• 한국동물생명공학회지
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• 제34권3호
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• pp.240-246
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• 2019

The aim of this study was to investigate effect of heat stress on expression levels of plasminogen activators (PAs) related mRNAs and proteins, and changes of PAs activity in porcine endometrial explants. The endometrial explants (200 ± 50 mg) were isolated from middle part of uterine horn at follicular phase (Day 19-21) and were pre-incubated in serum-free culture medium at 38.5℃ in 5% CO₂ for 18 h. Then, the tissues were transferred into fresh medium and were cultured at different temperature (38.5, 39.5, 40.5 or 41.5℃) for 24 h. The expression level of urokinase-type PA (uPA), type-1 PA inhibitor (PAI-1), type-2 PAI (PAI-2), and heat shock protein-90 (HSP-90) mRNA were analysis by reverse-transcription PCR and proteins were measured by western blotting. The supernatant were used for measurement of PAs activity. In results, mRNA and protein levels of HSP-90 was higher in 41.5℃ treatment groups than other treatment groups (p < 0.05). The expression of uPA, PAI-1, and PAI-2 mRNA were slightly increased by heat stress, however, there were no significant difference. Heat stress condition suppressed expression of active uPA and PAI-2 proteins (p < 0.05), whereas PAI-1 protein was increased (p < 0.01). Although PAI-1 protein was increased and active uPA was decreased, PAs activity was greatly enhanced by exposure of heat stress (p < 0.05). These results suggest that heat stress condition could change intrauterine microenvironment through regulation of PAs activity and other factors regarding with activation of PAs might be regulate by heat stress. Therefore, more studies regarding with regulatory mechanism of PAs activation are needed.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제34권3호
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• pp.189-195
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• 2007

Helicteres isora is medicinally important plant effective against asthma, diabetes, hypolipidemia, HIV, besides a good source of diosgenin. Seed dormancy and low rate of natural fruit production make this plant a perfect candidate for developing an in vitro method useful for its clonal propagation and further biotechnological developments. This is the first report on in vitro production of this plant. Nodal explants obtained from aseptically germinated seedlings were cultured on MS medium (Murashige and Skoog 1962) fortified with indole-3-acetic acid (IAA) ($0.57-22.83\;{\mu}M$), indole-3-butyric acid (IBA) ($0.41-16.58\;{\mu}M$), 6-benzylaminopurine (BA) ($0.44-17.75\;{\mu}M$) and kinetin (Kin) ($0.46-13.94\;{\mu}M$) either singly or in combinations of IAA + BA, IAA + Kin and BA + Kin. Combinations of cytokinins (BA and Kin) were most suitable for multiple shoot induction and $13.94\;{\mu}M\;Kin\;+\;13.31\;{\mu}M\;BA$ was optimum (79% frequency) associated with high number of microshoots (7.1 shoots per explant) after 20 days of culture. Maximum shoot elongation and proliferation (10 shoots per explant with 4.8 cm average height) was achieved on MS media containing $2.32\;{\mu}M\;Kin\;+\;2.22\;{\mu}M\;BA\;+\;2.85\;{\mu}M\;IAA$. High rooting frequency (70%) was achieved on MS medium (1/2 basal strength) fortified with $4.14\;{\mu}M$ IBA, while activated charcoal showed inhibitory effects on rooting. Hardening was done with 76% survival rate and these plants were growing without any visual defects and morphologically mimicking the naturally growing plants.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제31권1호
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• pp.67-72
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• 2004

고구마의 정단배양에 의한 배발생 캘러스로부터 대량증식 체계가 개발되어져 왔다. 고구마 정단분열조직은 1mg/L 2,4-D가 첨가된 MS배지에서 배양 4주 경에 최적의 배발생 캘러스가 형성되었다. 또한 2,4-D가 첨가된 배지에 casein을 첨가함으로써 고구마 신천미 품종의 배발생 효율을 최고 90%이상으로 2.4-D단독처리보다 현저하게 증가시켰다. 배발생 캘러스로부터 체세포배의 유도는 식물생장조절제가 제거된 MS 기본배지에서 효과적으로 형성되었으며 300∼500mg/L casein을 첨가한 배지에서는 더 높은 형성 빈도와 녹색의 단단한 체세포배가 발달하였다. 한편, 2mm이하의 체세포배로부터 이차 배발생 캘러스 형성 및 체세포배의 발달이 100∼300mg/L casein의 첨가에 의해 증가하였다 배발생 캘러스에서 얻어진 체세포배는 직접 MS기본배지에서 쉽게 각 기관이 형성되었으며, 발근과 shoot를 발달시켜 정상적인 식물체로 하여 토양에 성공적으로 옮겨 심을 수 있었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제31권1호
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• pp.49-53
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• 2004

