In order to reuse inulinase effectively, a method for immobilizing both endo- and exoinulinase to vinylsulfone activated agarose via covalent bond was investigated. The immobilized enzyme preparation had, respectively, 400 U for exoinulinase activity and 80 U for endoinu- Iinase activity per gram gel. A thermal stability by immobilization had increased in the case of exoinulinase. Optimum pHs for two immobilized enzymes were 4.4 to 5.0. Synergistic effect which depends on mixed ratio of two immobilized enzymes was the best when the mixed ratio of endo/exo lay between 0.1 and 0.5, and its activity of the mixed enzyme increased 1.7 times as compared to that of each immobilized enzyme. Inulinase activities of both of the immobilized enzymes did not change during 20 times experimental runs in a batch reactor.
Five different polymer nanofibers, namely, polyaniline nanofiber (PANI), magnetically separable polyaniline nanofiber (PAMP), magnetically separable DEAE cellulose fiber (DEAE), magnetically separable CM cellulose fiber (CM), and polystyrene nanofiber (PSNF), have been used for the immobilization of lactase (E.C. 3.2.1.23). Except for CM and PSNF, three polymers showed great properties. The catalytic activities (kcat) of the free, PANI, PAMP, and magnetic DEAE-cellulose were determined to be 4.0, 2.05, 0.59, and 0.042 mM/min·mg protein, respectively. The lactase immobilized on DEAE, PANI, and PAMP showed improved stability and recyclability. PANI- and PAMP-lactase showed only a 0-3% decrease in activity after 3 months of vigorous shaking conditions (200 rpm) and at room temperature (25℃). PANI-, PAMP-, and DEAE-lactase showed a high percentage of conversion (100%, 47%, and 12%) after a 1 h lactose hydrolysis reaction. The residual activities of PANI-, PAMP-, and DEAE-lactase after 10 times of recycling were 98%, 96%, and 97%, respectively.
Molecular characteristics and improving methods for thermal stability of enzyme have been considered. Intrinsic and extrinsic stabilizing mechanisms are two governing principles for enhanced thermal stability of enzyme in molecular basis. Factors contributing to the former and the latter mechanisms may be involved in the enhanced thermal stability of enzyme complementarily. Also, the methods for improving thermal stability of enzyme which comprise reaction in organic solvent system, chemical modification, immobilization, sequential unfolding and refolding, gene manipulation techniques and enzyme-antibody complexing are reviewed.
Proceedings of the Korean Institute of Electrical and Electronic Material Engineers Conference
/
한국전기전자재료학회 2000년도 춘계학술대회 논문집 전자세라믹스 센서 및 박막재료 반도체재료 일렉트렛트 및 응용기술
/
pp.100-103
/
2000
In the case of immobilizing of glucose oxidase into polypyrrole (PPy) using electrosynthesis, the glucose oxidase (GOx) forms a coordinate bond with the polymers backbone. However, because of intrinsic insulation and net-chain of the enzyme, the charge transfer and mass transport are obstructed during the film growth. Therefore, the film growth is dull. We synthesized the enzyme electrode by electropolymerization added some organic solvent. A formative seeds of film growth is delayed by adding ethanol. The delay is induced by radical transfer between ethanol and pyrrole monomer. The radical transfer shares the contribution of dopant between electrolyte anion and GOx polyanion. This may lead to increase amount of immobilized the enzyme in PPy. For the UV absorption spectra of synthetic solution before synthesis and after, in the case of ethanol added, the optical density was slightly decreased for the GOx peaks. It suggests amount of GOx in the solution was decreased and amount of GOx in the film was increased. We established qualitatively that amount of immobilization can be improved by adding a little ethanol in the synthetic solution. It is due to radical transfer reaction. The radical transfer shares the contribution of dopant between small and fast electrolyte anion and big and slow GOx polyanion.
Park, Se Hyeon;Soetyono, Feilicia;Kim, Hyung Kwoun
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
제27권2호
/
pp.289-296
/
2017
Lysine decarboxylase (CadA) converts ${\small{L}}-lysine$ into cadaverine (1,5-pentanediamine), which is an important platform chemical with many industrial applications. Although there have been many efforts to produce cadaverine through the soluble CadA enzyme or Escherichia coli whole cells overexpressing the CadA enzyme, there have been few reports concerning the immobilization of the CadA enzyme. Here, we have prepared a cross-linked enzyme aggregate (CLEA) of E. coli CadA and performed bioconversion using $CadA^{CLEA}$. $CadA^{free}$ and $CadA^{CLEA}$ were characterized for their enzymatic properties. The optimum temperatures of $CadA^{free}$ and $CadA^{CLEA}$ were $60^{\circ}C$ and $55^{\circ}C$, respectively. The thermostability of $CadA^{CLEA}$ was significantly higher than that of $CadA^{free}$. The optimum pH of both enzymes was 6.0. $CadA^{free}$ could not be recovered after use, whereas $CadA^{CLEA}$ was rapidly recovered and the residual activity was 53% after the $10^{th}$ recycle. These results demonstrate that $CadA^{CLEA}$ can be used as a potential catalyst for efficient production of cadaverine.
