• 제목/요약/키워드: Fluorescence detection system

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HPLC를 이용한 우유에서의 fluoroquinolones 시험법 확립 (Establishment of an Analytical Method of Fluoroquinolones in Milk by HPLC)

  • 김종화;홍세령;강태범;이현경;이순호
    • 한국식품과학회지
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    • 제42권5호
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    • pp.521-526
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    • 2010
  • 본 연구에서는 우유에서 플루오르퀴놀론계 합성 항균제의 확인과 정량을 위하여 HPLC를 이용한 방법을 개발하였다. 우유 내 단백질을 제거하기 위하여 삼염화초산을 사용하였고 아세토니트릴로 추출하였다. 그리고 $Strata^{TM}$-X 카트리지로 정제한 후 $C_{18}$ 칼럼을 이용한 HPLC로 분석하였다. 높은 감도를 얻기 위하여 형광 검출기를 사용하였고, 최적파장 Ex: 278 nm, Em: 456 nm에서 분석한 결과 우유 내에서 정량한계와 회수율은 각각 ofloxacin 40 ${\mu}g$/kg, 73.6-95.2%, norfloxacin 10 ${\mu}g$/kg, 77.3-91.9%, ciprofloxacin 20 ${\mu}g$/kg, 91.6-94.3%, enrofloxacin 10 ${\mu}g$/kg, 81.0-87.8%, sarafloxacin 10 ${\mu}g$/kg, 71.3-81.0%, orbifloxacin 10 ${\mu}g$/kg, 89.4-90.8%, danofloxcin 2 ${\mu}g$/kg, 69.4-85.5%이었다.

Determination of nadolol enantiomers in human plasma using a coupled achiral-chiral high-performance liquid chromatography method

  • Lee, Seung-Beom;Pham, Thuy-Vy;Mai, Xuan-Lan;Le, Thi-Anh-Tuyet;Nguyen, Thi-Ngoc-Van;Kang, Jong-Seong;Mar, Woongchon;Kim, Kyeong Ho
    • 분석과학
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    • 제33권2호
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    • pp.59-67
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    • 2020
  • Nadolol is a β-blocker drug, which effectively manages hypertension and angina pectoris. Its chemical structure allows the formation of four possible stereoisomers. A coupled column high-performance liquid chromatographic (HPLC) system with UV and fluorescence detection was investigated for simultaneously determining four nadolol enantiomers in human plasma. The plasma samples were prepared using a convenient liquid-liquid extraction process and passed through HPLC. Nadolol was initially separated from the endogenous compounds or other impurities in human plasma on a Phenomenex silica column, and its enantiomers were resolved and determined on a Chirapak AD-H column. The developed HPLC method achieved an effective chiral separation and significantly eliminated endogenous compound interference. This optimal HPLC method was validated following FDA guidelines. The results showed good selectivity, linearity, accuracy (90.50 % - 105.27 %), and precision (RSDs < 9.52 %) for each enantiomer. This method was also successfully applied to determine nadolol enantiomers in the plasma samples of a healthy male volunteer (after orally administering 80 mg racemic nadolol), proving its suitability for nadolol stereoselective pharmacokinetic studies.

돼지 group C 로타바이러스 VP6 특이 단클론항체 (Monoclonal antibodies against porcine group C rotavirus VP6)

  • 윤영심;이승철;우상규;조경오;강신영
    • 한국동물위생학회지
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    • 제35권3호
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    • pp.175-182
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    • 2012
  • Rotaviruses have been known to be a major etiological agent of gastroenteritis in both infants and young animals. Subsequently new rotaviruses, which were morphologically indistinguishable but antigenically and electrophoretically distinct with each other, were reported from several animals throughout world including Korea. These new rotaviruses were named as non-group A or group B or group C rotaviruses and so on. It has been very difficult to isolate and grow the non-group A rotaviruses in vitro, and this has greatly limited the characterizations of non-group A rotaviruses and serological studies. In this study, monoclonal antibodies (MAbs) against porcine non-group A rotavirus were produced and characterized. The VP6 gene of porcine group C rotavirus Korean isolate(#06-52-1) was cloned and expressed. For expression of VP6 gene, baculovirus expression system was applied. The VP6 gene and expressed protein in the recombinant virus were confirmed by polymerase chain reaction (PCR), indirect fluorescence antibody (IFA) test and Western blot, respectively. The expressed VP6 was used for MAbs production. The MAbs produced in this study would be promising as diagnostic reagents for detection of group C rotavirus infection.

