• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권4호
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• pp.310-315
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• 1988

Intrasporangium속 방선균의 chorismate mutase 는 CM I과 CMII의 두 isoenzyme으로 존재하며 최적 pH는 각각 6.5와 8.0이며 최적온도는 다같이 45$^{\circ}C$ 부근이었다. 활성화에너지는 CM I이 14.7 Kcal/mole과 CMII가 10.8kcal/mole로 계산되었으며 각각 1.35mM과 1.22mM의 Km 값을 나타냈다. 그러나 금속이온의 효과에 대해 두 효소가 뚜렷한 차이를 보여 $Ba^{++}$과 $Mg^{++}$이 CM I의 활성은 약간 저해하는데 반해 CMII는 약 7% 활성화시켰다. 두 효소는 비교적 넓은 범위의 pH에서 안정하며 4$^{\circ}C$에서 10일간 저장했을 때 CM I이 75%, CMII 가 69%의 잔여 효소활성을 보였고 0.1mM EDTA 또는 0.1mM CoCl$_2$의 첨가는 CMII만을 약간 안정화시키는 효과를 보였고 CoCl$_2$는 CM I에 대해 오히려 불활성화 효과를 나타냈다. 열에 대해서는 불안정했으며 특히 CMII가 더욱 불안정하였다. CM I과 CMII는 pCMB에 의해 현저한 활성저해를 받았으며 저해정도는 두 효소가 큰 차이를 보여 catalytic site의 구조적 차이를 암시해주고 있다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권6호
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• pp.468-475
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• 1988

고초균 (Bacillus subtilis)의 cytidine/2'deoxycytidine deaminase (EC 3.5.4.5)를 로드하는 cdd 유전자를 cdd 결손변이주 B. subtilis ED4O에서 발현시켰다. 이 cdd 유전자는 Bacillus의 λD69 유전자은행으로부터 처음 클로닝된 것으로서 B. subtilis-Escherichia coli 의 shuttle vector pGB 215-110ΔB의 EcoRl/Pvul 부위에 삽입시켰다. 형질전환된 ED4O는 야생주에 비해 3700unit의 강한 cdd 활성을 나타내었으며 이 클론된 백터 pSO100 을 E. coli에서 발현시키면 B. subtilis 비해 2배의 강한 활성을 나타내었다. 겔 여과로 부분정제한 본 효소의 Km치는 1.88$\times$$10^{-4}$M이었으며 Vmax=11.1 $\mu$mol/min/mg 단백이었다. 이 효소는 0.1M mercaptoethanol과 수은에 의해 완전저해되었으며 p-chloromercurybenzoic acid에 대해 Ki=5$\mu$M로 나타났다. 본 효소의 활성상실은 monomer에 함유된 6개의 cysteine 잔기의 일부가 활성단으로 작용하는 과정이 저해되었거나 tetramer로서의 회합과정이 저해되었기 때문인 것으로 추측되었다.

• 한국미생물학회:학술대회논문집
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• 한국미생물학회 1991년도 춘계학술발표대회 논문집
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• pp.225-236
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• 1991

