Fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) is a well-established method commonly used to measure the diffusion of fluorescent solutes and biomolecules in living cells or tissues. Here a fiber-optic-based FRAP (f-FRAP) system was developed, and validated using macromolecules in water and agarose gels of different concentrations. We applied f-FRAP to measure the site-specific diffusion of fluorescein (NaFluo) in peritoneal membranes (PMs) on the liver, cecum, and kidney of a living rat during peritoneal dialysis. Diffusion of fluorescein in PM varied in a time-dependent manner according to the type of organ ($D_{PM\;on\;Liver}/D_{NaFluo}=0.199{\pm}0.085$, $D_{PM\;on\;Cecum}/D_{NaFluo}=0.292{\pm}0.151$, $D_{PM\;on\;Kidney}/D_{NaFluo}=0.218{\pm}0.110$). The proposed method allows direct quantitative measurement of the three-dimensional diffusion in local PM in vivo, which was previously inaccessible by peritoneal function test methods such as peritoneal equilibration test (PET) and standardized PM assessment (SPA). f-FRAP is promising for local and dynamic assessments of peritoneal pathophysiology and the mass transport properties of PMs, presumed to be affected by variation of tissue structures over different organs and functional changes of the PM with years of peritoneal dialysis.
Lee Se Yeong;Kim Eun Ok;Seo Hyo Jin;Kim Min Yong;Kim Jong Deog
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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제9권6호
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pp.514-518
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2004
Many methods are used in the measurement of antioxidative capacity. These methods require very complex procedures and pretreatment. Our suggestions for research will be simple and accurate methods for obtaining many kinds of samples, especially colored samples such as natural product extracts for measuring antioxidative capacities. For oxidation-reduction potential (ORP) system value, we examined the relationships between the ORP-pH system and the ORAC, FRAP methods. To evaluate ORP System value, we calculated the absolute slope/intercept from the linear regression of each standard material at different concentrations and ORP-pH system, and compared the correlations with ORAC and FRAP values.
Objectives: FDY003 is a raw material for medicine consisting of a natural product that is expected to have the advantages of low side effects and high efficacy. In this study, we predict the efficacy and the standardization of the drug by method validation of anticipated index compounds and the measurement of antioxidant activity. Methods: FDY003 is prepared by extracting and purifying 70% of ethyl alcohol (EtOH). The method validation of cordycepin and chlorogenic acid was determined by high-performance liquid chromatography-photo diode array (HPLC-PDA) and the content of FDY003 was calculated. In order to monitor the biological activity of FDY003, antioxidant activity was measured by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), 2,2-azino bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS), and ferric-reducing antioxidant power (FRAP). The equivalent values of antioxidants such as trolox, ascorbic acid, gallic acid, and caffeic acid were measured by ABTS and FRAP. Results: Chlorogenic acid and cordycepin were both found suitable for method validation in HPLC and FDY003 containing 9.92±0.50 and 17.97±0.27 ㎍/g, respectively. In DPPH, the electron donating ability (EDA) value of FDY003 was increased in a concentration dependent manner. FDY003 confirmed antioxidant activity by ABTS and FRAP. Conclusions: FDY003 contains certain components including cordycepin and chlorogenic acid and has antioxidant ability by various mechanisms. Therefore, it is expected that FDY003 is capable of various physiological activities including anti-cancer activity.
