The ascomycete fungus Fusarium fujikuroi causes bakanae disease in rice and this disease has been reemerging in Korea. Other fungal species including F. graminearum and Magnaporthe oryzae are often associated with F. fujikuroi, hampering pure isolation of F. fujikuroi from rice. In this study, we modified a selective medium for F. fujikuroi as supplementing both pentachloronitrobenzene and hydrogen peroxide into minimal medium. This medium efficiently suppressed the vegetative growth of F. graminearum and M. oryzae, but did not significantly reduce F. fujikuroi growth, providing an efficient tool for isolating F. fujikuroi.
2009년 전남 해남 지역의 논에서 벼 키다리병과 유사한 병징을 나타내는 피를 채집하여 병원균을 분리하였다. 이병 식물체는 줄기가 고사하여 하얗게 말라 죽고, 줄기 표면에 흰가루 모양의 포자가 형성되었다. 분리균은 균학적 특성과 분자생물학적 특성에 따라 Fusarium fujikuroi로 동정되었다. Translation elongation factor 1-alpha 유전자의 염기서열 분석 결과, GenBank에 등록된 F. fujikuroi와 상동성을 나타내었다. 벼와 피를 대상으로 침지접종에 의해 병원성을 확인하였으며, 이는 피가 벼 키다리병의 전염원으로서의 역할을 할 수 있음을 의미한다. 따라서 벼 키다리병의 방제와 건전종자의 채종을 위해서는 논에 발생한 이병식물체뿐 아니라 전염원으로 작용할 수 있는 피를 제거해야 할 것으로 생각된다.
2014년부터 2016년까지 국내 콩 재배 포장에서 시들음 증상을 보이는 시료에서 진균을 분리한 결과, Fusarium spp., Colletotrichum spp., Rhizoctonia spp., Macrophomina sp., Phytophthora spp., Calonectria ilicicola가 분리되었고, Fusarium균이 79.1%로 가장 많이 분리되었다. 53개의 Fusarium균을 균학적 특성에 의해 동정한 결과, F. solani, F. oxysporum, F. graminearum, F. fujikuroi 등 4개의 종 복합체(species complex)로 동정되었다. 염기서열분석을 통한 종 동정을 위해 translation elongation factor 1 alpha (TEF) 유전자 부위를 계통분석한 결과, F. solani, F. oxysporum, F. commune, F. asiaticum, F. fujikuroi 등 5종으로 확인되었다. 44개 Fusarium균주의 병원성을 확인하기 위하여 콩 3개 품종을 대상으로 유묘 침지 접종한 결과, F. asiaticum은 병원성이 없거나 미미한 것으로 나타났다. 병원성이 있는 10개 균주를 선발하여 기주범위를 조사한 결과, F. solani, F. oxysporum, F. commune은 콩에만 병원성이 있었고, F. fujikuroi는 콩, 강낭콩, 황동부콩, 흑동부콩 및 팥에 병원성을 보였다. 또한 13개 콩 품종을 대상으로 저항성 검정을 수행한 결과, F. commune과 F. fujikuroi는 모든 품종에 병을 일으켰다. 장기콩, 풍산나물콩, 소청자콩은 Fusarium에 의한 시들음병에 비교적 저항성이 것으로 나타났고, 황금올콩, 참올콩은 감수성 품종으로 확인되었다.
We identified two genes related to fungicide resistance in Fusarium fujikuroi through random mutagenesis. Targeted gene deletions showed that survival factor 1 deletion resulted in higher sensitivity to fungicides, while deletion of the gene encoding F-box/WD-repeat protein increased resistance, suggesting that the genes affect fungicide resistance in different ways.
Gibberellea fujikuroi (Gf) 종복합체는 최소 15개의 종으로 구성되어 있으며, 대부분 식물에 병을 일으킬 뿐 아니라 푸모니신과 같은 곰팡이독소를 생성한다. 본 연구에서는 우리나라 벼와 옥수수로부터 분리한 Gf 종복합체 소속 야생형 균주의 푸모니신 생성능을 검정하였다. 이들 분석대상 균주는 모두 푸모니신 생합성에 필수적인 polyketide synthase 유전자 FUM1을 가지고 있는 것으로 확인되었다. 총 88주의 Gf 종복합체 소속 균주(55 F. fujikuroi, 10 F. verticillioides, 20 F. proliferatum, 2 F. subglutinans, 1 F. concentricum)와 Gf 종복합체의 근연종인 4주의 F. commune를 쌀 배지에 배양한 후 각 균주의 푸모니신 생성 농도를 HPLC 방법으로 측정하였다. 대부분의 F. verticillioides과 F. proliferatum 균주는 기주 식물에 관계없이 푸모니신 $B_1$($0.5-2,686.4{\mu}g/g$)과 $B_2$($0.7-1,497.6{\mu}g/g$)를 다양한 범위 내에서 생성하였다. 반면 모든 F. fujikuroi을 비롯한 다른 Fusarium spp.의 균주로부터는 푸모니신이 검출되지 않았거나 $10{\mu}g/g$ 이하 수준의 미량만 검출되었다. 흥미롭게도 F. proliferatum과 F. fujikuroi의 경우, 옥수수 유래 균주 집단에서 벼 유래 균주 집단에 비해 상대적으로 고농도 푸모니신 생성 균주의 비율이 높았다. 한편, FUM1 유전자를 함유하고 있는 F. commune의 푸모니신 생성능은 본 연구를 통해 처음 보고된다.
