Park, Kum-Ju;Kang, Jung-Il;Kim, Tae-Seok;Yeo, Ik-Hyun
Preventive Nutrition and Food Science
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제17권1호
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pp.78-82
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2012
Antithrombotic and fibrinolytic activity of natto was evaluated on platelet aggregation in vitro and in vivo. Natto showed inhibitory effects on platelet aggregation induced by adenosine 5’diphosphate (ADP) and collagen. Orally administered natto also showed fibrinolytic activity in hypercholesterolemia rats. Normal levels of natto, when administered for four weeks, shortened euglobulin clot lysis time (ECLT) and prolonged partial thromboplastin time (PATT) significantly compared to non-treated group. In addition, the natto treatment decreased total cholesterol in serum. These results showed that intake of normal levels of natto can elicit antithrombotic and fibrinolytic effects, suggesting its consumption may improve blood circulation.
국내 전통식품인 청국장으로부터 강력한 fibrinolytic activity를 갖는 K-54주를 분리, 동정한 결과 B. subtilis로 확인되었으며 이 균으로부터 강력한 갖는 효소를 정제하였다. 정제도는 약 66.9배 증가하였으며 약 10.1%의 수율을 보였다. B. subtilis K-54에서 분리한 fibrinolytic enzyme의 최적 활성 pH가 8-12사이였으며 50-75$^{\circ}C$사이에서 최적 활성을 보였다. 정제된 효소의 분자량은 약 29 kDa이었고, 등전점은 8.67로 나타났으며 Vmax값은 47.16%, Km값은 0.31(3.1 mg/$m\ell$)였다. N-말단 아미노산 서열 분석 결과 B. subtilis K-54주에서 정제한 fibrinolytic enzyme는 Ala-Gly-Ser-Val-Pro-Try-Gly-Ser이었으며 serine protease저해제인 PMSF에 강력한 활성 저해를 보여 serine protease계열의 효소임을 확인할 수 있었다.
Maggot fibrolase (MsMg-1) was purified from the maggots of Mimela splendems using ammonium sulfate fractionation, DEAE Affi-gel affinity chromatography. This protease had a molecular weight of 85 kDa as determined by SDS-polyacrylarnide gel electrophoresis under reducing conditions. It showed strong proteolytic and fibrinolytic activities. The purified enzyme was strongly inhibited by phenylmethanesulfonyl fluoride, Mn/sup 2+/, and Zn/sup 2+/ but it was not by EDTA, EGT, Mg/sup 2+/, Ca/sup 2+/, and Li/sup 2+/ ions. In these experimental results, we have speculated that MsMg-1 is a serine protease with a strong fibrinolytic activity.
This study was conducted to investigate the biological activities of Areca catechu L. The antioxidative, fibrinolytic, thrombin inhibitory, and ${\alpha}$-glucosidase inhibitory activities of Areca catechu L extracted with hexane, $CHCl_3$, ethyl acetate, butanol, and water were measured. The water fraction showed the highest extraction yield at 3.65% (w/w). The butanol, $CHCl_3$, water, and ethyl acetate fractions showed strong antioxidative activities at 81.6%, 87.1%, 88.0%, and 89.5%, respectively. The fibrinolytic activity was strong only in the ethyl acetate fraction at 0.84 plasmin units/ml. The 100-fold dilution of the water fraction had the strongest thrombin inhibitory activity at 59.2%. The 100-fold dilution of butanol fraction displayed the strongest ${\alpha}$-glucosidase inhibitory activity at 88.6%. In conclusion, the extracts of Areca catechu L hold promise for use in the development of biofunctional foods to prevent cardiovascular diseases.
이 연구의 목적은 자연 천연한 청국장에서 분비되는 혈전용해효소를 생산하는 Bacillus Iicheniformis HK-12의 혈전용해활성과 특성을 조사하기 위하여 실시한 것이다. 먼저 균주 HK-12의 생리생화학적 특성에 대하여 조사하였다. BIOLOG GP2 MicroPlate system과 16S rRNA 염기서열 분석을 통하여 균주를 동정하였고, 그 결과 Bacillus licheniformis로 확인되었고, B. licheniformis HK-12로 명명하였으며, 이 균주는 GenBank에 [Eu288193]로 등재하였다. 16S rRNA 염기서열 분석에 근거하여, B. licheniformis HK-12의 계통수를 작성하였다. B. licheniformis HK-12의 배양기간동안 세균의 생장, 혈전용해활성, pH의 변화를 모니터링하였다. 36시간배양 후, 배양의 최대 혈전용해활성은 대조군으로서 플라스민과 비교하여 약 2.25배로 나타났다. 혈전용해활성과 관련하여, B. licheniformis HK-12의 생장에서 최적 pH와 온도는 각각 초기 pH 7.0과 40$^{\circ}C$로 나타났다.
본 연구의 목적은 상업적으로 사용하기 위하여 혈전용해효소를 생성하는 세균인 MK-15를 분리하고 동정하는 것이다. 먼저 세균 MK-15는 자연 발효된 콩으로부터 농화분리하였으며, 이 세균에 대한 형태학적 및 다양한 생리학적 특성 조사를 실시하였다. MK-15의 배양 상등액으로부터 혈전용해효소 활성을 fibrin plate 방법으로 solid fibrinolytic activity를 측정하였다. 그 결과, 콩배지에서 자란 MK-15의 혈전용해활성은 대조군으로 사용된 plasmin의 혈전용해활성에 비하여 약 2.5배 높았다. 16S rRNA를 분석한 결과 균주 MK-15는 Bacillus subtilis 군과 99.9% 유사성을 나타내었다. 따라서, 이 세균은 Bacillus sp. MK-15로 명명하였으며. 균주 MK-15는 GenBank에 [DQ163021]로 등록하였다.