기능성 옥수수 수염을 가지는 옥수수 계통을 선발하기 위해 다양한 자식계통과 F1을 대상으로 옥수수 수염의 항산화 성분과 항산화능을 측정하였다. 측정결과, 총 페놀 함량, 총 플라보노이드 함량의 경우 각각 980${\sim}$2,420 mg 100 $g^{-1}$, 1,532${\sim}$3,274 mg 100 $g^{-1}$의 범위를 나타내었다. 안토시아닌의 고유영역인 517 nm에서의 흡광도는 0.05에서 0.76까지의 범위를 보였다. 옥수수 수염의 항산화 성분과 DPPH, ABTS, FRAP assay에서 얻어진 항산화능간의 상관관계를 분석한 결과, ABTS와 FRAP assay에서 옥수수 수염의 항산화 활성과 페놀성물질 및 안토시아닌간의 상관계수가 유의하게 높았다. 옥수수 수염의 안토시아닌을 추출하는 용매가 산성이라는 점과 안토시아닌의 DPPH 용액과의 가시영역 파장에서의 간섭을 고려할 때, DPPH 보다는 ABTS assay나 FRAP assay가 더 적합한 항산화능 측정 방법이 될 것이다. 이들 중 특히 ABTS assay는 옥수수 수염의 주요한 기능성 성분인 안토시아닌과 플라보노이드 및 페놀성 물질과 모두 높은 상관성을 보여 옥수수 수염의 종합적인 항산화능을 평가하고 우수 계통을 선발하는데 적합한 측정 방법이 될 것으로 사료된다. 본 실험에서 안토시아닌 함량과 페놀 함량이 높고 ABTS assay와 FRAP assay에서 모두 높은 항산화능을 보여준 S15은 고 기능성 품종 육종 및 옥수수 수염을 이용한 기능성 소재 개발에 이용될 수 있을 것이다. 또한 옥수수 수염의 항산화능 측정에 대한 항산화 실험의 적합성 연구는 우수한 옥수수 수염을 선발하는데 도움이 될 것이다.
Lee, Sang Gil;Wang, Taoran;Vance, Terrence M.;Hurbert, Patrice;Kim, Dae-Ok;Koo, Sung I.;Chun, Ock K.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제27권2호
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pp.388-394
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2017
Although several analytical methods for measuring total antioxidant capacity (TAC) have been applied to biological samples, there were often dissimilar results due to the different principles of methods applied. Thus, this study aimed to validate four conventional analytical methods for measuring plasma TAC, including the ABTS assay, DPPH assay, FRAP assay, and ORAC assay, by comparing with urinary 8-isoprostane concentration. In addition, TAC results were compared with antioxidant enzyme activities including superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase in erythrocyte, and catalase in plasma. Plasma TAC measure by ABTS assay was strongly correlated with the result by FRAP assay. Plasma TAC by FRAP and ORAC assays were negatively correlated with erythrocyte SOD activity. The agreement among the four TAC assay methods and 8-isoprostane was determined using 95% prediction limits of linear regression, expressed as the mean of 8-isoprostane ${\pm}95%$ prediction limits. The ABTS method better agreed with 8-isoprostane than the other methods, demonstrating narrow prediction of limits. Furthermore, only plasma TAC determined by the ABTS assay was inversely correlated with urinary 8-isoprostane (r = -0.35, p < 0.05). In summary, the ABTS assay would be an appropriate method to measure overall plasma antioxidant capacity and predict the body's antioxidant status.
4종의 식용 조류, 참김(Porphyra tenera), 미역(Undaria pinnatifida), 톳(Sargassum fusiforme), 잎파래(Enteromorpha linza)의 에탄올 추출물에 대해 ABTS+ 소거활성, 하이드록시 라디칼(OH), 산화질소(NO), 철 이온 환원력(FRAP)을 조사하였다. ABTS+ 소거활성은 Brand-Williams 등의 방법에 따랐다. 톳의 ABTS+ 소거활성은 8.0 mg/ml 일 때 61.8%로 가장 높은 반면 잎파래는 동일 농도에서 35.7%로 가장 낮았다. 참 김과 미역은 ABTS+에 대해 유사한 활성 저해를 나타내었다. 하이드록시 라디칼의 저해활성은 톳 > 참김 > 미역 > 잎파래 순이었다. 산화질소는 8.0 mg/ml 추출물일 때 톳 > 참김 > 미역 > 잎파래 순이었다. 3.5% 소금과 4종의 조류 추출물을 첨가한 밀가루 반죽을 국수틀에 뽑아낸 후 5분간 끓였을 때 전반적으로 4개의 산화제에 대해 활성저해가 저하되었다. 톳 8.0 mg/ml를 첨가한 국수의 경우 산화질소 활성저해는 27.2%였다. 미역 8.0 mg/ml을 첨가한 국수는 철 이온 환원력이 31.5%였다. 종합적으로 톳 추출물이 ABTS+, OH, NO, FRAP에 대해 활성저해가 가장 높았다. 본 연구 결과 자연적으로 분포하는 참김, 미역, 톳, 파래가 국수의 항산화력 증진에 도움을 준다고 사료되었다.
