• 생명과학회지
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• 제18권7호
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• pp.912-917
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• 2008

유전자재조합 hG-CSF의 생리활성을 분석하기 위하여 편상의 암세포로부터 분리되어진 cDNA를 이용하여 hG-CSF 유전자를 분리하여 동물세포(CHO cell lines)를 이용하여 재조합 단백질을 생산하였다. 재조합 단백질의 체내 생리활성을 분석하기 위하여0일과 2일에 피하주사 후 5일에 혈액을 채취하여 백혈구 수를 분석하였다. 투여 전과 비교하여 5일째에 백혈구 수는 현저하게 증가하였다. 또한, pEGFP-mUII-hG-CSF벡터를 소 태아로부터 분리되어진 체세포에 형질전환을 시켜서, EGFP signal을 나타내는 세포를 confocal를 이용하여 분리하여 수립하였다. 따라서, 이러한 결과는 유전자재조합 hG-CSF는 체내에서 강력한 생리활성을 나타내며, 또한 당쇄가 첨가되어지고 이중으로 연결되어진 새로운 돌연변이체를 포함하여 고 활성 재조합체의 생산이 가능할 것으로 보이며, pEGFP-mUII-hG-CSF벡터는 복제 형질전환 가축 생산을 위하여 유용하게 사용되어질 것으로 사료된다.

• BMB Reports
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• 제30권5호
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• pp.346-351
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• 1997

The maximum adsorption/desorption conditions and the adsorption mechanism of globular proteins to vaccine adjuvants were determined. The maximum adsorption ratio of protein to the $Al^{3+}$ content of aluminum oxyhydroxide and the optimal adsorption pH are 2:1 (${\mu}g:{\mu}g$) for bovine serum albumin (BSA) at pH 6.0 and 2.5:1 (${\mu}g:{\mu}g$) for immunoglobulin G (IgG) at pH 7.0, respectively. The maximum adsorption ratio onto aluminum phosphate gel was 1.5:1 (${\mu}g$ Protein:${\mu}g$ $Al^{3+}$) at pH 5.0 for both BSA and IgG. Adsorption of the native globular proteins, BSA and IgG, to aluminum oxyhydroxide and aluminum phosphate gel was reversible as a function of pH. Complete desorption of these proteins from aluminum phosphate gel was observed at alkaline pH, whereas only 80~90% removal from aluminum oxyhydroxide was achieved with alkaline pH and 50 mM phosphate buffer. We conclude that electrostatic and hydrogen bonding interactions between the native proteins and adjuvants are important binding mechanisms for adsorption, and that the surface charge of the protein and the colloid components control the maximum adsorption conditions.

• KSBB Journal
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• 제10권5호
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• pp.598-603
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• 1995

현재 국내 주정공장에서 사용되고 있는 타파오카를 액화 및 당화시켜 얻은 당화액과 당화액에서 분 리된 고형분으로 회분실험과 total cell retention c culture 실험을 하였다. 당화액에 의한 회분 실험결과 에탄올 수율은 0.48 g-ethanol/g- (reducing s sugar)으로서 약 $180g/\ell$의 환원당이 36시간만에 거의 다 소모되어 약 $84g/\ell$의 에탄올이 생성되었다. 이 때 최종 효모농도는 $8.5{\times}107$ cellsjml(약$2.30g/\ell$) 이었다. 원료 중 환원당농도가 $224g/\ell$이고 희석속도가 $0.18h^{-1}$ 인 total cell retention culture 실험에서는 효모농도가 약 $40g/\ell$, 잔류 환원당농도 가 약 $15g/\ell$로서 포도당은 거의 소모된 것으로 나 타났다. 에탄올농도는 약 $81.4g/\ell$로서 이의 부피 생산성이 약 $14.7g/\ell$-h이었다. 원료 중 환원당농도가 $205g/\ell$ 이고 희석속도가 $0.2h^{-1}$이며 bleed가 있 는 cell retention culture 실험에서는 효모의 농도가 약 $22g/\ell$까지 증가하였고 에탄올농도는 $685g/\ell$부근에서 진통하였으며 생산성은 약 $13.6g/\ell$-h이 다. 약 $12g/\ell$의 잔류 환원당 중에 약 $4.5g/\ell$의 포도당이 포함되어 있었다. 타피오카 당화액으로부터 분리된 고형분을 사용한 실험을 통하여 고형분도 기 질로서 효용가치가 어느 정도 있는 것으로 판명되었으며 당화액 발효조와 별도로 고형분 발효조의 개발도 필요한 것으로 생각되었다.