The genes encoding the thermostable $\alpha$-amylase and maltogenic amylase from Bacillus lichenciformis were cloned and expressed in E. coli. The recombinant plasmid pTA322 was found to contain a 3.1kb EcoRI genomic DNA fragment of the thermostable $\alpha$-amylase. The cloned $\alpha$-amylase was compared with the B. licheniformis native $\alpha$-amylase. Both $\alpha$-amylase have the same optimal temperature of $70^{\circ}C$ and are stable in the pH range of 6 and 9. The complete nucleotide sequences of the thermostable $\alpha$-amylase gene were determined. It was composed of one open reading rame of 1,536 bp. Start and stop codons are ATG and TAG. From the amino acid sequence deduced from the nucleotide sequence, the cloned thermostable $\alpha$-amylase is composed of 483 amino acid residues and its molecular weight is 55,200 daltons. The content of guanine and cytosine is $47.46mol\%$ and that of third base codon was $53_41mol\%$. The recombinant plasmid, pIJ322 encoding the maltogenic amylase contains a 3.5kb EcoRI-BamHI genomic DNA fragment. The optimal reaction temperature and pH of the maltogenci amylase were $50^{\circ}C$ and 7, respectively. The maltogenic amylase was capable of hydrolysing pullulan, starch and cyclodextrin to produce maltose from starch and panose from pullulan. The maltogenic amylase also showed the transferring activity. The maltogenic amylase gene is composed of one open reading frame of 1,734bp. Start and stop codons are ATG and ATG. At 2bp upstream from start codon, the nucleotide sequence AAAGGGGGAA seems to be the ribosome-binding site(RBS, Shine-Dalgarno sequence). A putative promoter(-35 and-10 regions) was found to be GTTAACA and TGATAAT. From deduced amino acid sequence from the nucleotide srquence, this enzyme was comosed of 578 amino acid residues and its molecular weight was 77,233 daltons. The content of guanine and cytosine was $48.1mol\%$. The new recombinant plasmid, pTMA322 constructed by inserting the thermostable $\alpha$-amylase gene in the EcoRI site of pIJ322 to produce both the thermostable $\alpha$-amylase and the maltogenic amylase were expressed in the E. coli. The two enzymes expressed from E. coli containing pTMA322 was reacted with the $15\%$ starch slurry at $40^{\circ}C$ for 24hours. The distribution of the branched oligosaccharides produced by the single-step process was of the ratio 50 : 50 between small oligosaccharide up DP3 and large oligosaccharide above DP3.

• Restorative Dentistry and Endodontics
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• 제20권1호
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• pp.193-213
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• 1995

The purpose of this study is to investigate a possible contribution of nonspecific esterases, which occur in the oral cavity, to the degradation of ester bonds in polymethacrylates. One of the problems connected with the use of composite resins for restorations is their inadequate resistance to wear. It has been shown that methacrylate hydrolysis can be catalyzed by enzymes and that a carboxylic hydrolase (porcine liver esterase) catalyzed the hydrolysis of several mono - and dimethacrylates. The softening effect on a BISGMA/TEGDMA polymer induced by hydrolase will accelerate the in vivo wear of the polymer. Porcine liver esterase (EC 3.1.1.1) 3.2 mol/L $(NH_4)_2$ $SO_4$ was obtained from Sigma Chemical Company. The esterase activity of one unit is defined as the amount of enzyme capable of hydrolyzing $l{\mu}mol$ ethyl butyrate per min at pH 8.0 AT $25^{\circ}C$. Phosphate buffer, 10mmol/L, pH 7.0, was made by adjustment of a solution of $Na_2HPO_4$ with $H_3PO_4$. Composite resins used in this study are Silux Plus, Z-100, Durafil VS, and Prisma APH. Cylindrical specimens, 14mm in diameter and 3mm thick, of Silux Plus, Z-100, Durafil VS, Prisma APH were polymerized under the celluloid strip. 60 specimens were divided into 2 groups. One group was emersed only in buffer solution, the other group was emersed in buffer and enzyme solution. Silux Plus and Z-100 were divided into 2 subgroups, one subgroup was cured only Visilux 2. And the other subgroup was cured Visilux 2 and Triaid II. Thereafter, specimens were polished to its best achievable surface according to manufacture's directions. The Vickers hardness of the specimens was measured after 1, 2, 4, 7, 9, 15, 50 days. The solutions were changed after each measurement. Composite resin surfaces were evaluated for the surface roughness with profilometer (${\alpha}$-step 200, Tencor instruments, USA) after 1 and 50 days. And then surfaces of specimens were pictured with stereosopy after 1 and 50 days. The results were as follows. 1. The surface hardness of Silux plus, durafil VS, and Prisma APH were decreased with time. But, the surface hardness of Z-100 was not decreased. 2. The surface hardness of all composite resins was decreased by esterase. 3. Composite resins, which were light-cured by Visilux 2 and concomitantly baked by oven, showed more hardened surface than light-cured by Visilux 2 only. 4. Significant surface changes were occured in Silux plus after esterase treatment.