The objectives of this study were to develop nano-pore silica particles and to modify its surface for use as an enzyme immobilization matrix. Sol-gel reaction was used to produce silica particles of various nano pore sizes with hydroxyl groups on their surfaces. The surface was modified with aldehyde that was confirmed by fluorescence imaging. Trypsin was covalently immobilized by reductive amination. Surface density of the immobilized trypsin was ca. $350{\mu}g/m^2$, which was approximately 17- and 35-fold higher than those from the surfaces with hydroxyl and amine group, respectively. About 90% of the initial enzyme activity was maintained after the 12th use of repeated use. When compared with the commercial matrices, the nano-pore silica particle was superior in terms of immobilization yield and specific activity. This study suggests the nano porous silica particles can be used as enzyme immobilization matrix for industrial applications.
For continuous production of galactooligosaccharides(GOS), $\beta-galactosidase$ with h1gh transgalactosylation activity from Bacillus sp. A 4442 was Immobilized onto $Diaion^{TM}$ HPA 75(styrene-divinylbenzene resin). The parameters influencing enzyme immobilization were scrutinized in order to maximize immobilization yield while minimizing enzyme inactivation. The optimum conditions turned out to be: Tris buffer concentration 30 mM, pH 8.0, contact time at room temperature 3 hr, and enzyme loading 25 mg protein/g resin. Both the thermal stability and the operational stability of immobilized enzyme were markedly enchanced by the treatment with 0.5% glutaraldehyde as a cross-linker. Under the experimental conditions established, the yield of ${\beta}-galactosidase$ immobilization was 40% or more and the activity of the immobilized enzyme ca. 200 U/g resin. When a packed-bed reactor was employed to continuously convert lactose to GOS, the specific production, which refers to as the amount of commercially valuable GOS produced by a unit amount of immobilized ${\beta}-galactosidase$, was found to be ca. 300 g GOS/g carrier.
A new method for enzyme immobilization has been developed to remove interference by potential interferents in body fluids. Instead of using electron mediators, we chose direct hydrogen peroxide measurement route. Extremely hydrogen peroxide-selective polymer was coated as an inner membrane to exclude interferents and then glucose oxidase(GOx) was entrapped by electropolymerization of inert monomers. There was no solvent casting step throughout the whole fabrication procedure but all membranes on Pt-Ir electrode were formed by electropolymerization. Thus, membrane thickness, quantity of enzyme loaded and can be controlled by electrochemical parameters. As a result, reproducibility of biosensor characteristics becomes remarkably improved in terms of mass production.
The enzymatic properties of soil cellobiohydrolase were examined and compared with those of cellobiohydrolase-active extracts from soil in the forms of enzyme-humic complex and humicfree enzyme, and cellobiohydrolase partially pruified from Aspergillus niger. The pH optima of soil cellobiohydrolase and cellobiohydrolase-humic complex were greater by 1.5-3.0 pH units than those of cellobiohydrolase in humic-free extract and from A. niger. Soil cellobiohydrolase and cellobiohydrolase-humic complex were remarkably resistant to thermal denaturation and proteolysis. These results confirm that cellobiohydrolase in soil is atable in conditions which rapidly inactivate microbial cellobiohydrolase and that its stability is due to the immobilization of this enzyme by association with humic substances. The Michaelis-Menten constants (Km) for soil, cellobiohydrolase-humic complex, humic free extract and cellobiohydrolase from A. niger were 22.1mg/ml, 11.3mg/ml, 10.6mg/ml and 4.5 mg/ml of Avicel, respectively.
Han, Nam-Soo;Kang, Seung-Yeon;Lee, Soo-Bok;Robyt, John F.
Food Science and Biotechnology
/
제14권3호
/
pp.317-322
/
2005
A simple and convenient method of immobilizing dextransucrase via an affinity interaction is described, along with the use of this system to synthesize leucrose. Dextransucrase was produced in sucrose-free medium by fermenting a constitutive mutant of Leuconostoc mesenteroides NRRL B-512F and was separated using an ultrafiltration membrane. The purified enzyme was free of dextran polymer, which previously was always found with the sucrose-induced enzyme. Therefore, it was possible to immobilize the enzyme on dextran-based resins using an affinity interaction. Sephadex G-200 was the best resin for immobilizing the dextransucrase and gave a fast flow rate through the packed column. The immobilized dextransucrase retained more than 80% of its specific activity after immobilization ($K_m\;=\;18.1\;mM$ and $k_{cat}\;=\;450\;sec^{-1}$ vs. 13.1 mM and $640\;sec^{-1}$, respectively, for the free enzyme). The immobilized dextransucrase showed improved stability over a pH range of 4.0 to 6.5 and at moderately high temperatures over $40^{\circ}C$. When immobilized dextransucrase was used to synthesize leucrose via the transfer reaction with sucrose and fructose, about 74% of the sucrose was converted into leucrose after one day, and the half-life of the enzyme activity was 15 days. Regeneration of the resin by supplementation with dextransucrase enabled the recovery of the initial activity of the system, but both the reaction and the flow rate were lower, probably owing to the accumulation of dextran inside the resin.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.