HPLC-AFS를 이용한 해산물 중 비소 화학종 분리정량 (Quantification of Arsenic Species in Some Seafood by HPLC-AFS)

  • 정승우;이채혁;이종화;장봉기
    • 한국환경보건학회지
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    • 제47권5호
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    • pp.496-503
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    • 2021
  • Background: Considering the expenses of and difficulties in arsenic speciation by high performance liquid chromatography-inductively coupled plasma-mass spectrometry (HPLC-ICP-MS), alternative measurement methods should be useful, especially for large-scale research and projects. Objectives: A measurement method was developed for arsenic speciation using HPLC-atomic fluorescence spectrometry (HPLC-AFS) as an alternative to HPLC-ICP-MS. Methods: Total arsenic and toxic arsenic species in some seafoods were determined by atomic absorption spectrometry coupled with hydride vapor generation (AAS-HVG) and HPLC-AFS, respectively. Recovery rate of arsenic species in seafood was evaluated by ultra sonication, microwave and enzyme (pepsin) for the optimal extraction method. Results: Limits of detection of HPLC-AFS for As3+, dimethylarsinate (DMA), monomethylarsonate (MMA) and As5+ were 0.39, 0.53, 0.60 and 0.64 ㎍/L, respectively. The average accuracy ranged from 97.5 to 108.7%, and the coefficient of variation was in the range of 1.2~16.7%. As3+, DMA, MMA and As5+ were detected in kelp, the sum of toxic arsenic in kelp was 40.4 mg/kg. As3+, DMA, MMA and As5+ were not detected in shrimp and squid, but total arsenic (iAS and oAS) content in shrimp and squid analyzed by AAS-HVG were 18.1 and 24.7 mg/kg, respectively. Conclusions: HPLC-AFS was recommendable for the quantitative analysis method of arsenic species. As toxic arsenic species are detected in seaweeds, further researches are needed for the contribution degree of seafood in arsenic exposure.

FISH기법 및 단세포전기영동기법을 이용한 저선량 방사선에 의한 DNA 상해 및 염색체이상 평가 (Assessment of DNA damage and Chromosome aberration in human lymphocyte exposed to low dose radiation detected by FISH(fluorescence in situ hybridization) and SCGE(single cell gel electrophoresis))

  • 정해원;김수영;김병모;김선진;김태환;조철구;하성환
    • Journal of Radiation Protection and Research
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    • 제25권4호
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    • pp.223-232
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    • 2000
  • 단세포전기영동법은 저선량 방사선에 의한 DNA손상을 민감하게 측정할 수 있는 방법으로 그 활용성이 증대되고 있다. 또한 각 염색체에 특이한 DNA probe를 이용하는 FISH기법은 염색체의 구조적 변화를 측정하는 매우 효과적인 방법으로서 그 유용성이 증대되고 있는 추세이다. 본 연구에서는 저선량 방사선의 측정을 위한 생물학적 선량계로서 FISH 기법과 단세포전기영동법의 활용가능성을 조사하고자 하였다. 5, 10, 30, 및 50 cGy의 저선량 방사선 조사에 의한 염색체이상빈도는 상호전좌의 경우 1, 2, 4번 염색체가 전체 genome상에서 차지하는 비율을 감안하여, 전체 세포수로 환산했을 때 cell equivalent당 0.0375, 0.0407, 0.0727 및 0.0814로 나타났으며, 이동원염색체의 경우 0.0125, 0.0174, 0.02291, 및 0.0407로 나타나 선량 증가에 따라 증가하는 것을 알 수 있었다. 또한 $5{\sim}50cGy$의 저선량 방사선 조사 후 단세포전기영동법을 통해 DNA 상해정도를 살펴본 결과 선량이 증가할수록 DNA 상해가 증가하는 결과를 얻었다. 따라서 FISH 기법은 저선량 방사선 피폭시 염색체이상을 보다 정확하고 쉽게 관찰할 수 있으며, 단세포전기영동법은 DNA 손상을 민감하게 감지할 수 있어 저선략 방사선 피폭 시 유용한 생물학적 선량계로서 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

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최적의 luminescence 신호 분석을 위한 유전자 전달 방법의 비교연구 (Comparative studies of various transfection processes for the optimal luminescence signal analysis)

