• 미생물학회지
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• 제30권2호
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• pp.108-112
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• 1992

To investigate the expression and the secretion of heterologous proteins in yeast, we constructed an yeast secretion vector and produced a human secretory protein, .alpha.-1-antitrypsin (.alpha.-1-AT), from yeast cells. The secretion vector pGAT8 was constructed by inserting the signal sequence of yeast acid phosphatase gene (PH05) into the .alpha.1-AT expression vector pGAT6 which contained .alpha.-1-AT cDNA fused to GAL10-CYC1 promotor. The .alpha.-1-AT was produced efficiently in the yeast cells transformed with plasmid pGAT8, which was onfirmed both by the .alpha.-1-AT activity assay and by the immunoblot method using .alpha.-1-AT antibody. We also showed the secretion of .alpha.-1-AT into the culture media and into the periplasmic space by immunoblot.

• BMB Reports
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• 제32권5호
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• pp.497-501
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• 1999

Biotinylation of recombinant proteins is a powerful tool for the detection and analysis of proteins of interest in a large variety of assay systems. The recent development of in vivo biotinylation techniques in E. coli has opened new possibilities for the production of site-specifically biotinylated proteins without the need for further manipulation after the isolation of the recombinantly expressed proteins. In the present study, a novel vector set was generated which allows the convenient cloning and expression of proteins of interest fused with an N-terminal in vivo biotinylated thioredoxin (TRX) protein. These vectors were derived from the previously reported pBIOTRX vector into which was incorporated part of the pBluescript II+phagemid multiple cloning site (MCS), amplified by PCR using a pair of sophisticated oligonucleotide primers. The functionality of these novel vectors was examined in this system by recombinant expression of rat transforming growth factor-$\beta$. Western-blot analysis using TRX-specific antibodies or peroxidase-conjugated streptavidin confirmed the successful induction of the fusion protein and the in vivo conjugation of biotin molecules, respectively. The convenience of molecular subcloning provided by the MCS and the effective in vivo biotinylation of proteins of interest makes this novel vector set an interesting alternative for the production of biotinylated proteins.

• Toxicological Research
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• 제20권2호
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• pp.109-116
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• 2004

For the safety evaluation of adenovirus-mediated gene transfer, we investigated differential gene expressions after transfecting adenoviral vector containing p16 tumor suppressor gene (Ad5CMV-p16) into human non-small cell lung cancer cells. In the previous study, we showed adenovirus-mediated $p16^{INK4a}$ gene transfer resulted in significant inhibition of cancer cell growth. We investigated gene expression changes after transfecting Ad5CMV-p16, Ad5CMV (null type, a mock vector) into A549 cells by using cDNA chip and oligonucleotide microarray chip (1200 genes) which carries genes related with signal transduction pathways, cell cycle regulations, oncogenes and tumor suppressor genes. We found that $p16^{INK4a}$ gene transfer down regulated 5 genes (cdc2, cyclin D3, cyclin B, cyclin E, cdk2) among 26 genes involved in cell cycle regulations. Compared with serum-free medium treated cells, Ad5CMV-p16 changed 27 gene expressions, two fold or more on oligonucleotide chip. In addition, Ad5CMV-p16 did not seem to increase the tumorigenicity-related gene expression in A549 cells. Further studies will be needed to investigate the effect of Ad5CMV-p16 on normal human cells and tissues for safety evaluation.

• 한국어병학회지
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• 제8권1호
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• pp.31-36
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• 1995

HcNPV DNA genome 을 제한효소 EcoRI 으로 절단하여 그들의 일부 절편을 pUC8 vector 에 cloning 한 후 E. coli JM 83 세포에 형질 전환시켰다. 이 결과 24 개의 EcoRI 절편중 12 개의 절편이 cloning 되었다. 이들 제조합체중 4 개는 eNP-O, eNP-Q, eNP-R, eNP-S 라 명명하였다. 또한 이들 제조합체의 외래 유전자 발현을 SDS-PAGE 에 의해 단백질 패턴을 분석하였다. 그 결과 제조합체 eNP-O, eNP-Q, eNP-R 에서는 E. coli JM 83 숙주세포의 단백질 밴드와 비교하여 다른 분자량을 갖는 밴드가 나타났다.