• 한국자원식물학회지
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• 제21권5호
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• pp.408-412
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• 2008

본 연구는 기능성소재 개발에 이용될 수 있는 유용한 기초자료를 얻고자 구아바 잎의 총페놀화합물의 함량, 항산화활성, tyrosinase 저해활성을 측정하였다. 1. 구이바잎 추출물의 총페놀화합물은 19.0(g/100g, D.W.)의 함량으로 강한 항산화활성을 보였다(radical 소거활성의 IC50는 $102.5{\mu}g/ml$, SOD 유사활성의 IC50는 $49.4{\mu}g/ml).$) 2. 용매분획물의 radical 소거활상을 측정한 결과, $100{\mu}g/ml$의 농도에선도 ethylacetate(G-E), butanol(G-B), 물분획(G-W)은 50% 이상의 높은 소거활성을 보였다 radical 소거 활성은 G-B>G-E>G-W 순으로 높은 활성을 보였고, 각 분획물의 농도가 증가할수록 소거능이 높아지는 경향을 나타냈다. hexane분획(G-H)의 소거활성은 보이지 않았다. 3. 용매분획별 SOD 유사활성에 대한 결과, $100{\mu}g/ml$의 농도에서 G-E, G-B, G-W는 각각 81.8, 84.7, 65.3%로 높은 활성을 나타냈으며, 각 분획물의 농도가 증가할수록 SOD 유사활성도 증가하는 경향을 나타냈다 G-H의 활성은 보이지 않았다. 4. 구아바잎의 추출물과 용매분획물의 tyrosinase저해 효과를 측정한 결과, 추출물 1mg/ml의 농도에서 60.8%의 저해효과을 보였으며, 용매분획은 G-E(65.2%), G-B(62.8%), G-W(51.6%), G-H(28.9%)의 순으로 tyrosinase 저해효과를 보였다.

• Journal of Nutrition and Health
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• 제8권1호
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• pp.65-69
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• 1975

Human chorionic gonadotropin hormone(H.C.G.) is secreted from the villus tissues of the placenta and excreted in lange amount into the urine. Its isolation is chiefly made from the urine of a pregnant woman. Recently, Matsushima attempted isolation of H.C.G. directly from the placenta itself. In order to prepare H.C.G. from human placenta, general method of extractiag and purifying proteins was applied. Its way was as follow: Crude H.C.G. was extracted from placenta with pH 9.0 and pH 5.0 aqua ammonia, and purified with pH 8.0 ammonia and 50% ethanol at pH 4.8. The purified H.C.G. showed two moving bands on the anode by paper electrophoresis. On the other hand, the H.C.G. from pregnancy urine (Standard. Pharm. Co.) showed same two bands but their moving ratio were different. The purified H.C.G. showed gonadotropin effect when it was injected young fomale rats 40r/cc per day for 5 days and weighted the increased ovary weight.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제14권1호
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• pp.13-19
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• 2010

We developed a novel dicistronic system for the expression of target cDNA sequences in the milk of transgenic animals using goat beta-casein/hGH fusion construct, pGbc5.5hGH (Lee, 2006) and internal ribosome entry site (IRES) sequences of encephalomyocarditis virus (EMCV). Granulocyte colony-stimulating factor (hG-CSF) cDNA was linked to 3' untranslated region of hGH gene in the pGbc5.5hGH via EMCV IRES sequences. Transgenic mice were generated by microinjection and transgene expression was examined in the milk and mammary gland of transgenic mice at 10 days of lactation. Northern blot analysis showed that hGH gene and hG-CSF cDNA were transcribed as a single dicistronic mRNA. The hG-CSF and hGH proteins were independently translated from the dicistronic mRNA and secreted into the milk of transgenic mice. The highest concentration of hG-CSF and hGH in the milk of transgenic mice were $237{\mu}g/m{\ell}$ and $8,990{\mu}g/m{\ell}$, respectively. In contrast, another hG-CSF expression cassette, in which hG-CSF genomic sequences were inserted into a commercial milk-specific expression vector (pBC1), generated a lower level ($91{\mu}g/m{\ell}$) of hG-CSF expression in the milk of transgenic mice. These results demonstrated that the novel pGbc5.5hGH-based dicistronic construct could be useful for an efficient cDNA expression in the milk of transgenic animals.

• Journal of Plant Biology
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• 제24권4호
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• pp.171-179
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• 1981

옥수수 뿌리로부터 분리한 13,000g pellet과 13,000~80,000g pellet 내에 있는 membrane-bound ATPases의 특성을 구명하였다. 13,000g pellet과 13,000~80,000g pellet의 membrane-bound ATPases의 최적 pH는 5와 9였다. Discontinuous sucrose gradient centrifugation에 의한 13,000g pellet의 분획중 Fraction C는 pH 5에서, Fraction D, E 및 F는 pH 5에서보다 pH 9에서 더높은 활성을 나타냈다. 13,000~80,000g pellet의 분획에서 보면, Fraction A, C는 pH 9보다 pH 5에서, Fraction B, D, E 및 F는 pH 5보다 pH 9에서 더 높은 활성을 가겠다. pH 5와 pH 9에서 membrane-bound ATPases의 기질포화 농도는 3~5 mM이며 ATP에 대한 Km 값은 모두 0.25 mM이였다. Vmax 값은 8.0~55.6 $\mu$M Pi/mg membrane protein/hr의 범위에 있었다. Membrane-bound ATPase의 활성은 $K^+$ 이온에 의해 증가되었다.