  • 박서현;이승호
    • 한국산학기술학회논문지
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    • 제17권11호
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    • pp.640-647
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    • 2016
  • 형광 간섭 현상을 최소화시켜 상대적으로 민감한 측정이 가능한 aequorin기반 luminescence기술은 $G_{{\alpha}16}$ 단백질 도입을 통해 세포 내부의 칼슘 이동 신호를 감지하여 G 단백질 결합 수용체(G protein-coupled receptor, GPCR)의 기능 분석을 가능하게 하는 세포 기반 분석 기술로 수용체 및 G 단백질 유전자 전달의 최적화 과정이 필수적이다. 본 연구를 위해 corticotropin releasing factor receptor subtype 2(CRF2) 수용체를 모델 시스템으로 CRF2와 $G_{{\alpha}16}$ 단백질이 구축된 세 가지 안정화 세포주를 제작하였고, 이들을 이용한 서로 다른 세 가지 조건의 임시 발현 세포주에서 작용제(sauvagine)와 길항제(K41498)의 반응성을 분석하여 최적의 유전자 전달 방법을 도출하고자 하였다. 그 결과 sauvagine 및 K41498의 농도에 따른 반응에서 CRF2-$G_{{\alpha}16}$ 안정화 세포주가 임시 발현 세포주보다 10배 이상의 유효신호 비율을 나타내었고(z'=0.77) 임시 발현 세포주의 경우 $G_{{\alpha}16}$의 안정화 발현 이후에 CRF2를 전달하는 경우가 다른 임시 발현 조건보다 2배 이상 높은 효율을 보였다(z'=0.84). 따라서 임시 유전자 전달 기술을 GPCR 세포 기능 분석 시스템에 활용할 경우 $G_{{\alpha}16}$ 단백질에 대한 안정화 세포주를 우선적으로 구축하고, 목표하는 다양한 수용체들을 단계적으로 발현시키는 것이 최선의 방법이라 판단된다.

바실러스균 발효황금약침액이 Lipopolysaccharide로 활성화된 마우스 대식세포의 인터루킨 생성에 미치는 영향 (The Effect of Bacillus-Fermented Scutellariae Radix Acupuncture Solution on Interleukin Production in Mouse Macrophage Stimulated by Lipopolysaccharide)

  • 박완수
    • Korean Journal of Acupuncture
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    • 제27권2호
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    • pp.95-105
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    • 2010
  • Objectives : The purpose of this study is to investigate the effect of Bacillus-fermented Scutellariae Radix acupuncture solution (SB) on interleukin(IL) production in mouse macrophage stimulatedby lipopolysaccaride(LPS). Methods : Productions of interleukins were measured y High-throughput Multiplex Bead based Assay with Bio-plex Suspension Array System based on $xMAP^{(R)}$(multi-analyte profiling beads) technology. To begin with, cell culture supernatant was obtained after treatment with LPS(1 ${\mu}g/mL$) and SB for 24 hour. Then, it was incubated with the antibody-conj${\mu}g$ated beads for 30 minutes. And detection antibody was added and incubated for 30 minutes. After incubating for 30 minutes, Strepavidin-conjugated Phycoerythrin(SAPE) was then added. Incubating for another 30 minutes, the level of SAPE fluorescence was analyzed on Bio-plex Suspension Array System. Results : The results of the experiment are as follows. SB significantly inhibited the LPS-induced production of IL-3($9.15{\pm}0.35$ pg/mL) by $6.92{\pm}0.05,\;7.21{\pm}0.11,\;6.96{\pm}0.33,\;and\;7.45{\pm}0.74$ pg/mL at the concentration of 25, 50, 100, and 200 ${\mu}g/mL$ in mouse macrophage RAW 264.7 cells (p<0.05). SB significantly inhibited the LPS-induced production of IL-5($7.30{\pm}0.48$ pg/mL) by $6.50{\pm}0.29,\;6.30{\pm}0.25,\;6.30{\pm}0.25,\;and\;5.80{\pm}0.25$ pg/mL at the concentration of 25, 50 100, and 200 ${\mg}g/mL$ in RAW 264.7 cells (p<0.05). SB significantly inhibited the LPS-induced productiion of IL-9($17.26{\pm}0.19$ pg/mL) by $15.01{\pm}0.43$ pg/mL at the concentration of 25 ${\mu}g/mL$ in RAW 264.7 cells(p<0.05). SB significantly inhibited the LPS-induced productioh of IL-13($187.80{\pm}2.90$ pg/mL) by $152.80{\pm}4.25,\;172.80{\pm}3.97,\;162.10{\pm}6.67,\;and\;165.30{\pm}11.80$ pg/mL at the concentration fo 25, 50, 100, and 200 ${\mu}g/mL$ in RAW 264.7 cells(p<0.05). SB significantly inhibited the LPS-induced production of IL-17($18.30{\pm}0.95$ pg/mL) by $13.30{\pm}1.25,\;13.80{\pm}1.11,\;13.30{\pm}0.75,\;and\;14.00{\pm}1.08$ pg/mL at the concentration of 25, 50 100, and 200 ${\mu}g/mL$ in RAW 264.7 cells(p<0.05). SB significantly inhibited the LPS-induced production of IL-23($43.90{\pm}0.83$ pg/mL by $39.50{\pm}1.26,\;38.00{\pm}1.78,\;and\;39.60{\pm}2.49$ pg/mL at the concentration of 25, 100, and 200 ${\mu}g/mL$ in RAW 264.7 cells(p<0.05). Conclusions : These results suggest that SB has anti-inflammatory activity related with its inhibition of IL-3, IL-5, IL-13, IL-17, and IL-23 production in macrophages.