• 한국식품영양과학회지
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• 제30권2호
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• pp.228-233
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• 2001

당근의 가열처리 시 발생하는 경도 감소를 줄이기를 위해 당근에 존재하는 pectmesterase(PE)와 polygalacturonase(PG)의 특성을 조사하고 실제 당근에서의 예비 열처리 조건을 구하여 비교하고자 하였다. 당근에서 추룰한 초효소의 최적 pH는 PE가 7.0, PG가 5.0이었으며, 최적 NaCl은 PE가 0.15 M, PG가 0.10 M이었다. PE의 최적온도는 $50^{\circ}C$. PG가 $70^{\circ}C$이었으며 PE와 PG의 Z-value는 각각 $8.76^{\circ}C과\;6.67^{\circ}C$로 나타나 PE가 PG보다 활성 최적온도는 낮으나 열에는 안정적인 것을 알 수 있었다. 당근의 예비 열처리 조건은 먼저 예비열처리 온도($50~70^{\circ}C$)와 시간(5~60 min)별로 달리 처리한 후 $100^{\circ}C$에서 10 min 동안 가열하여 경도변화를 알아본 결과 $55^{\circ}C$로 60 min 동안 열처리한 것이 가장 높은 경도를 나타내었다. 따라서, $55^{\circ}C$(60 min)로 고정한 후 경도에 영향을 미치는 $CaCl_2$, NaCl, pH의 효과를 조사하였다. 그 결과 당근의 예비열처리 조건은 0.03 M $CaCl_2$, NaCl, pH 7.0으로 $55^{\circ}C$에서 60 min 동안 열처리하는 것이 최적으로 나타났다. 본 결과의 당근 예비열처리 조건은 PE의 활성과 PG의 억제조건에 상당히 일치하였다.

• Toxicological Research
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• 제34권3호
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• pp.231-239
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• 2018

Bisphenol A, an everywhere chemical, is applied as a plasticizer in polycarbonate plastics, which often used in our everyday products and in epoxy resins as protective coatings and linings for food and beverage cans for decades. Human exposure to BPA may lead to adverse effects by interfering with oestrogen receptors. Our present study was conducted to investigate the protective effects of selenium (Se) and vitamin E (Vit E) on BPA-induced damage in the liver of male rats. Animals were randomly divided into four groups: the first group received olive oil and served as control. The second group received both (Se + Vit E) (0.5 mg/kg diet; 100 mg/kg of diet). The third one treated orally by (10 mg/kg b.w.) of BPA. The last group received (Se + Vit E) (0.5 mg/kg diet; 100 mg/kg of diet) concomitantly with (10 mg/kg b.w.) BPA. Exposure to BPA for three weeks engendered a hepatic disorder. An increased AST and ALT enzymatic activity was noticed in BPA-treated group as compared to other groups. Furthermore, a change in glucose, cholesterol, LDL-C, HDL-C, albumin, and bilirubin level was remarkable. Moreover, exposure to BPA increased malondialdehyde levels while reduced gluthatione content was decreased in the liver homogenate. A decrease in glutathione peroxidase, glutathione s-transferase and catalase activities was observed in the same group. Administration of selenium and vitamin E through the diet in BPA treated rats ameliorated the biochemical parameters cited above. In addition, an improvement in activities of liver enzymes was recorded. The histological findings confirmed the biochemical results. The model of this study that we employed characterized the relationships between BPA-induced hepatotoxicity and its alleviation by natural antioxidants like selenium and vitamin E.

