• 한국수정란이식학회지
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• 제9권3호
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• pp.249-254
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• 1994

This study was undertaken to investigate effects of granulosa cells on mejotic maturation of porcine oocytes in vitro. The results obtained in this study were summarized as follows : The germinal vesicle breakdown(GVBD) rates were 91.5, 93.3 and 96.6%, respectively, when the cumulus oocy:e cornplexes(COC) in the TCM-199 medium with sodium bicarbonate, Na pyruvate, penicillin G, streptomycin sulfate and 10% FCS were cultured in the condition of FSH(0.02 Au/ml), LH(10 $\mu$g/ml) and FSH + LH added. And when the COC were co-cultured with granulosa cell (5$\times$ 106 cells /ml) in the condition of FSH, LH and FSH + LH added, GVBD rates were 94.3, 92.9 and 98.9%, respectively. However, when the COC were cultured in the condition of hormone free and co-cultured with granulosa cells in the condition of hormone free, the GVBD rates were 40.4 and 86.3%, respectively. The GVBD rates were 41.0, 62.7, 84.6, 88.1 and 93.6%, respectively, when the COC were co-cultured with granulosa cells that the concentrations are 0 cells /ml, 1 $\times$ 106 cells /ml, 5:: 106 cells /ml, 1$\times$ 107 cells /ml and 5$\times$ 107 cells /ml.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제10권2호
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• pp.137-141
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• 2005

Though many insecticides are commercially available, development of resistance, pest resurgence and effects on non-target organisms led to the search for alternate insect pest management (IPM) strategy based on larval growth and reproductive fitness. Reproductive potential of insects depends on its acquiring of vitellogenic competence which is under hormonal control. Exogenous application of analogues of JR (JHAs) and ecdysterone could derail normal development and reproduction in insects by manipulating an array of physiological processes. In the rice pest, brown planthopper, Nilaparvata lugens, JHA, hydroprene induced metathetely from the fifth (final) instar nymphs in an age-dependent manner. Day 0 of the final instar showed highest sensitivity to induce this abnormal development. Adults emerged from treated day 3 nymphs looked normal. Both the morphotypes were reproductively incompetent and showed partial to complete sterility. Pre-adult exposure of the ovarian tissue to hydroprene suppressed mitotic division of germinal cells and induced abnormalities in the later s1ages of growth and differentiation of ovary in N. lugens. More over the nymphal exposure to hydroprene inhibited patency changes of follicular epithelium and affected competence of the follicles for yolk sequestration. In the absence of ovarian growth and oocyte differentiation, germarium found disintegrated, trophic core regressed and terminal oocytes resorbed. Hydroprene exposure to newly ecdysed brachypterous females did not affect ovarian development and egg production. Proper larval-adult transition appeared as a. prerequisite for vitellogenic competence in N. lugens for which the ovarian tissues must be exposed to ecdysterone in the internal milieu devoid of JH.

• 한국동물학회지
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• 제18권2호
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• pp.61-70
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• 1975

여포액이 여포안에서는 난자의 성숙을 억제하지만 여포액을 일단 여포 밖으로 내어 배양액을 섞거나 혹은 여포액만으로 난자를 배양할 때 난자는 성숙분열을 일으키는 것을 보아 왔다. 저자들은 소의 여포액 내의 성분중 어떤 것 들이 난자 성숙에 유효한 가를 밝히기 위하여 본 실험을 행하였다. 그 결과는 다음과 같다. 첫째, 여포액을 투석하여 얻은 dialysable fraction을 이용하여 난자를 배양하였을 때 높은 성숙율을 얻었다. 반대로 non-dialysable fraction를 포함하는 기본배양액 내에서는 난자의 성숙율은 극히 낮았으며 퇴화하는 경향이 있었다. 둘째, paper chromatography 의 방법으로 dialysable fraction이 포함하는 free amino acid를 조사한 결과 8가지의 amino acid가 동정되었다. 이 amino acid를 기본배양액에 섞어 배양액으로 만들어 난자를 배양했을 때 난자성숙율이 90%이상이었고 제 2차 중기까지 도달한 난자는 30시간 이내에 10% 정도였다. 셋째, 상기의 amino acid가 들어있는 배양액에 다시 biotin를 첨가하여 배양하면 48시간내에 제 2차 분열 중기까지 도달하는 난자가 60%에 이르렀다. 위 결과로 보아 여포액은 in vitro인 경우 난자의 성숙을 유발하며 성숙을 유발하는 주요 성분은 여포액내에 포함되어 있는 몇가지 amino acid와 biotin과 같은 vitamine B가 될 것이라는 결론을 얻었다.