Fibrinolytic activity of fermented kimchi and ingredients used for the preparation were assayed by measuring the lysis area on plasminogen-rich fibrin plate. Fermented kimchi and picked fish sauces from changlan, prwan, and anchovy showed the activity, and the activity of pickled fish sauces were high in the order of pickled changlan, picked anchovy(pickled mulchi), and pickled prawn. However, the activity of kimchi may not be attributed to pickled fish sauce because kimchi containing fish sauce did not possess activities were determined from the samples heated for 30min at 100$\circ$C. There was no changes in activities before and after heat treatment indicating the agents may be components other than protein. Since major changes occur during kimchi fermentation were increased sour taste due to production of organic acids such as lactic, citric, oxalic, and succinic acids, the authentic organic acids present were examined for fibrinolytic activities. The results indicates that the major component posses the activity is lactic acid.
Kim, Seon-Ah;Son, Hong-Joo;Kim, Keun-Ki;Park, Hyun-Chul;Lee, Sang-Mong;Cho, Byung-Wook;Kim, Yong-Gyun
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제22권2호
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pp.83-93
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2011
Biochemical and enzymatic characterization for extracellular protease isolated from Cordyceps militaris cultivated on rice bran medium was investigated. C militaris produced proteolytic enzymes from 10 days after inoculation, maximum enzyme production was found at 25 days. The optimum temperature and pH of proteases production was at $25^{\circ}C$ and pH 7.0, respectively. The protease activity was observed in the four peaks (Pro-I, Pro-II, Pro-III, and Pro-IV) separated through Sephadex G-100 column chromatography. The separated protease was optimally active at $25^{\circ}C$. Optimum pH of the protease was between 7 and 8. Enzyme was also stable over at $30-80^{\circ}C$. The enzyme was highly stable in a pH range of 4-9. Protease activity was found to be slightly decreased by the addition of $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Fe^{2+}$ and $Cu^{2+}$, whereas inhibited by the addition of $Ca^{2+}$ and $Co^{2+}$ Protease activity was inhibited by protease inhibitor PMSF. On the other hand, the partially purified protease was investigated on proteolytic protease activity by zymogram gel electrophoresis using three substances (casein, gelatin and fibrin). Four active bands (F-I, FII, F-III, and F-IV) of fibrin degradation were revealed on fibrin zymogram gels. Both of F-II and FIII showed caseinolytic, fibrinolytic and gelatinolytic activities in three gels. Thermostability, pH stability, and pH-thermostability of the enzyme determined the residual fibrinolytic activity also displayed on fibrin zymogram gel. The only one enzyme (F-II) displayed over a broad range of temperature at $30-90^{\circ}C$. The FII displayed fibrinolytic activity in the pH range 3-5, but was inactivated in the range of pH 6-11. The F-I and F-III showed enzyme activity in the pH range of 6-11. In the pH-thermostability, the F-II only kept fibrinolytic activity after heating at $100^{\circ}C$ for 10, 20 and 30 min at pH 3 and pH 7, respectively. On the other hand, the F-II was retained activity until heating for 10 min under pH 11 condition. By using fibrin zymogram gel electrophoresis, extracellular fibrinolytic enzyme F-II from C. militaris showed unusual thermostable under acid and neutral conditions.
한국 식품연구원에서 분양받은 48종의 효모들의 PD broth 배양 농축물들의 혈전용해활성을 조사하였다. Saccharomyces cerevisiae Y99-7의 PD broth 배양 농축물이 25 mm의 용해환(clear zone)을 보여 가장 높은 혈전용해 활성을 보였다. 또한 선발 효모를 PD broth 배지로 $30^{\circ}C$에서 24 h 배양하였을 때 yeast extract-peptone dextrose 배양농축물 보다 높은 혈전용해활성을 보였다.
본 연구에서는 혈전용해능이 우수한 균주를 선별하여 청국장의 발효 특성을 비교 조사하였다. 시판청국장에서 분리된 5종 균주의 혈전용해능을 비교한 결과, N2가 $41.7\%$(Plasmin lunit/mL과 비교)로 가장 높게 나타났고 N3, N5가 각각 $27.8\%$를 나타내었다. N2 균주의 kit동정 결과, B. subtilis와 $90.1\%$ 유사한 균주로 나타났다. 이를 활용하여 청국장을 제조한 결과, 분양균주에서는 B. subtilis (KCTC 3014)가 가장 많은 점질물을 생성하였고, 혈전용해능과 아미노태질소 함량도 가장 높은 것으로 나타났다. 그리고 분리균주에서는 B. subtilis N2가 점질물 함량, 혈전용해능, 아미노태질소 함량이 가장 높은 것으로 나타났다. 증자시간에 따른 영향을 조사한 결과 B. subtilis (KCTC 3014)와 B. subtilis N2를 접종한 청국장은 증자시간을 45분이 적합한 것으로 나타났으며, 발효시 간은 20시간정도가 적합한 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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