. helveticus Cu4231은 Lactobacillus spp. 중 높은 항산화 활성을 나타내었고 Bacillus coagulans의 항산화 활성범위는 6.02${\sim}$51.72%로 나타났으며 Bacillus coagulans 균주의 항산화 활성이 Lactobacillus spp.의 산화억제활성보다 높은 성향을 나타내었다.
The purpose of this study was to examine the chemopreventive potential of taurine at various levels on the diethylnitrosamine (DEN)·induced hepatocarcinogenesis. Male Sprague-Dawley rats were fed on diets containing 0, 1, 2, 3% taurine or 5% ${\beta}-alanine$ for taurine depletion. Then they were treated with DEN and 2/3 partial hepatectomy. The number of placental glutathione S-transferase positive ($GST-P^+$) foci, as a preneoplastic marker in the 1 % taurine group was lower than the control diet group. However the difference was insignificant. Although taurine diets reduced the thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) level, the number of $GST-P^+$ foci was increased in 3% taurine diet group. The 1 % taurine diet increased the glutathione (GSH) level and GST activity, however they unfortunately did not suppress the foci formation. In the 3% taurine group, the GSH level and GSH peroxidase (GPx) activity were significantly decreased. Excess taurine supplementation of the pharmaceutical dose worked against hepatic chemoprevention, which might result from modulation of GPx activity and GSH utility. On the contrary, taurine might work as an antioxidant against TBARS production as the 1 % taurine diet increased GSH level. The potency of the cancer preventive effect of taurine still remains and further studies should investigate the effect of taurine with less than 1 % levels on the prevention of hepatic cancer.
We examined the neurotoxic effects of 3 glutathione (GSH) depletors, buthionine sulfoximine (BSO), diethyl maleate (DEM) and phorone, under the presence of trolox, cycloheximide (CHX), pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) or MK-801 in primary mouse cortical cell cultures. All three depletors induced neuronal death in dose and exposure time dependent manner, and decreased total cellular GSH contents. The patterns of the neuronal death and the GSH decrements were dependent on the individual agents. DEM $(200\;{\mu}M)$ induced rapid and irreversible decrement of the GSH. BSO (1 mM) also decreased the GSH irreversibly but the rate of decrement was more progressive than that of DEM. Phorone (1 mM) reduced the GSH content to 40% by 4 hr exposure, that is comparable to the decrement of BSO, but the GSH recovered and reached over the control value by 36 hr exposure. BSO showed a minimal neurotoxicity $(0{\sim}10%)$ at the end of 24 hr exposure, but marked neuronal cell death at the end of 48 hr exposure. The BSO (1 mM)-induced neurotoxicity was markedly inhibited by trolox or CHX and partially attenuated by MK-801. DEM induced dose-dependent cytotoxicity at the end of 24 hr exposure. Over the doses of $400\;{\mu}M,$ glial toxicity also appeared. DEM $(200\;{\mu}M)-induced$ neurotoxicity was markedly inhibited by trolox or PDTC. Phorone (1 mM) induced moderate neurotoxicity (40%) at the end of 48 hr exposure. Only CHX showed significant inhibitory effect on the phorone-induced neurotoxicity. These results suggest that the GSH depletors induce neuronal injury via different mechanisms and that GSH depletors should be carefully employed in the researches of neuronal oxidative injuries.
The aim of this study was to investigate the difference in the serum malondialdehyde (MDA), glutathione (GSH), and nitric oxide (NO) levels between normal and T. gondii-infected patients. To this end, MDA, GSH, and NO levels in the sera of 37 seropositive patients and 40 participants in the control group were evaluated. In Toxoplasma ELISA, IgG results of the patient group were $1,013.0{\pm}543.8$ in optical density (mean ${\pm}$ SD). A statistically significant difference was found between patients and the control group in terms of MDA, GSH, and NO levels. A decrease in GSH activity was detected, while MDA and NO levels increased significantly. Consequently, it is suggested that the use of antioxidant vitamins in addition to a parasite treatment shall prove useful. The high infection vs control ratio of MDA and NO levels probably suggests the occurrence as a mechanism of tissue damage in cases of chronic toxoplasmosis. Moreover, it is recommended that the patient levels of MDA, GSH, and NO should be evaluated in toxoplasmosis.