Gene disruption by homologous recombination is widely used to investigate and analyze the function of genes in Fusarium fujikuroi, a fungus that causes bakanae disease and root rot symptoms in rice. To generate gene deletion constructs, the use of conventional cloning methods, which rely on restriction enzymes and ligases, has had limited success due to a lack of unique restriction enzyme sites. Although strategies that avoid the use of restriction enzymes have been employed to overcome this issue, these methods require complicated PCR steps or are frequently inefficient. Here, we introduce a cloning system that utilizes multi-fragment assembly by In-Fusion to generate a gene disruption construct. This method utilizes DNA fragment fusion and requires only one PCR step and one reaction for construction. Using this strategy, a gene disruption construct for Fusarium cyclin C1 (FCC1), which is associated with fumonisin B1 bio-synthesis, was successfully created and used for fungal transformation. In vivo and in vitro experiments using confirmed fcc1 mutants suggest that fumonisin production is closely related to disease symptoms exhibited by F. fujikuroi strain B14. Taken together, this multi-fragment assembly method represents a simpler and a more convenient process for targeted gene disruption in fungi.
This study was conducted to isolate and identify the fungal pathogen causing seedling rot of Lithospermum erythrorhizon Siebold & Zuccarini, and to know the optimum growing temperature for decreasing seedling rot of Lithospermum erythrorhizon. On the basis of morphological characteristics, EF-1a sequence analysis, and pathogenecity to host plant, the fungi isolated from seedling rot and seeds of Lithospermum erythrorhizon were identified as Fusarium fujikuroi, indicating that disease causing fungus is seed-borne pathogen. Optimum temperature for germination of seeds of Lithospermum erythrorhizon was $15{\sim}20^{\circ}C$, but pathogenicity of Fusarium fujikuroi was shown more readily at $25{\sim}30^{\circ}C$. These results suggested that seedling culture of Lithospermum erythrorhizon between $15^{\circ}C$ and $20^{\circ}C$ might reduce seedling rot of Lithospermum erythrorhizon caused by seed-borne pathogen Fusarium fujikuroi.
Min Sun Ha;Hyunjoo Ryu;Sung Kee Hong;Ho Jong Ju;Hyo-Won Choi
한국균학회지
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제50권4호
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pp.319-329
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2022
In July 2020, wilting symptoms were observed among adzuki bean plants (Vigna angularis var. angularis L.) in the fields in Yeosu, Korea. Infected plants showed yellowing of leaves, browning inside the stems, splitting of stem bark, and wilting. When these plants were uprooted, their roots were found to be brown. The fungal pathogens NC20-737, NC20-738, and NC20-739 were isolated from symptomatic stem and root tissues. These pathogens were identified as a Fusarium fujikuroi species complex based on their morphological characteristics. Molecular identification was performed using the DNA sequence of translation elongation factor 1 alpha and the RNA polymerase II second largest subunit regions. The nucleotide sequences of all three isolates were similar to the F. fujikuroi reference isolates NRRL 13566 and NRRL 5538 of the National Centre for Biotechnology Information GenBank. A pathogenicity test was conducted by the soil inoculation method with cornmeal sand inoculum. Approximately 3 weeks after inoculation, symptoms were observed only in the inoculated adzuki bean seedlings. To the best of our knowledge, this is the first report of Fusarium root rot caused by F. fujikuroi in adzuki beans, both in Korea and worldwide.
Fusarium incarnatum-equiseti species complex (FIESC) contain over 40 members. The primer pair Smibo1FM/Semi1RM on the RPB2 partial gene has been reported to be able to identify Fusarium semitectum. The F. fujikuroi species complex (FFSC) contains more than 50 members. The F. verticillioides as a member of this complex can be identified by using VER1/VER2 primer pair on the CaM partial gene. In this research, the Smibo1FM/Semi1RM can amplify F. sulawesiense, F. hainanense, F. bubalinum, and F. tanahbumbuense, members of FIESC at 424 bp. The VER1/VER2 can amplify F. verticillioides, F. andiyazi, and F. pseudocircinatum, members of FFSC at 578 bp. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism by using the combination of three restriction enzymes EcoRV, MspI, and HpyAV can differentiate each species of FIESC used. The two restriction enzymes HpaII and NspI can distinguish each species of FFSC used. The proper identification process is required for pathogen control in the field in order to reduce crop yield loss.
Twenty-five isolates of Fusarium fujikuroi acquired from rice seeds and rice plants evidencing symptoms of Bakanae disease were evaluated to determine their mating types and characterize the formation of their sexual state. The mating types of the isolates were evaluated via multiplex PCR with the diagnostic primers of the mating-type (MAT) region: GFmat1a, GFmat1b, GFmat2c, and GFmat2d. Among the 25 isolates, 11 were identified as MAT-1 (male), and 14 as MAT-2 (female). Four MAT-1 isolates and three MAT-2 isolates were mated and cultured to evaluate the optimal culture conditions for the production of their sexual states. Among four tested media, 10% V8 juice agar proved optimal for the perithecial production of the isolates. The isolates also generated the largest numbers of perithecia when incubated at 23oC in alternating cycles of 12 hr fluorescent light and NUV fluorescent light and 12 hr darkness.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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