A new bacterial disease was found on leaves of Kalanchoe blossfeldiana plant grown under vinyl-house condition in winter of 1998 in Taejeon. the first symptoms of the disease are the appearance of the water-soaked and light brown spots. Later they become soft rot with brown color. Causal bacteria were isolated from diseased tissues and the same symptoms as the natural infection were developed on Kalanchoe blossfeldiana leaves by needle-prick inoculation. The causal bacterium was identified Erwinia hervicola by its bacteriological characteristics. This is the first reported of this bacterium to occur on kalanchoe blossfeldiana plant in Korea. Therefore, we proposed to name the diseases as \"bacterial soft rot of Kalanchoe blossfeldiana\" by E. herbiocla.
For the selection of powerful antagonistic bacterium for biological control of Ewinia sp. causing vegetable soft rot, two excellent strains (54, 565) were selected from 1, 196 strains of bacteria which were isolated from rhizospere in vegetable root rot suppressive soil. Selected 2 strains were identified to be a species to Pseudomonas fluorescens S4 and pseudomonas fluorescens S65 (PS65). The highest of inhibitory activity was produced in 523 synthetic broth medium at pH 7.0 and 25t during 3 ethyl-Al-folpet, and the antibiotics such as vancomycin, perucillin and lincomycin, only PS4 was resistant to erythromycin.
For the efficient production of 2, 5-diketo-gluconic acid (2, 5-DKG) by the immobilized cells of Erwinia herbicola, basic characteristics of 2, 5-DKG fermentation were analyzed and a process employing immobilized cell reactor was developed. The immobilized cells appeared to have diffusion limitation, and a maximum production of 2, 5-DKG was accomplished with 2 mm diameters of immobilized beads. Long-term stabilities of the immobilized cells could be maintained by addition of 1.75% (w/v) polypep- tone. Repeated batch fermentations with about 80 mol% of 2, 5-DKG yields were carried out six times in the fluidized bubble column reactors filled with immobilized cells at an aeration rate of 6 vvm.
3종의 빙핵세균 Peudomonas syringae 8401, Pseudomonas fuorescens 8701, Erwinia herbicola 8701의 세포 외막으로부터 아무런 변성제도 사용치 않고 sucrose density gradient centrifugation, Sephacryl gel filtration chromatography, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, non-denaturing buffer를 이용한 PAGE, electroelution, SDS-PAGE를 통해 빙핵활성 단백질을 고도로 정제할 수 있었다. P. suringae와 P. fluorescens에서는 각각 3종류(155 kD, 75 kD, 50 kD)의 빙핵활성 단백질이, E. herbicola에서는 155 kD를 제외한 2종류(75 kD, 50 kD)의 빙핵활성 단백질은 이 연구를 통해 처음 밝혀진 것으로 , 지금까지 보고된 빙핵활성 단백질(150 KD 이상)보다는 훨씬 작은 것이다. 이는 빙핵활성을 나타내는 단백질의 기본단위는 이 실험의 결과만에 의하면 최대 50 kD임을 시사한다. 이들 단백질은 그 유래된 세균의 종류나 또는 단백질 분자량의 크기에 관계없이 모두 -5.5~7.5$^{\circ}C$에서 물을 동결시키는 높은 빙핵활성을 갖고 있었다. 이는 지금까지 보고된 어느 정제단백질의 빙핵활성보다 높은 것이다. 정제된 단백질의 빙핵활성은 trypsin 처리에 의해 상실되었고, pH6~8범위에서는 안정하였으며, pH5이하, pH9이상에서는 활성을 상실하였다. 보존온도에 대한 영향은 3$0^{\circ}C$이상이 되면 점차 활성이 감소하는 경향을 보이다 37$^{\circ}C$이상에서는 활성이 완전히 상실되었다. 금속이온으로서 Hg\ulcorner이온과 SDS에 의해 활성이 상실되었으나 phosphatidylinositol의 첨가에 의해서는 활성이 약간 증가(-1$^{\circ}C$)하였다.
A strain of Erwinia spp. was selected from the soil for the production of bacteriocin to the root rot plant pathogen. Bacteriocin producing gene was not located on plasmid but on chromosome. Genomic library of Erwinia spp. were made by using pLAFR 3 as a vector system for cloning of the gene. It was been cloned and expressed in E. coli DH 5 . Bacteriocin producing colony was composed of pLAFR 3 vector and 3.0 kb EcoRI fragment of Erwinia spp. ehromosomal DNA. The inserted fragment (3.0 kb) was possessed a EcoRI and BarnHI restriction sites.
KANG MIN-JUNG;YOON SANG-HWAL;LEE YOUNG-MI;LEE SOOK-HEE;KIM JU-EUN;JUNG KYUNG-HWA;SHIN YONG-CHUL;KIM SEON-WON
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.15
no.4
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pp.880-886
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2005
Using carotenoid genes of Erwinia herbicola, metabolic engineering was carried out for lycopene production with the pAC-LYCO4 plasmid, which was composed of a chromosomal DNA fragment of E. herbicola containing the crtE, crtB, and crtI genes under the control of the tetracycline promoter and the ipi gene of Haematococcus pluvialis with the trc promoter. Plasmid pAC-LYCm4 was constructed for efficient expression of the four exogenous genes using a strong RBS sequence and the same tetracycline promoter. The optimized expression construct of pAC-LYCm4 increased Iycopene production three times as compared with pAC-LYCO4. pAC-LYCm5 containing ispA behind the four exogenous genes was constructed. There was no significant difference in Iycopene production and cell growth between pAC-LYCm4 and pAC-LYCm5. FPP synthase encoded by ispA was not rate-limiting for Iycopene production. Each gene of crtE, crtB, crtI, and ipi was overexpressed, using pBAD-crtE, pBAD-crtIB, and pBAD-ipiHPI, in addition to their expression from pAC-LYCm4. However, there was no increase oflycopene production with the additional overexpression of each exogenous gene. The four exogenous genes appeared to be not rate-limiting in cells harboring pAC-LYCm4. When pDdxs, pBAD24 containing dxs, was introduced into cells harboring lycopene synthetic plasmids, lycopene production of pAC-LYCO4, pAC-LYCm4, and pAC-LYCm5 was increased by 4.7-, 2.2-, and 2.2-fold, respectively. Lycopene production of pBAD-DXm4 containing crtE, crtB, crtI, ipi, and dxs was 5.2 mg/g dry cell weight with $0.2\%$ arabinose, which was 8.7-fold higher than that of the initial strain with pAC-LYC04. Therefore, the present study showed that proper regulation of a metabolically engineered pathway is important for Iycopene production.
Antagonistic microorganisms from rhizosphere soil were isolated, identified, and applied successfully as the biocontrol agents of damping-off caused by Rhizoctonia spp. Rhizosphere antagonists isolated from rhizosphere soil were identified as Trichoderma viride, T. harzianum, T. hamatum, T. polysporum, Gliocladium sp., Pseudomonas fluorescence, P. stutzeri, P. cepacia, Enterobacter sp., Serratia sp. and Erwinia herbicola. Of these, the most promising ones in vitro were T. virdie, T. harzianum, Gliocladium sp., Serratia sp., P. stutzeri, and P. cepacia. These above six antagonists were efficient in reducing disease incidence to $40{\sim}70%$ when the reselected rhizosphere antagonists preparations were applied to the soil at $10^6$ propagules per gram. Among six antagonists, T. viride was the most promising biocontrol agents against R. solani isolates in soil. The suppressive effect was more evident in steam-sterilized soil than in non-sterilized field soil.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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