Kim, So-Hyun;Kim, Jae-Il;Park, Hye-Ri;Kim, Mi-Kyoung;Chong, Yoo-Hoon;Yeo, Woon-Seok
Bulletin of the Korean Chemical Society
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제30권11호
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pp.2574-2576
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2009
In this work, we describe a new sensor that specifically responds to biothiols, i.e., glutathione (GSH), in solution. An electrochemical transducing strategy was utilized and cyclic voltammetry (CV) was employed to monitor the presence of GSH in real time. Our approach harnessed self-assembled monolayers (SAMs) on gold consisting of an alkanethiolate which was terminated by electroactive quininoid moiety. Prior to thiol molecule treatment, the characterisitc reversible redox peaks of the electroactive quininoid group was observed, while the reduction peak was dramatically shifted upon a treatment of GSH. This sensor showed the capability to detect the GSH in solution in the range of 1 mM $\sim$ 100 aM. We believe that this strategy will provide an important tool for accurate, sensitive, rapid, and low-cost determination of GSH.
It has been known that quercetin, a bioflavonoid widely distributed in fruits and vegetables as dietary-derived flavonoid and exert significant multiple biological effects such as antioxidant and anti-inflammatory, anti-tumor effects. In addition, it has been shown to have a chemoprotective role in cancer, though complex effects on signal transduction involved in cell proliferation and angiogenesis. The present study investigated whether quercetin can enhance antioxidant enzyme activity (glutathione peroxidase: GPx, superoxide dismutase: SOD, catalase: CAT) and regulate the reactive oxygen species (ROS) generation in the presence of vitamin E, L-ascorbic acid, reduced glutathione (GSH) on B16F10 murine melanoma cells. After 48h treatment of cells with quercetin in the presence of vitamin E, L-ascorbic acid, GSH, we measured the cytotoxicities by MTT assay. The cells exhibited a dose-dependent inhibition in their proliferation in the presence of vitamin E, L-ascorbic acid, GSH respectively. We also investigated the effects of antioxidant enzyme activity and ROS generation. The antioxidant enzyme activity of quercetin in the presence of vitamin E was stronger than GSH, L-ascorbic acid, the same treatments decreased ROS generation in B16F10 murine melanoma cells. Taken together, these result demonstrate that the antioxidant effect of quercetin can enhanced in the presence of vitamin E and it might plays an important role in anti-oxidative effects.
본 연구는 EMT-6 세포를 이용하여 무기수은, 유기수은 및 카드뮴의 세포독성에 대한 glutathione(GSH)의 방어효과를 알아보고자 하였다. 무기수은, 유기수은 및 카드뮴을 첨가한 배양조건에서 EMT-6 세포의 세포생존율, ${NO_2}^-$ 및 ATP 생성량은 첨가한 중금속의 농도가 증가할수록 용량의존적으로 감소하였다. GSH, OTC 및 BSO를 단독 첨가한 배양조건은 세포의 세포생존율과 NO2- 및 ${NO_2}^-$ 생성량에 영향을 주지 않았다. 수은화합물 및 카드뮴과 GSH를 동시 첨가한 배양조건에서는 세포생존율이 90% 이상 유지되었고, ${NO_2}^-$ 및 ATP 생성량은 기본배양조건과 비슷한 수준으로 나타났다. $16{\mu}M$의 무기 및 유기수은과 $160{\mu}M$의 카드뮴을 첨가한 실험조건에 GSH를 동시 첨가했을 경우 방어효과는 GSH의 농도에 따라 용량의존적으로 증가하였다. 세포내에서 수은 및 카드뮴의 세포독성에 대한 GSH역할을 알아보고자 GSH, OTC, BSO 전처리 실험을 한 결과, GSH의 전처리는 이들이 세포막을 통과하지 못하기 때문에 대조군과 비슷한 양상으로 나타난 반면에 BSO를 전처리한 군에서는 세포내 GSH 농도의 감소로 수은의 세포 독성이 증가하여 대조군에 비하여 ${NO_2}^-$와 ATP 생성량이 현저히 감소하였다. 또한 세포내 GSH의 농도를 증가시키는 OTC를 전처리한 결과 수은의 독성에 대한 방어효과가 시간 및 용량 의존적으로 현저하게 증가하였다. 이러한 실험결과는 수은의 세포독성에 대한 GSH의 방어효과가 GSH 세포내 농도와 밀접한 관련이 있음을 간접적으로 보여주고 있다. 본 연구의 결과는 수은 및 카드뮴의 독성에 대한 GSH의 방어작용이 단순히 -SH기와 중금속의 결합에 의한 결과가 아니라 세포내에서 GSH 분자가 갖는 고유의 기능으로 판단되며, 특히 중금속에 의한 에너지대사의 장애를 GSH가 회복시킬 수 있음을 보여준다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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