• 한국정보통신학회:학술대회논문집
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• 한국정보통신학회 2016년도 추계학술대회
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• pp.923-926
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• 2016

베큘로바이러스 벡터가 cytomegalovirus (CMV) promoter, polyhedron promoter, vesicular stomatitis virus G (VSVG), enhanced green fluorescent protein (EGFP), protein transduction domain (PTD)의 유전자로 재조성 되었다. 이렇게 재조성된 베큘로바이러스 벡터는 다양한 세포주와 조직에 감염시켰다. 우리는 이 재조성된 벡터와 다른 대조 벡터를 비교하여 유전자의 전이와 유전자 발현을 비교하였다. 결론적으로 이 재조성된 베큘로바이러스 벡터의 유전자의 전이와 발현의 효율이 대조 벡터 보다 우수한 효율을 나타내었다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제49권3호
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• pp.298-309
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• 2000

연구배경 : 암 유전자치료에서 각광받고 있는 HSV-tk/GCV 전략의 항암효과에는 다음과 같은 장점들이 거론되고 있다 : 1) GCV 처리에 의한 암세포 직접살상효과 2) HSV-tk 이입된 세포에 의해서 HSV-tk 이입되지 않은 주변세포를 살상하는 bystander effect 3) 생체 내 bystander eff ect로 알려 진 anti-tumor immunity. Retrovirus와 adenovirus sequence를 이용할 경우 몇몇 세포주와 마우스에서 이들이 목적유전자의 발현을 억제할 수 있다는 것이 보고되고 있다. 본 연구에서는 retroviral나 adenoviral vector로 HSV-tk 유전자를 이입한 Lewis 폐암세포주와 폐암 마우스 모델을 통하여 HSV-tk/GCV 전략의 장점을 조사하였고 이 viral vector들 사이의 차이를 비교 조사하였다. 또한 Lewis 폐암세포주에서 butyrate를 처리한 후 HSV-tk 유전자의 발현증가를 관찰하였다. 방법 : Lewis retroviral vector와 adenoviral vector로 HSV-tk 유전자를 이입한 후 butyrate로 HSV-tk 유전자의 발현을 유도하고 Western blotting수행하여 분석하였다. 생체 외에서 HSV-tk/GCV에 의한 세포살상효과를 MTT 검사로 수행하였고 생체 내에서 LLC 나 HSV-tk 이입된 LLC 세포주를 이식하여 종양소멸 및 bystander effect를 조사 하였다. 결과 : 1. Butyrate로 HSV-tk adenovirus로 이입된 LLC에서 증가한 반면 retrovirus로 이입된 LLC에서는 증가하지 않았다. 2. 생체 외 그리고 생체 내에서 viral vector로 HSV-tk를 이입한 종양세포에 GCV 투여하는 것은 종양 세포의 살상에 효과적이었으며 LLC와 LLC-tk 세포주를 혼합한 실험에서 bystander effect도 종양세포의 성장을 억제하는 것으로 관찰되었다. 결론 : 향후 생체 외 그리고 생체 내 실험에서 adenoviral vector를 이용한 유전자 전달에 butyrate를 함께 사용하면 유전자발현을 증진시킬 것으로 사료되며 자살 유전자인 HSV-tk을 종양에 이입하여 GCV을 처리 하는 치료가 폐암유전자치료에 효과가 있을 것으로 생각된다.