기공이 잎의 앞뒤 양면에 존재하는 생리ㆍ형태적 특징을 가지고 있는 외래 교잡종인 Peace (Populus koreana ${\times}$ P. trichocarpa)포플러의 효율적인 기내증식법을 개발하고자 액아와 엽육 절편을 이용하여 기내배양을 실시하였다. 몇 종류의 배지 시험을 통해 1/2MS배지를 적정배지로 선정할 수 있었고, 이 배지에 TDZ를 처리하여 multiple shoot 및 adventitious shoot유도 효과를 조사하였다. 절간액아 및 엽육을 절편으로 TDZ의 농도별 처리로 배양 2주 후부터 multiple shoot 및 adventitious shoot가 유도되었으며 절편 및 TDZ처리 농도에 따라 차이를 나타냈다. 액아로부터는 TDZ 처리로 절편당 5-7개의 multiple shoot가 유도된 반면 엽육 절편에서는 2-5개의 adventitious shoot가 유도되었다. 한편 부정아로부터 정상적 인 줄기의 성장에 있어서도 절편에 따른 차이를 나타냈다. 이상의 결과는 저농도의 TDZ의 처리로 peace포플러의 액아 혹은 엽육 절편의 기내배양을 통해 대량증식이 가능함을 보여주는 결과이다.

• 한국약용작물학회지
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• 제15권2호
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• pp.73-81
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• 2007

An efficient regeneration system was developed using leaf, petiole, and internode explants. Highly embryogenic callus was obtained following cultivation on MS basal nutrient supplemented with 2 $mg/{\ell}$ 2,4-D. Globular, heart, torpedo and cotyledon shaped somatic embryo were produced from the surface of embryogenic callus. Direct shoot regeneration without intermediate callus formation has been achieved on MS medium supplemented NAA and BAP. The percentage of response varies with different concentration of auxin and cytokinin treated individually or in combination. The best shoot regeneration response (54.28%) and number of shoot per explant (12.67) were achieved on the medium supplemented with 0.1 $mg/{\ell}$ NAA and 1 $mg/{\ell}$ BAP. The regenerated shoot transformed into young plant when cultured into elongation and root induction medium. More than 90% of in vitro propagated plants could survive when transferred to the greenhouse for acclimation. This optimized regeneration system can be used for rapid shoot proliferation and genetic transformation.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제7권1호
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• pp.67-74
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• 2005

To overcome various disadvantages of conventional cul-ture vessels for micropropagation, a novel disposable vessel, the 'Vitron', made of a multi-layered $OTP^{(R)}$ film and supported by a polypropylene frame, was developed. The film possesses superior properties such as: high light transmittance, low water vapor transmittance and thermal stability and in particular, high gas-permeability. Single nodal explants, which were excised from the multiple shoots derived from shoot-tip culture, were cultured in Vitron and polycarbonate vessels on $3\%$ sugar-containing agar on MS medium and placed at 3000 ppm $CO_2$-enrichment at a low photosynthetic photon flux density (PPFD) ($45{\mu}mol\;m^{-2}\;s^{-1}$). The in vitro and ex vitro growth, and the net photosynthetic rate of in vitro and ex vitro plantlets were significantly enhanced in the Vitron compared to those cultured in a polycarbonate vessel. Explants that were cultured on the same MS medium under low PPFD at various $CO_2$ concentrations were also cultured at 3000 ppm $CO_2$- enrichment at various PPFD: 30, 45, 60, 75 and $90{\mu}mol\;m^{-2}\;s^{-1}$. The best in vitro and ex vitro growth obtained for 3000 ppm $CO_2$-enrichment at $75{\mu}mol\;m^{-2}\;s^{-1}$ PPFD. The novel Vitron vessel, when placed under the two conditions, may replace conventional culture vessels for the successful micropropagation of sweetpotato.

• 식물조직배양학회지
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• 제26권1호
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• pp.59-63
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• 1999

국화 '남전'의 기내배양된 엽절편으로부터 신초 기관형성을 통한 효율적인 식물체 재생 체계를 확립하였다. 엽절편으로부터의 부정지 형성은 생장조절제 조성, 잎의 연령, 광조건, 배양용기당 절편체 수 및 치상방향에 의해 많은 영향을 받는 것으로 나타났다. 효율적인 부정지 형성을 위해서는 MS배지에 생장조절제 BA 0.5 ㎎/L 와 NAA 2.0 ㎎/L를 첨가하는 것이 가장 좋았으며, 엽절편체는 완전히 전개된 신초 상부의 1∼2번째 잎을 채취하여 4면을 절단한 다음 잎의 향축면이 배지에 닿도록 하여 Petri-dish당 8개의 엽절편을 치상하여 배양초기 1주간 암조건에서 배양하다가 명조건으로 옮겨주는 것이 가장 효과적이었다. 이와 같은 조건에서 엽절편체로부터 신초 재생률 100%, 절편체당 신초수 13.7개의 양호한 재생 이 이루어졌다. 재생된 신초는 NAA 0.1 ㎎/L를 첨가한 MS배지에서 성공적으로 발근이 이루어져 소식물체가 얻어졌다. 엽절편체로부터 얻어진 소식물체를 인공토양 (Vermiculite: Perlite=1:1)에서 활착시켜 온실에서 재배하였는데, 외견상 정상적으로 개화하였다.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권1호
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• pp.39-45
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• 2000