• Journal of Veterinary Science
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• 제19권6호
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• pp.725-734
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• 2018

Ovaries of 21 bitches presented with gynecopathies were surgically removed and histologically examined. Standard histological, as well as immunohistochemical, classification of 193 cystic structures resulted in the classification of 72 cysts of subsurface epithelial structures (SES), 61 follicular cysts (FCs), 38 cystic rete ovarii (CRO), 13 lutein cysts (LCs), and 9 non-classifiable cysts (NCCs). In addition to the histological classification, results were interpreted according to subject medical history, clinical examination outcome, and macroscopic observations during ovariohysterectomy. Dogs with ovarian cysts (OCs) and associated reproductive perturbations were mostly nulliparous, of large breed, and had an average of $9.5{\pm}3$ years. Prolonged or shortened inter-estrus intervals of past heats, however, seemed to be relatively low-risk factors for the development of OCs in dogs. Furthermore, we provide histological observations of a rarely seen canine LC including a degenerated oocyte in the central cavity.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제5권2호
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• pp.115-122
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• 2001

난자와 난포세포는 gap junction channel을 통해 긴밀한 연락을 주고받음으로써 난자의 발달이나 난포의 성장에 영향을 미친다. 본 연구는 같은 크기의 난포에서 나온 난자라고 하여도 cumulus cell(난구세포)들이 붙어있는 상태가 다르다는 것을 관찰, 이렇게 난구세포와의 서로 다른 연결상태를 갖는 난자의 재질에 차이가 있을 것으로 가정하고, 난자의 competence와 이때 난자와 난구세포 사이의 cell-to-cell communication에 관여하는 gap junction protein인 connexin(CX) 37과 CX 43의 발현 정도가 어떤 상관관계가 있는지를 알아보고자 수행하였다. 생후 3주일 된 생쥐에 PMSG를 주입하고 48시간 후에 난소를 적출하여 난포를 450 $\mu\textrm{m}$ 이상(large)의 난포와 200～400 $\mu\textrm{m}$(small) 난포로 분리하여 그 난자를 얻었다. 난자에 난구세포가 compact하게 붙어있는 것은 intact로(L1, Sl), 난구세포가 어느 정도 붙어 있거나, 하나도 붙어있지 않은 것은 partial/denuded로 그룹을 나누었다(LPD. SPD). 각 그룹의 난자를 체외에서 성숙시키고, 수정시켜서 발달율을 비교하였다. 각각의 CX의 mRNA 발현을 RT-PCR과 in situ hybridization으로 비교하였다. intact와 denuded 난자의 비율은 큰 난포의 경우는 55%와45%의 비율로, 작은 난포의 경우는 30%와 70%의 비율로 난포가 작을수록 denude상태의 난자가 많이 나왔다. 어떤 경우의 난자는 체외 성숙율은 차이가 없이 모두 97%이상 성숙하였다. 그러나, 수정률에서는 차이를 보여서 intact한 난자에서 높은 수정율을 보였으며, SPD의 경우, 가장 낮은 수정ㆍ발달율을 보였다. 난자의 경우, 주로 발현되는 것은 CX 37이었으며, CX 43은 발현되지 않았다. 난구세포의 경우, CX 43이 가장 높게 발현하였고, 그 다음으로 CX 37이 관찰되었다. 본 실험 결과, 같은 발달크기의 난포라고 하더라도 그 안에 존재하는 난자의 상태는 난구세포와 얼마나 밀접한 cell-to-cell communication을 이루고 있느냐에 따라 영향을 받는다는 것을 확인하였다. 본 연구결과 다음과 같이 결론 내릴 수 있었다. 1)아직 발달이 끝나지 않은 난포에서 나온 미성숙난자라고 하여도 난구세포와 밀접한 연결을 갖는 경우 성숙난자와 거의 같은 능력을 갖고 있으며, 2) 난자와 난구세포간의 gap junctional communication은 heterotypic channel로 이루어지고, 3) 본 연구에서 관찰한 CX 43과 CX 37 두 종류만으로는 intact와 denuded의 차이점을 설명할 수 없었다.

