Small peptide tags such as c-myc, HA, or FLAG tag have facilitated efficient Western-blotting of proteins of interest especially when specific antibodies for the proteins are not available. However, the conventional Western-blotting requires the multi-steps process taking at least several hours up to two days. With examples of various applications, here we show a convenient and time-saving method for protein detection which employs a fluorescent chemical BDED and its binding peptide RC-tag. And we propose "Estern staining", as a standard term for protein detection method using fluorescent chemicals and their binding small peptide tags. Eastern staining may substitutes for the time-consuming "immuno-staining" in many versatile applications.
Three different methods of bacterial viability monitoring were compared to detect chemically or thermally inactivated Escherichia coli. Direct colony enumeration, live/dead bacterial cell staining with a fluorescent dye, and the dehydrogenase activity assay were compared with respect to their ease of use and time required to perform the three different tests. The green (live cell)/red (dead cell) ratio obtained from the fluorescent bacterial cell staining approach showed a linear relationship with the colony forming units; the result obtained with dehydrogenase was similar to those. The sensitivity of the monitoring methods to detect bacterial deactivation varied with different disinfection conditions. After thermal treatment, the sensitivity of the staining approach was lower, while that of the dehydrogenase activity assay was the highest. After chemical treatment, the sensitivity of detection for both methods was similar.
In the study for a differentiation and development of spermatogonial cells, the researchers should commonly require a simple, fast and reasonable method that could evaluate the developmental stage of male germ cells without any damage and also relentlessly culture them so far as a cell stage aiming at experimental applications. For developing the efficient method to identify the stage of sperm cells, the morphological characteristics of sperm cells were investigated by staining the cells with blue fluorescent dye Hoechst 33258, and a criterion for male germ cell classification was elicited from results of the previous investigation, then the efficiency of the criterion was verified by applying it to assort the germ cells recovered from male mice in age from 6 to 35 days. As morphological characteristics, spermatogonia significantly differed from spermatocytes in size, appearance and fluorescent patches of nucleus, and spermatids could also be distinguished from spermatozoa by making a difference in the volume and shape of nucleus and the shape and fluorescence of tail. Aforesaid criterion was applicable for classifying in vitro cultured sperm cells by verifying its efficiency and propriety for assorting the stages of testicular germ cells. However, the fluorescent staining showed that germ cells in mouse testis should be dramatically differentiated and developed at 21 days and 35 days of age, which were known as times of sexual puberty and maturity in male mice, respectively. In conclusion, the results indicated that this simple criterion for sperm cell classification using fluorescence staining with Hoechst 33258 may be highly efficient and reasonable for spermatogenesis study.
The denature polyacrylamide gel stain silver nitrate is used for routine nucleic acid detection. More sensitive stains, such as Vistra Green, SYBR Green are available to address a broad range of DNA applications requiring lower detection limits in polyacrylamide gel formats. Gel Scanners, laser-scanning instruments, provide sensitive fluorescence detection of DNA gel stains. We established one step fluorescent impregnation enhanced sensitivity with simple, rapid and low cost. We have applied this fluorescent staining procedure for the routine analysis of DNA profiles generated by SSR amplification.
In this study, bacterial growth was assessed by flow cytometry analysis of fluorescent probes-stained bacteria. Flow cytometry has many advantages of rapid analytical time, a low standard deviation, and highly sensitive detection of live and Dead E.coli over colony forming assay. When untreated bacteria were stained by using Thiazole Orange (TO) and Propidium Iodide (PI), double staining had a short analytical time as compared with that of single staining while its error rate was similar to that of single staining. Through double staining experiments, it was determined that optimal concentrations for TO and PI staining were 420 nM and $9.6{\mu}M$, respectively.
Hara, Kazutaka;Zhang, Daizhou;Yamada, Maromu;Matsusaki, Hiromi;Arizono, Koji
Asian Journal of Atmospheric Environment
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v.5
no.3
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pp.152-156
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2011
Viable bacteria on water-insoluble airborne particles were detected in the urban atmosphere of Kumamoto ($134^{\circ}45'E$, $32^{\circ}28'N$), Japan, in autumn 2008. Airborne particles were collected onto film-covered Cu meshes under clear weather conditions. The samples were stained by fluorescent stains, and then viewed and photographed with an epifluorescent microscope. Non-biological and bacterial parts in particles larger than 0.8 ${\mu}m$ were distinguished by their morphologies, fluorescent colors and fluorescent intensities. Bacterial viable statuses were discriminated according to cell membrane damage. In total, 2681 particles were investigated and it was found that 78 airborne particles were associated with bacteria. Viable bacteria were identified on 48 particles. A few particles carried multiple viable bacteria. These results provide the evidence that airborne particles act as carriers of viable bacteria in the atmosphere.
This study was conducted to quantify of micronucleus frequencies in human umbilical cord blood by supravital staining method with acridine orange, and to find some factors that affected on micronucleus frequncies in humans. In this study, we used umbilical cord blood of new born infants that have sufficient reticulocytes compared with adult peripheral blood. The cord bloods were taken after childbirth from 60 normal infants in industrial and coastal region in Korea. The total of 3 ${mu}ell$ cord blood was applied to slide coated with acridine orange, and micronuclei were observed under fluorescent microscopy. Demographic factors and independent variables were collected from mothers by questionnaire. The frequencies of micronuclei in umbilical cord blood of new born infants were 0-5 per 2,000 reticulocytes by supravital staining method, and mean value and standard deviation were 1.75$\pm$0.97. There were no significant difference by the regions, smoking habits of father or mother. However, age of mother showed significant positive correlation with frequencies of micronuclei (p<0.05). Smoking at home by fathers also was found as a significant variable by muliple regression analysis. Therefore, further studies would be needed for genotoxicological evaluation of new born infants by microneuli test using supravital staining method.
The Journal of the Korean Society for Microbiology
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v.3
no.1
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pp.51-65
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1968
The site of the synthesis of Japanese encephalitis virus(JEV) in the actinomycin-treated and infecter PS Y15 cells(a porcine kidney stable cell line) was observed by the immunofluorescent antibody technique, acridine orange staining, and the autoradiographic analysis. In the parallel studies by immunofluorescent technique and acridine orange staining it the infected cells, Viral protein(as an antigen) and viral RNA were detected at the same site of cytoplasm. In the autoradiographic analysis, the cytoplasmic labeling of $^3H$-uridine was due to the synthesis of JEV-RNA, while the nucleolus and nucleus were not involved. In the autoradiographic studies on the secton of infected cells, the $^3H$-uridine was frequently incorporated around the cytoplasmic vacuoles. This localization of labeling agreed with the site of acridine orange positive granules. The results suggest that the syntheses of the viral RNA and viral protein occurred in the similar site of cytoplasm of the infected cells, and also the virus particles seem to be assembled in the sites of the viral RNA and protein syntheses.
The anti-proliferating effects of some plants on hepatoma cell lines were studied by the 3-[4,5-dim-ethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT assay), to investigate the anticancer effect with some plants around here. As the result, we saw that the anti-prolferating effect to the plants. Among the plants, Equisetum arvense L. and Lactuca dentata Makino. var, flaviflora Makino of them relatively showed a good ant-proliferating effect. Capsicum annuum L. var. angulosum Mill (Leaf) was the best among them. We also examined morphological changes on the hepatoma cells in this process. In case of Capxicum annuum L. var. angulosum Mill, the tells become vague after 2 days, and then destroyed faster than others. We can fee also the condensated chromosome on the treated cells with Capxicum annuum L. var. angulosum Mill. And we also observed condensation through using a fluorescent microscope by PI staining, and observed DNA fragmentation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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