국내에서 제조 및 시판되고 있는 사과를 비롯한 과일 주스 5종, 포도 주스 10종의 총 페놀 함량과 항산화 활성을 DPPH 방법과 FRAP 방법으로 조사하였다. 시판 과일 주스 중 오렌지의 총 페놀 함량이 114.09 nlg/L로 가장 높게 나타났고, 포도주스 10종은 $57{\sim}205\;mg/L$의 함량으로 제품 별로 다양하게 나타났다. 과일 주스의 DPPH radical 소거 활성은 자몽이 가장 높았으며 사과, 파인애플이 낮았다. 포도주스의 항산화 활성은 제품에 따라 다양하게 나타났는데, 시료별로 GU4, GU5, GU9가 거의 80%정도의 DPPH radical 소거 활성을 보였다. FRAP방법에 의한 항산화 활성 역시 DPPH 라디칼 소거 활성과 유사한 결과이었다. 그리고 DPPH 및 FRAP, 총 페놀 함량 간의 상관계수는 각각 0.97 이상으로 매우 높은 상관성을 나타내었으며, 따라서 총 페놀 함량이 높을수록 과일 주스 제품의 항산화 활성능력이 크게 나타났다.
오죽 잎의 메탄올 조추출물을 극성에 따라 용매분획하고 분획물의 항산화 활성과 항산화 활성, S. aureus 균주에 대한 항균활성을 조사하고 활성성분을 HPLC를 이용하여 정량하였다. 용매분획물 중에서 ethyl acetate 분획물의 DPPH radical 소거 활성, FRAP활성이 모두 가장 강하였으며, 총페놀성 화합물의 함량도 가장 높았다. S. aureus 균주에 대한 항균활성 역시 ethyl acetate 분획물이 모든 시험 농도에서 가장 높은 활성을 보였다. Ethyl acetate 분획물 중에서 caffeic acid, ferulic acid, quercetin, kaempferol 성분을 분리하여 정량하였으며 이 중 kaempferol의 함량이 가장 높았다. 오죽 잎의 ethyl acetate 분획물은 천연 식품보존료로서 활용이 가능할 것으로 보인다.
This study was conducted to find out the optimal solvent extraction method [Distilled water (DW), 70% ethanol, 99% ethanol] of mushrooms, including Pleurotus ostreatus (Jacq.) Que, Pleurotus eryngii and Flammulina velutipes and improve their usability as natural antioxidants. To analyze antioxidant activities in each mushroom, total polyphenol, flavonoid contents, 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) cation radical (ABTS+) and fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) were measured. All mushrooms showed the highest total polyphenol contents in DW mushroom extract (p<0.001). Total flavonoid contents were the highest in P. eryngii and F. velutipes DW and 70% ethanol mushroom extracts (p<0.05). All mushrooms showed the highest activities using DPPH and FRAP assays in the DW extraction method (p<0.001). P. ostreatus (Jacq.) Que and P. eryngii showed the highest ABTS+ radical scavenging activity in the DW extraction method, and F. velutipes showed the highest activity in the 70% ethanol extraction method (p<0.001). As a result of comparing IC50 values of DPPH and ABTS+ radicals and FRAP EC50 values, the DW P. ostreatus (Jacq.) Que extract showed high antioxidant activities (p<0.001). Pearson's correlation between total polyphenol contents and antioxidant activities showed a positive correlation in all mushrooms (p<0.01). Therefore, extraction of the mushrooms with DW can enhance the extraction of effective bioactive substances and antioxidant activity.
Purpose: The purpose of this study was to investigate antioxidant capacity and relating factors including gender, obesity, lifestyle factors, and nutrient intake in chronic stroke patients. Methods: A total of 188 chronic stroke patients who visited a medical center in Seoul participated in the study. A structured questionnaire was used to assess their clinical characteristics and lifestyles. Blood samples were collected for ferric reducing ability of plasma (FRAP) for antioxidant capacity. Dietary intake of the patients were obtained for 2 days by 24 hours recall method. Results: The mean FRAP was $392.0{\mu}mol/L$. According to the hierarchical multiple regression analysis, the factors related to high FRAP were male sex (p=.036), alcohol drinking (p=.013), and calorie intake deficiency (p=.005). Conclusion: We found that antioxidant capacity was related to lifestyle factors including alcohol drinking, and calorie intake in chronic stroke patients. A tailored strategy is needed to increase antioxidant capacity according to gender and lifestyles in the chronic phase of stoke patients.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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