• Journal of Radiation Protection and Research
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• 제32권4호
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• pp.140-156
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• 2007

본 연구는 방사선 조사선량에 따른 난소조직의 형태학적 변화과정을 규명하고자 하였다. X-선을 생쥐에 전신조사한 후, BrdU, TUNEL, p53, p21, PCNA, $inhibin-{\alpha}$ 등을 면역조직화학반응을 통하여 확인하였으며, 난포의 미세구조적 변화를 고배율의 전자현미경을 이용하여 관찰하였다. X-선을 조사한 난소조직은 방사선량이 증가함에 따라 성장 난포의 형태적 변화가 뚜렷하였으며, 특히 과립층세포의 변성에 의한 핵은 응축과 투명대의 변화가 현저하였다. 또한 Masson's trichrome 염색과 세망섬유 염색을 통한 조직화학반응의 결과 과립층세포의 변화와 난포기저막의 변형, 그리고 세망섬유의 비정상적 배열이 확인되었다. BrdU 반응결과, 방사선 조사량이 증가함에 따라 양성반응을 보이던 정상난포의 과립층세포가 급격히 감소하였으며, 세포예정사(apoptosis)를 확인하기 위한 TUNEL 반응에서는 정상난소의 퇴화난포에서만 양정반응을 보이던 과립층세포들이, 방사선량의 증가에 따라 성장난포 및 원시난포 등으로 확대되었으며, X-선 600 cGy 조사량에서는 난모세포의 세포예정사도 확인되었다. 세포주기 조절단백질인 p53 단백질의 난소 내 발현을 면역조직화학반응으로 관찰한 결과, 방사선량의 증가에 따라 p53의 발현도 증가하였으며, X-선 600 cGy 조사된 실험군에서는 난포막세포를 포함한 난포의 거의 모든 세포에서 광범위한 발현이 확인되었다. 또한 유사분열 억제단백질인 p21 단백질의 발현은 난포의 과립층세포에서 현저하였으며, 조사량이 증가함에 따라 난포강 주위에서 강한 양성반응이 관찰되었다. 생식세포의 증식을 확인하기 위한 PCNA 반응에서는 정상 대조군의 성장난포와 성숙난포 및 원시난포 등에서 모두 강한 양성반응을 보였으나, 방사선량이 증가함에 따라 반응도가 현저히 감소되었다. 특히 난모세포 주위의 과립층세포가 난포막에 인접한 세포에 비해 반응도의 차이가 심한 점으로 미루어, 난모세포와 난포동에 인접한 세포들이 방사선 조사에 의해 가장 먼저 손상을 받는 것이 확인되었다. 난포의 $inhibin-{\alpha}$ 단백질의 발현은 난포의 성장시기에 따라 차이를 보여, 난포동이 형성된 성숙난포에서 강한 양성반응을 보였다. 난포막 주변의 과립층세포에서 강한 양성반응이 관찰되었으나, 난포막을 구성하는 난막세포에서는 전혀 발현되지 않았다. 방사선 조사에 의해 $inhibin-{\alpha}$의 발현은 정상 대조군에 비해 현저히 감소하였으나, X-선 600 cGy의 선량에서는 약간 증가하는 양상을 보였는데, 이는 과립층세포의 세포사에 따른 현상인 것으로 추정되었다. 방사선 조사에 따른 난소조직의 미세구조 변화를 관찰하기 위하여 고배율의 전자현미경으로 관찰한 결과, 방사선량의 증가에 따라 성장난포의 과립층세포에서 핵과 세포질의 미세구조 변형이 급격히 증가하였으며, 난포동에서는 세포사의 부산물인 세포 잔유체들과 백혈구 및 대식세포 등이 관찰되었다. 과립층세포의 미세구조적 변형은 주로 핵의 응축에 의한 전자밀도의 증가와 핵의 분절화, 그리고 세포질의 위축 등, 전형적인 세포예정사의 특성을 나타내고 있었다. 세포의 괴사도 일부 확인되었으나 그다지 현저하지 않았으며, apoptotic body와 함께 대식세포가 산재되어 있었다. 방사선(X-선) 조사 및 선량증가에 따라 정상 난소조직의 난포액의 불균질 물질의 생성, 난포의 기저막의 염색성출현, 세포예정사 발생, 대식세포들의 변화 등을 확인하였다. 이 결과를 통하여 여성 자궁암을 방사선치료 시 방사선조사범위내에 포함되는 정상 난소조직에 초래 될 수 있는 방사선 생물학적 장해를 이해할 수 있다 하겠다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제26권3호
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• pp.147-152
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• 2011