• 생명과학회지
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• 제18권4호
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• pp.494-502
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• 2008

본 연구에서는 H. pylori의 감염을 예방하고 치료보조제로 사용할 목적으로 포유동물을 통한 피동면역용 항체를 생산하고자 하였다. 따라서 anti-H. pylori 항체를 함유한 면역우유 생산용 백신개발에 기초자료를 얻고자 H. pylori의 면역성과 면역독성에 관한 실험을 수행하였다. 백신을 반복해서 투여했을 때 야기될 수 있는 알레르기 및 과민반응을 예측하고, 페니실린 쇼크와 같은 심각한 부작용 및 독성유발 가능성을 검색하기 위하여 백신의 면역독성을 평가하였다. 전신성 anaphylaxis 쇼크반응의 유무를 평가하기 위해 각 군당 5마리의 guinea pig에 감작투여한 후 최종감작 1주와 2주째에 귀정맥(ear vein)으로 야기항원을 투여하였다. anaphylaxis 쇼크 반응 시험에서 5마리 중 1마리가 양성반응을 나타낸 경우 의약품의 안전성 평가라는 관점에서는 양성으로 판정한다[11]. H. pylori의 WC항원에 대한 1차 및 2차 야기항원 투여 후 전신성 anaphylaxis 쇼크반응에 대한 관찰 결과는 다음과 같다. H. pylori의 WC에 대한 anaphylaxis 쇼크반응은 WC (H) $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 항원농도에서 1차, 2차 야기항원 투여 모두 경증의 증상을 나타내었고, WC (L) $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 항원농도에서는 아무런 anaphylaxis 쇼크 증상이 관찰되지 않았다. 그리고 crude urease에 대한 anaphylaxis 쇼크반응은 항원농도가 $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 urease (L)와 $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 urease (H) 모두에서 아무런 증상도 관찰되지 않았다. Guinea pig-rat를 이용한 PCA 시험에서는 WC (H), WC (L), urease (H), urease (L) 투여군 모두에서 양성반응이 나타나지 않았다. 피부감작성 시험에서는 항원농도에 따라 각각 $80\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ 일 때 피부이상 증상 즉, 피부 트러블이 발생하지 않는 최고의 항원농도는 $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$인 것으로 관찰되었다. 결론적으로 항원성 시험에서 H. pylori로부터 분리된 urease 항원이 WC 항원보다 면역독성 측면에서 좀 더 안전할 것으로 조사되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제8권3호
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• pp.199-206
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• 1980

전보에서 분리한 균을 사용하여 당밀과 가용성 전분을 발효기질로써 구연산생산에 관한 몇 가지 실험을 한 결과는 다음과 같다. 1) 가용성전분을 기질로 하여 분리균 M-80을 표면배양할 경우 soluble starch 120g, (N $H_4$)$_2$S $O_4$3g, K $H_2$P $O_4$2g, MgS $O_4$.7$H_2O$ 0.2g, F $e^{++}$ 1.5mg, $Zn^{++}$ 1mg, methanol 20m1, D. W. 1ι, initial pH 5.0 으로 하여 8일간 배양하였을 때 61.8mg/ml의 구연산이 생성되었다. 2) 분리균 M-315를 황혈염으로 전처리한 당밀을 기질로 하여 발효조건을 구한 결과, 표면배양은 당밀 250g, N $H_4$N $O_3$0.3g, K $H_2$P $O_4$0.05g, MgS $O_4$.7$H_2O$ 0.01g, methanol 30m1, D. W. 1ι, initial PH 5.0이었고, 액내배양의 경우는 당밀 250g, N $H_4$N $O_3$0.3g, K $H_2$P $O_4$0.1g, MgS $O_4$.7$H_2O$ 0.01g, methanol 30m1, D. W. 1ι, initial pH5.0이었으며 9일 배양으로 각각 69.4mg/ml, 39.6mg/ml의 구연산이 생성되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제10권3호
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• pp.321-326
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• 2000

To examine the feasibility of the long-term production of the human granulocyte colony stimulating factor (hG-CSF) using the $_{L}-arabinose$ promoter system of Escherichia coli, flask relay culture and cyclic fed-batch culture were performed. In the flask relay culture, it was found that the pismid was maintained stably up to about 170 generations in an uninduced condition, whereby the cells could also maintain the capability of expressing hG-CSF expression were maintained stably up to at least 100 generations. In contrast, in the cyclid fed-batch culture, segregational plasmid instability was observed within about 4 generations after induction, even though the cell growth and hG-CSF production reached their maximum balues, 78.0 g/l of dry cell weight and 7.0 g/l of hG-CSF, respectively. It would appear that, when compared to the flask relay culture, the high-cell density and high-level expression of hG-CSF in the cyclic fed-batch cultrure led to the segregational plasmid instability; in other words, a severe metabolic burden existe on the cells due to the high-level expression of hG-CSF. Accordingly, based on these long-term cultures, the segregational and structural plasmid instability was observed and a strategy to overcome such problems could be designed.