수환경 내 용존성 유기물질의 총 유기탄소 및 총 질소 안정동위원소 신규 분석법 소개 (Introduction of a New Method for Total Organic Carbon and Total Nitrogen Stable Isotope Analysis of Dissolved Organic Matter in Aquatic Environments)

  • 박시영;최희주;홍서연;임보라;최서영;김은미;허유정;이수형;김민섭
    • 생태와환경
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    • 제56권4호
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    • pp.339-347
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    • 2023
  • 본 연구는 TOC/TN-IRMS를 이용하여 총 유기탄소 및 총 질소 안정동위원소 분석법을 연구하였으며, 수환경 중저농도 시료에서도 분석이 가능하게 시스템을 구축하였다. 수생태계로 유입되는 다양한 유기탄소 기원을 파악하기 위하여 형광지표와 δ13C-DOC 안정동위원소비를 활용한다면 효율적인 수질 관리를 위한 해석기능을 제공할 것이며, 추후 유역 오염원의 대표값(end member)의 지속적인 조사를 통하여 자료구축이 이루어져야 할 것이다.

전기적 방출 조절 시스템을 이용한 광 페록사이드센서의 개발 (Signal Analysis of Optical Biosensor to Detect Peroxide Using Electrically Controlled Release System)

  • 민준홍;임인희;김효한;이상백;최정우;이원홍
    • 센서학회지
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    • 제6권1호
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    • pp.35-42
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    • 1997
  • 전기적 제한 방출 시스템을 이용한 페록사이드 측정용 광바이오센서가 개발되었다. HPA를 포함한 PEOx와 PMAA의 고분자 복합체는 전류를 가하게 되면 붕괴되면서, HPA를 방출한다. 고분자 복합체의 붕괴 속도 및 방출되는 HPA의 양은 가해지는 전류의 세기에 비례했다. 페록사이드는 HPA와 페록시다아제효소에 의해 반응되어 형광 물질인 DBDA가 생성되었다. Xenon램프를 이용하여 DBDA를 여기시키고 발생되는 형광을 광섬유와 광다이오드어레이로 측정하였다. 측정된 DBDA의 형광의 변화는 페록사이드의 농도에 비례하였다. 페록시다아제 효소는 Ca-alginate를 이용하여 반응기내벽에 고정화시켰다. 개발된 광바이오센서는 페록사이드 0.025mM - 1.0mM 농도의 측정 범위를 가지며, 페록사이드의 단계 변화에 대한 반복성 있는 센서신호가 조사되었다. 효소 반응과 물질전달현상을 통하여 센서의 수학적 모델을 구성하였으며, 제안된 모델은 실험 결과와 잘 일치함을 알 수 있었다.

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Microsatellite 마커를 이용한 오이 유통품종 DNA Profile Data Base 구축 (Construction of a DNA Profile Database for Commercial Cucumber (Cucumis sativus L.) Cultivars Using Microsatellite Marker)

  • 권용삼;최근진
    • 원예과학기술지
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    • 제31권3호
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    • pp.344-351
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    • 2013
  • 국내에서 유통되고 있는 오이 110 품종을 대상으로 microsatellite 마커를 이용하여 DNA profile 데이터베이스를 구축하기 위하여 품종식별력이 높은 분자 마커의 선정 및 이를 활용한 품종간 유전적 유사도 검정 등에 대한 연구를 수행하였다. 오이 11 품종을 358개의 microsatellite 마커로 검정하여 31개의 다형성이 높은 마커를 선정한 다음 110품종에 대한 DNA profile 데이터베이스를 구축하였다. 오이 110품종을 31개의 microsatellite 마커로 분석하였을 때 대립유전자의 수는 2-9개로 비교적 다양한 분포를 나타내었으며 전체 139개의 대립유전자가 분석되었다. PIC 값은 0.253-0.873 범위에 속하였으며 평균값은 0.610으로 나타났다. Microsatellite 마커들의 대립유전자를 이용하여 계통도를 작성하였을 때 110 품종이 과실의 형태에 따라 그룹화되는 것을 확인하였으며, 대부분이 품종이 microsatellite 마커의 유전자형에 의해 식별이 되는 것으로 나타났다. 이 연구결과에 의해 개발된 오이 품종별 DNA profile 데이터베이스는 품종보호 출원 품종의 선 DNA 검정을 통한 대조품종 선정, 구별성, 균일성, 안정성 확인에 매우 유용하게 이용할 수 있어 향후, 품종보호권 강화 등에 크게 기여할 수 있을 것으로 사료된다.