본 연구는 효율적인 재래 산양의 난포란을 확보하기 위하여 미성숙 산양에 과배란 처리를 실시하여 체내 성숙 난자(배란된 난자) 및 난포란을 회수하여 공란산양의 성숙 여부가 난자의 회수율과 단위 발생란의 체외발달율에 미치는 영향을 조사하였다. 미성숙 산양의 과배란 처리에 의한 체내 성숙 난자의 회수율에 있어서 과배란 처리 후 두당 황체수는 13.1${\pm}$6.5개로서 성숙 산양의 8.8${\pm}$2.4개와 차이가 없었다(p<0.05). 산양의 두당 회수율은 마성숙 산양이 9.l${\pm}$6.8개로서 성숙 산양의 9.8${\pm}$2.5개와 차이가 없었다. 공란산양으로부터 체내 성숙 난자 회수 후 난소의 난포로부터 채란한 난포란의 회수율에 있어서 산양 두당 난포 수는 미성숙 산양이 7.9${\pm}$6.5개로서 성숙 산양의 8.8${\pm}$2.4개와 차이가 없었다. 이들 황체로부터 회수한 난포란 수도 미성숙 산양이 5.6${\pm}$6.1개로서 성숙 산양의 6.3${\pm}$2.3개와 차이가 없었다. 회수한 난포란의 등급에 있어서 1+II 등급 난포란은 미성숙 산양이 25.0%로서 성숙 산양의 52.4%보다는 낮았다(p<0.05). 4등급의 비율은 미성숙 산양이 39.3%로서 성숙 산양의 19.8%보다는 높았다(p<0.05). 미성숙 산양으로부터 회수한 체내 성숙 난자를 단위 발생을 유도하였을 때 분할율은 54.5%로서 성숙 산양으로부터 회수한 단위 발생 난자의 분할율 86.8%보다는 낮았다(p<0.05). 배반포기로의 발달율에 있어서도 미성숙 산양이 23.3%로서 성숙 산양의 46.6%보다는 유의적 (p<0.05)으로 낮았다. 이상의 결과를 미루어 볼 때 미성숙 재래 산양으로부터 난자의 생산은 난자의 확보 측면에서는 한 방법이 될 수 있으나, 회수란의 질 저하에 대한 문제는 공란 산양의 보다 적합한 연령, 실험 시기, 성선자극 호르몬의 양 및 공시 산양의 관리 등 앞으로 보다 세밀한 검토가 필요한 것으로 생각된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제26권1호
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• pp.55-65
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• 1999