• 정보처리학회논문지A
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• 제11A권2호
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• pp.189-194
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• 2004

본 논문은 다량의 고차원 얼굴 표정 모션 데이터를 2차원 공간에 분포시키고, 애니메이터가 이 공간을 항해하면서 원하는 표정들을 실시간 적으로 선택함으로써 얼굴 표정 애니메이션을 생성하는 방법을 기술한다. 본 논문에서는 약 2400여개의 얼굴 표정 프레임을 이용하여 표정공간을 구성하였다. 표정공간의 생성은 임의의 두 표정간의 최단거리의 결정으로 귀결된다. 표정공간은 다양체 공간으로서 이 공간내의 두 점간의 거리는 다음과 같이 근사적으로 표현한다. 임의의 마커간의 거리를 표시하는 거리행렬을 사용하여 각 표정의 상태를 표현하는 표정상태벡터를 정의한 후, 두 표정이 인접해 있으면, 이를 두 표정 간 최단거리(다양체 거리)에 대한 근사치로 간주한다. 그리하여 인접 표정들 간의 인접거리가 결정되면, 이틀 인접거리들을 연결하여 임의의 두 표정 상태간의 최단거리를 구하는데, 이를 위해 Floyd 알고리즘을 이용한다. 다차원 공간인 표정공간을 가시화하기 위해서는 Sammon 매핑을 이용하여 2차원 평면에 투영시켰다. 얼굴 애니메이션은 사용자 인터페이스를 사용하여 애니메이터들이 2차원 공간을 항해하면서 실시간으로 생성한다.

• 농업과학연구
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• 제28권2호
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• pp.92-98
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• 2001

락토페리신은 다양한 생리활성을 나타내는 락토페린(약 80kD)에서 유래된 항균성펩타이드 분획물(5kD)이다. 마우스HC11유선상피세포에서 인체 락토페리신의 발현은 bovine beta-casein을 promotor로 하고 인체 락토페리신 cDNA를 삽입하여 제작한 pBL1-cin발현벡타를 이용하였다. 이 발현벡타를 이용하여 인체 락토페리신 발현여부를 RT-PCR, northern blot, dot blot분석을 통하여 확인하였다. pBL1-cin 발현백타를 HC11세포에 transfection 하여 얻은 RNA를 이용하여 RT-PCR를 한 결과 150bp의 크기로 확인되었고 Northern blot 분석결과는 약 2.3 kb의 크기로 확인되었다. 인체 락토페린 polyclonal항체를 이용하여 dot blot한 결과 인체 락토페리신이 분비됨을 확인하였다.

• Journal of Plant Biology
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• 제37권1호
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• pp.77-83
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• 1994

종자를 자연건조시킨 상태에서 ${\beta}-glucuronidase$ (GUS) 유전자와 hygromycin phosphotransferase (HPT) 유전자를 가진 plasmid DNA 용액을 imbibition시켰다. GUS 유전자의 경우 품종, vector의 종류, imbibition의 온도에 따라 표지유전자의 발현율에 차이가 있었으며 약 30-50%의 transient expression을 나타내었다. Hygromycin B (HmB)배지에서 선별된 개체의 genomic DNA를 뽑아 외부유전자의 존재를 dot 분석을 통하여 확인하였다. Inverse polymerase chain reaction 결과 만들어지는 생성물을 cloning하고 sequencing한 결과 CaMV35S promoter sequence를 찾았다. Hygromycin이 첨가된 배지에서 선별된 개체들에서 GUS 유전자의 primer를 이용하여 PCR를 수행한 결과 20개체 중 18개체에서 GUS 유전자가 안정되게 존재하여 HmB 배지에서 GUS 유전자의 존재비율은 90%였다. 본 연구의 결과로부터 두 개의 유전자를 소유한 pYJH vector system이 고등식물의 형질전환에 유용하게 이용될 수 있음을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제15권4호
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• pp.838-843
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• 2005

Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) is a small secretory protein and a member of the nerve growth factor (NGF) gene family. We cloned the flounder BDNF gene from a flounder brain cDNA library. The nucleotide sequence of the cloned gene showed an open reading frame (ORF) consisting of 810 bp, corresponding to 269 amino acid residues. The tissue distribution of flounder BDNF was determined by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) in brain, embryo, and muscle tissues. To express fBDNF using a eukaryotic expression system, we constructed the vector mpCTV-BDNF containing the fBDNF gene and transformed this vector into Chlorella ellipsoidea. Stable integration of introduced DNA was confirmed by PCR analysis of genomic DNA, and mRNA expression in C. ellipsoidae was confirmed by RT-PCR analysis.