Amyloglucosidase를 이용하여 설탕으로부터 fructooligosaccharides의 생산조건을 최적화하였다. Amyloglucosidase의 두 가지 활성 중 가수분해 활성에 대한 최적반응 pH 및 온도는 각각 4.0, $75^{\circ}C$ 이었고, 올리고당 합성에 대한 활성은 pH 5.5, 온도 $55^{\circ}C$에서 최고치를 나타내었다. 저농도 설탕에서는 가수분해 활성이 대단히 강하여 fructooligosaccharides의 합성능이 매우 낮았고, 550g/l 이상의 설탕을 기질로 이용하였을 때 최적반응조건에서 최대 41%의 fructooligosaccharides를 생산할 수 있었다. 또한 Amyloglucosidase는 설탕뿐만 아니라 fructooligosaccharides도 기질로 이용할 수 있었다.
We investigated the effects of fructooligosaccharides and chicory inulin on the profiles of cecal and fecal short-chain fatty acids (SCFAs) and fecal bile acids in rats. Thirty-six Sprague Dawley male rats weighing about 190 g were randomly divided among four treatments; control diet, control diet +6%(w/w) fructooligosaccharide (POS), control diet +6% chicory inulin oligosaccharide(CIOS), and control diet +6% chicory inulin(CI). The rats were pair-fed and experimental diets were maintained for 5 weeks. Cecal and fecal pH was significantly decreased in rats that were fed fructooligosaccharides and chicory inulin. Cecal propionate was significantly elevated in rats fed CIOS diets, and butyrate was lower in rats fed FOS and CI than control values. Cecal lactate was significantly higher in the FOS group than in the control group. The fecal excretions of acetate and total SCFA were 200-300% higher in rats that were fed fructooligosaccharides and chicory inulin than in the control group. Lactate excretion was highest in rats that were fed FOS, followed by those fed CIOS and CI. The cholic acid and total bile acid concentrations in feces were significantly lower in the rats that were fed fructooligosaccharides and chicory inulin. The deoxycholic acid concentrations in wet feces were significantly lower in the groups of rats that ate CIOS (0.186 mM), FOS (0.274 mM), and CI (0.362 mM) than in the control group (0.595 mM). Among the fructans, short-chain fructooligosaccharide was more effective at decreasing colonic pH and lactate production, but medium-chain chicory inulin oligosaccharide was more effective at increasing fecal butyrate and lowering the fecal secondary bile acid concentration.
A continuous production of fructooligosaccharides from sucrose was investigated by fructosyltransferase immobilized on a high porous resin, Diaion HPA25. The optimum pH(5.5) and temperature(55$^{\circ}C$) of the enzyme for activity was unaltered by immobilization, and the immobilized enzyme became less sensitive to the pH change. The optimal operation conditions of the immobilized enzyme column for maximizing the productivity were as follows: 600g/L of sucrose feed concentration, flow rate of superficial space velocity 2.7h-1. When the enzyme column was run at 50$^{\circ}C$, about 8% loss of the initial activity of immobilized enzyme was observed after 30 days of continuous operation, during which high productivity of 1174g/L$.$h was achieved. The kinds of products obtained using the immobilized enzyme were almost the same as those using soluble enzymes or free cells.
고정화 과당전이효소와 고정화 포도당 이성화 효소를 동시에 이용한 혼합효소계를 사용하여 새로운 조성의 프락토올리고당을 연속생산하였다. 혼합효소 반응에서 각 효소의 반응최적 온도 빛 pH 영역은 서로 상이하여, 고정화 과당전이효소의 경우 $65^{\circ}C$, pH 5.5에서 최고활성을 나타낸데 비해, 고정화 포도당 이성화 효소의 경우 실험범위내(온도 $80^{\circ}C$, pH 8 8)에서 온도와 pH가 높을수록 유리하였다. 고정화 효소의 열안정성은 과당전이효소 및 포도당 이성화 효소 모두 $50^{\circ}C$이후의 온도에서 불안정하였다. 고 정화 혼합효소의 비율이 프락토올리고당의 전환율에 미치는 영향을 검토한 결과, 과당전이효소와 포도당 이성화 효소의 비가 5:3 정도가 적당하였다. 최척 반응조건에서 생산된 프락토올리고당의 전환율은 66 %였고, 포도당으로부터 이성화되어 생성된 과당이 전체 반응물의 감미도를 6% 증가시켰다. 최적 반응 조건에서 고정화 혼합효소 반응기를 연속운전한 결 과. 40일 통안 초기 효소활성을 그대로 유지하였다.