There have been many reports to date regarding the role of GnRH as a local regulatory factor of ovarian function as studies of human and rat ovaries revealed GnRH and its receptor. In recent studies it has been shown that GnRH directly causes apoptosis in the granulosa cells of the rat ovary, and such results leads to the suggestion that the use of GnRH agonist for more stable long term ovarian hyperstimulation in human IVF-ET programs causes granulosa cell apoptosis which may lead to follicular atresia. Therefore this study attempts to determine if granulosa-luteal cell apoptosis occurs in patients during IVF-ET programs in which GnRH agonist is employed for ovarian hyperstimulation. The quality of oocyte-cumulus complexes obtained during ovum pickup procedures were assessed morphologically and then the fertilization rate and developmental rate was determined. Apoptotic cells among the granulosa-luteal cells obtained during the same procedure were observed after staining with Hematoxylin-eosin. The fragmentation degree of DNA extracted from granulosa-luteal cells was determined and comparatively analyzed. There was no difference in the average age of the patients, the number of oocytes retrieved, and fertilization and developmental rates between the FSH/hMG group and GnRH-long group. There was also no difference in the apoptosis rate and pyknosis rate in the granulosa-luteal cells between the two groups. However, when the oocyte-cumulus complexes were morphoogically divided into the healthy group and atretic group without regard for the method of hyperstimulation, the results showed that the number of oocytes obtained averaged $11.09{\pm}8.75\;and\;10.33{\pm}4.53$ per cycle, respectively, showing no significant difference, but the fertilization rate (77.05%, 56.99%, respectively, p<0.01) and developmental rate (65.96%, 41.51%, respectively, p<0.01) was significantly increased in the healthy group when compared to the atretic group. The degree of apoptosis in the granulosa-luteal cells showed that in the healthy group it was 2.25% which was not significantly different from the atretic group (2.77%), but the pyknosis rate in the atretic group (27.81%) was significantly higher compared to the healthy group (11.35%, p<0.01). The quantity of DNA fragmentation in the FSH/hMG group was 32.22%, while in the GnRH-long group it was 34.27%, showing no significant difference. On the other hand the degree of DNA fragmentation was 39.05% and 11.83% in the healthy group and atretic group, respectively, showing significantly higher increase in the atretic group (p<0.01). The above results suggest that death of granulosa-luteal cells according to the state of the oocyte-cumulus complex is more related to pyknosis rather than apoptosis. Also, the GnRH agonist used in ovarian hyperstimulation does not seem to directly affect the apoptosis of retrieved oocytes and granulosa-luteal cells, and which is thought to be due to the suppression of the apoptogenic effect of GnRH agonist as a result of the high doses of FSH administered.

• 한국수정란이식학회지
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• 제19권2호
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• pp.81-87
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• 2004

본 연구는 재래산양에 있어서 과배란 처리시 공란 산양의 반복사용에 따른 oocyte의 회수방법과 회수란의 질적 개선방법을 확립하기 위하여 실시하였으며, 성선자극호르몬의 1회 처리와 반복처리, 호르몬제의 종류에 따른 oocyte의 회수율과 등급을 조사하였다. 공시동물은 체중 15~25kg 전${\cdot}$후의 성숙한 미경산 재래산양으로서 발정 동기화를 위하여 CIDR를 10일간 질내에 삽입하고 과배란 처리는 70 mg의 FSH 와 1,000 IU의 PMSG를 투여하여 과배란을 유기하였다. ${PGF_{2\alpha}$ 는 8일째에 투여하여 과배란을 유기하였으며, CIDR는 10일째 제거와 동시에 hCG 400 IU를 투여하였다. 난자의 회수는 hCG 투여 후 35~40시간째에 외과적인 방법으로 실시하였으며, 회수한 난자는 난구세포와 세포질의 부착정도에 따라 4등급으로 분류하여 회수율을 조사하였다. FSH와 PMSG를 투여하여 공란 산양으로 처음 사용하였을 때 49두에서 324(6.63${\pm}$0.63) 개와 27두에서 305(11.30${\pm}$1.29)개의 배란점을 확인하였으며, 이 중 43.8%(142/324)와 69.2%(211/305)가 회수되어 두당 회수율은 2.92${\pm}$0.52 개와 7.81${\pm}$1.14개로서 FSH와 PMSG간에 전체 회수율과 두당 회수율은 PMSG 처리구가 유의적(P<0.05)으로 높았다. 반복 사용하였을 때 FSH와 PMSG 처리구의 두당 배란수는 2.88${\pm}$0.69 개와 7.56${\pm}$1.11 개였으며, 회수율은 각각 17.4%(4/23) 및 44.9%(61/136) 로 PMSG 처리구가 유의적(P<0.05)으로 높았다. 두당 회수율은 0.50${\pm}$0.27개 및 3.39${\pm}$0.86개로서 PMSG 처리구가 유의적으로 높았다. 회수한 난포란의 1 및 2등급에 있어서 공란 산양으로 처음 사용하였을 때 FSH 투여구는 각각 20.6%(GI) 및 14.9%(GII)였으며, PMSG 투여구는 12.9%(GI) 및 14.1%(GII)로 나타났다. 반복 사용하였을 때, 회수한 난포란의 등급은 FSH 투여구는 각각 31.3%(GI) 및 28.1%(GII)였으며, PMSG 투여구는 36.4%(GI), 5.1%(GII)로 나타났다. 이상의 결과로 볼 때 배란된 난자의 회수율은 PMSG 가 FSH보다 높았으며, 난포내 난자의 회수율은 투여 호르몬 및 반복사용 여부에 따른 차이는 없었다.