전위유전자 표지를 이용한 2배체 야생근연종 감자의 유용 유전자 cloning 체계를 개발하기 위하여 옥수수의 진위유전자 Ac를 조작하여 전위효소는 생산하나 이동은 불가능하도록 제작된 immobilized Ac (iAc)와 자체 이동은 불가능하나 iAc의 작용에 의해 이동이 가능한 Ds를 Agrobacterium tumefaciens를 이용한 형질전환에 의해 2배체 근연종 감자 (Solanum tuberosum Group Phureja) 계통 1.22에 도입하였다. iAc및 Ds 삽입 binary vector들을 보유하는Agrobacterium 계통들로 형질전환 처리된 1.22 기내배양신초의 잎과 줄기 절편의 경우 50mg/L 의 kanamycin이 첨가된 배지에서도 캘러스를 형성하였으며, 잎 절편으로부터 재분화신초가 획득되었다. 형질전환 처리되지 않은 1.22 신초는 100mg/L의 kanamycin이 첨가된 배지에서 전혀 발근이 되지 않았으나, 형질전환 처리에 의해 획득된 재분화 신초는 동일 배지에서 발근이 되었다. iAc와 Ds의 염기배열에 대해 특이적인 oligonucleotide primer들을 이용하여 형질전환 처리 획득 식물들로부터 추출된 DNA에 대한 PCR분석을 실시한 결과, 사용된 primer들의 iAc 와 Ds의 염기배열에 있어서의 위치에 의해 예상되는 크기의 DNA들이 형성되어 iAc 와 Ds의 1.22 genome내 도입이 확인되었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제5권4호
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• pp.215-219
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• 2003

Optimal shoot regeneration and transformation conditions of root type chicory (Cichorium intybus L. var. sativus cv Cesare) were studied. Leaf explants were co-cultured with Agrobacterium tumefaciens, which contained NPTII as a selectable marker and a rice homeotic gene, OsMADS1, that encodes a MADS-domain-containing transcription factor. After one day of co-cultivation, explants were transferred to selection media consisting of MS basal medium supplemented with 0.5 mg/L BAP, 0.1 mg/L IAA, 70 mg/L kanamycin, and 250 mg/L cefotaxime. PCR and Southern blot analyses revealed stable integration of the OsMADS1 gene in the chicory genome. Four-teen original transgenic plants ($T_o$ plants) were acclimatized in the greenhouse and examined for their morphological characters. Most of the transgenic plants showed altered morphologies, such as short, bushy, and early-flowering phenotypes with reduced apical dominance. Additionally, half of the transgenic plants exhibited altered leaf shapes, and 4 out of 14 plants were sterile. These phenotypes were inherited by the next generation. Northern blot analysis confirmed expression of the OsMADS1 gene in both floral and vegetative organs.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권1호
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• pp.19-23
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• 2000

사과 자엽조직으로부터 기내에서 식물체를 재분화시키는 데에 있어서 배양 광조건 및 절편체 극성과의 관계를 살펴보고자 사과‘Fuji’품종의 자엽을 재료로하여 광조건 및 광질을 달리하여 배양하였고, 또한 여러 가지 형태의 절편체를 사용하여 시험을 수행하였다. 배양환경조건 중 광조성에 따른 신초 재분화율을 본 결과 배양 초기 10일간 암배양한 후 명 배양한 처리구에서 가장 높은 재분화율을 나타내었으며, 배양중기의 암처리는 효과가 없었다. 광질별로 비교할 때 전처리로 4일간 암배양한 후 청색광을 조사한 처리구에서 높은 신초 재분화율을 나타내었다. 신초 재분화 유기와 절편체 극성과의 관계를 보면 모든 신초의 형성은 절제된 자엽의 기부 끝쪽에서만 이루어졌다. 즉, 기부쪽 절편체의 말단부 절단면에서보다는 기부쪽 절편체와 말단 절편체의 기부쪽 절단면에서 식물체의 재분화가 이루어짐을 알 수 있었다. 신초 유기는 배축의 기부쪽 자엽 절편체 에서 매우 높게 나타난 반면 자엽의 말단부위에 가까운 곳에서는 현저히 감소하였다.