In order to reuse enzyme efficiently, a mthod for ionic binding of fructosyltransferase to a porous carrier bearing quaternary alkyl alkanolammonium groups was investigated. The fructosyltransferase activity of the immobilized enzyme increased with increasing amount of loaded enzyme, and maximally reached 770U/g of the carrier when loaded amount of the enzyme was 18.2 mg/g carrier. The immobilized fructosyltransferase had optimum pH and temperature of 7.5 and 45$^{\circ}C$, respectively, whereas soluble enzyme had 6.5 and 55$^{\circ}C$: the Km value for the immobilized enzyme was 27.8 mM for sucrose, which was the same as that of soluble enzyme. In a batch reactor, the enzyme produced a mixture of fructooligosaccharides, mainly F$_2$G, from sucrose with the slight loss of enzyme activity during continuous operation of 12 days at 42$^{\circ}C$.
SMB 크로마토그래피 기술을 포도당, 수크로즈, 프럭토 올리고당(케스토즈, 니스토즈)의 혼합물 중 프럭토 올리고당을 고순도로 얻기 위해 사용하였다. SMB 운전 조건은 일반적으로 실험 중 칼럼 내에서 발생하는 반응을 고려하지 않는 삼각형 이론(triangle theory)이나 정지파(standing wave) 디자인을 따른다. 그러나 칼럼 내에서 반응은 실험 결과에 크게 영향을 미칠 수 있다. 프럭토 올리고당은 운전 중 가수분해되어 포도당과 과당으로 분해된다. 반응을 바로잡기 위해 가수분해 후 정상상태에서 각 성분의 농도를 역 추정하였고 이를 모사에 적용하였다. 수크로즈를 제외한 포도당과 케스토즈, 니스토즈의 농도 곡선은 거의 일치했으나 수크로즈는 중간물질이며 가수분해 속도가 프럭토 올리고당에 비해 느리기 때문에 농축되어 모사 결과와 일치하지 않았다. 프럭토 올리고당은 산성이고 높은 온도 조건에서 더 쉽게 가수분해가 일어난다. 분리수지에 전 처리를 하여 pH를 조정해 더 낮은 온도에서 실험을 수행하면 가수분해 정도를 감소시킬 수 있다.
돼지의 분변미생물들 중 inulin 이용균주를 탐색한 결과 전체 생균수의 약 7.7%가 inulin 한천배지에서 집락주위에 inulase를 분비하여 투명환을 형성하면서 inulin을 이용하는 것으로 나타났고 이 중 inulin의 이용성이 가장 큰 균주를 선발한 다음 그 형태학적 및 생화학적 특성을 조사하여 이 균주를 Bacteroides속으로 동정하였다. 이 분리균은 탄소원으로 inulin, fructo올리고당, 포도당을 이용하여 잘 생육하였으며 solublestarch와 sucrose를 첨가한 경우의균체량은 포도당 사용시의 약 50% 정도로 감소하였다. Inulase 활성은 포도당, sucrose, soluble starch를 사용한 배지에서는 거의 나타나지 않은 반면에 inulin을 탄소원으로 사용하였을 때 0.42U/ml로 가장 높게 나타났고 fructo올리고당을 사용한 배지에서도 0.25U/ml로 나타나 이 균주가 생산하는 inulase는 inulin과 fructo올리고당에 의해 유도되는 것으로 생각된다. 또 inulin의 농도에 따른 균의 생장은 inulin의 농도가 증가함에 따라 급격히 증가하여 2%일 때 최고치에 달하였고 inulase의 활성은 inulin의 농도가 1%일 때 0.54/ml로 가장 높게 나타났다. 분리균이 생산하는 inulase는 $pH7.0{\sim}7.5$와 $50{\sim}50^{\circ}C$에서 가장 높은 효소활성을 나타냈으며 inulin에 대한 작용형태로 보아 exoinulase로 확인되었다.
본 연구에서는 야콘 덩이뿌리 추출물이 프로바이오틱스인 비피더스균과 락토바실러스균의 생장에 미치는 영향을 구명하고자 하였다. 야콘의 당함량을 HPLC로 분석한 결과, 생체 중 100 g 당프락토올리고당 함량이 7.60 g으로 가장 많았으며, 유리당은 수크로스가 0.72 g, 프럭토스 0.34 g, 글루코스 0.26 g 순의 함량을 보였다. 야콘 추출물이 장내 유산균 활성에 미치는 영향을 구명하기 위해 락토바실러스 3종(L. acidophilus AD031, L. plantarum BH02 and L. fermentum BH03)과 비피더스 3종(B. bifidum BGN4, B. longum BORI, B. lactis AD011) 등 6종을 대상으로 대조군과 야콘처리군 배지에서 유산균의 생장속도를 비교하였다. 락토바실러스 3종의 균주들은 대조군과 야콘처리군에서 대수기에 도달하는 시간이 비슷하였고, 생균수에서도 비슷하거나 감소하는 경향을 보였다. 하지만, 비피더스 3종의 경우 야콘처리군에서 모두 생장이 증가되었고, 특히, B. longum BORI 균주는 배양 10시간 이후부터 대조군과의 확연한 차이를 나타냈다. 이와 같은 결과로, 야콘 추출물은 장내 유익균 중에서도 비피더스균에 특이적인 증식 효과를 보이며, 야콘의 프락토올리고당이 비피더스균 증식에 적합한 영양원임을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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