• 한국가축번식학회지
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• 제11권1호
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• pp.73-84
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• 1987

This experiment was carried out to investigate the effects of hormone addition(FSH, HCG, estrogen and progesterone) and composition (BSA and FCS) of mKRB on the in vitro maturation and fertilizability of follicular oocytes of the Korean native cattle. The ovaries were removed at a slaughterhouse, returned to laboratory in a thermostat (30-35$^{\circ}C$) within 4 hr, and collected by aspirating normal follicles which had diameters of 1 to 6 mm. The oocytes with cumulus cells were cultured for 8, 16, 24 and 30 hr in a modified KRB solution containing BSA or FCS and hormones. The in vitro matured oocytes in mKRB containing FCS, FSH and steroids were transferred in the rabbit uterus for examination of their in vivo fertilizability with bovine sperm preincubated 4 to 6 hr in the rabbit uterus. 1. The mean number of oocytes collected per cattle was 6.5 from 1-3mm follicles, 1.3 from 4-6mm follicles, and total was 7.7. 2. The meiotic division at 16hr-cuture in the oocytes from 1-3mm follicles was slightly stimulated by the addition of FSH in mKRB + BSA solution compared with the control. At 30hr-culture, their maturation rates(%Met II) were also increased by FSH of 1 $\mu\textrm{g}$/ml(38.4%) and 5$\mu\textrm{g}$/ml(35.7%) as compared with the control (21.4%). The maturation rate at 30hr-culture in the oocytes from 4-6mm follicles was 53.8% and 57.1% by the FSH addition of 1$\mu\textrm{g}$/ml and 5$\mu\textrm{g}$/ml, respectively. These rates were similar with the control(57.1%), but higher than those of oocytes from 1-3mm follicles. 3. The meiotic division at 16hr-culture in the oocytes from 1-3mm follicles was stimulated by the HCG addition of 1IU/ml and 5IU/ml. However, the maturation rate at 30hr-culture was greatly decreased by the HCG addtion (26.6% and 13.3%) compared with the control(53.3%) and these rates (30.8%) in the oocytes from 4-6mm follicles were also lower than that fo the control(58.3%). 4. Low maturation rate (37.5%) of the oocytes cultured in mKRB containing BSA and 5IU/ml HCG was increased (55.0%) when 15% FCS with HCG was added to mKRB instead of BSA. 5. When 16hr-cultured oocytes in mKRB containing BSA and gonadotropins (5$\mu\textrm{g}$/ml FSH and 5IU/ml HCG) were transferred in the medium without gonadotropins and recultured for 16hr, the maturation rate of HCG-treated oocytes was greatly improved. 6. The maturation rates of oocytes were greatly affected by steroids. The combined addition of FCS+FSH+estrogen or +progesterone to mKRB increased the maturation rate compared with the combination of BSA+FSH or FCS+FSH in mKRB. 7. The fertilization rate, presence of pronuclei, was increased by the combination of FCS+FSH+p in mKRB as compared with that (5.6%) of BSA+FSH and the rates of FCS+FSH+steroids ranged from 12.5 to 17.6%.