• 생명과학회지
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• 제21권6호
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• pp.893-900
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• 2011

Prostatic acid phosphatase (PAP)는 전립선 암의 진단에 널리 사용되는 표지자로서 1935년 처음으로 동정되었고 인체 전립선에 가장 많이 존재하는 탈 인산화효소이다. PAP는 prostate epithelial cells에서 합성되는 전립선 특이적인 효소로서, 산성 환경에서 효소활성을 띠는 acid phosphatase 그룹에 속한다. PAP는 전립선액에 풍부히 존재하여 수정, 정자부족증, 만성통증의 감소에 관여한다. 그러나 가장 눈에 띄는 기능은 ERK1/2와 MAPK 경로에 관계된 HER-2와 PI3P의 탈 인산화를 유도하여 세포 성장 신호를 억제하고 전립선 암의 억제자로 작용하는 것이다. 최근 PAP DNA 백신을 이용하는 임상시험이 현재 진행 중이고, PAP를 이용한 immunotherapy를 통해 전립선 암을 치료하는 방법이 FDA의 승인을 받아 시행되고 있다. 이러한 PAP의 임상적 중요성에도 불구하고 현재까지 PAP의 분자적 조절기작에 대한 이해는 제한적이라 PAP에 대한 많은 연구가 필요한 실정이다. PAP는 NF-${\kappa}B$, TNF-${\alpha}$, IL-1 및 androgen과 androgen receptor에 의하여 promoter region이 조절된다고 알려졌다. 본 총설에서는 현재까지 밝혀진 PAP 유전자 및 단백질의 특징들과 더불어 전립선 암에서의 PAP의 기능, 발현 조절, 역할들을 종합하였다.

• Journal of the Korean Wood Science and Technology
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• 제35권6호
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• pp.166-174
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• 2007

효소 전처리에 의한 침엽수 Kraft 펄프의 표백 효율을 살펴보고자 Trichoderma reesei에서 2종류의 xylanase를 cloning하였다. Cloning된 xylanasel과 xylanaseII 유전자를 E. coli에서 발현시켜 29kDa의 재조합 단백질인 XYNI과 29.5 kDa의 XYNII를 생한하여 정제하였고, Rumicoccus albus로부터 cloning되어 변형된 50kDa의 EGIV-CBDII를 동일한 방법으로 cellulase를 생산 정제하였다. 정제된 효소들을 각각 xylan과 CMC를 기질로하여 효소 활성도를 측정한 결과 XYNI이 XYNII보다 효소활성이 더 높았으며, EFIV-CBDII 또한 높은 활성을 나타내었다. 이렇게 생산 정제된 xylanase와 cellulase를 이용하여 침엽수 Kraft 펄프를 대상으로 연속처리에 의한 biobleaching test를 실시하였다. XYNI을 처리하였을 때 백색도는 29.9% 증가하였고, XYNI를 1차 처리한 후 2차로 EGIV-CBDII를 처리하였을 때 백색도는 1차 처리구에 비해 9.1% 증가하였다. 그 후 3차 XYNI를 처리 하였을 때 2차에 비해 7.3%의 bleaching의 효과를 볼 수 있었다. 또한 Kappa No.는 처리단계에 따라 8.1, 4.6 그리고 3.2% 각각 지속적으로 감소하였다. 이 실험결과를 통해 재조합 효소 XYNI과 EGIV-CBDII를 함께 이용하여 Karft 펄프에 대한 biobleaching의 상승효과를 확인하였다.

• 대한유전성대사질환학회지
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• 제13권1호
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• pp.37-42
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• 2013

Gaucher disease is a lysosomal storage disease caused by deficiency of glucocerebrosidase (GBA). This condition is characterized by accumulation of glucocerebrosidase in liver, spleen, lung, skeletal system, and central nervous system. Gaucher disease is the prototype of disease in which efficacy of enzyme replacement therapy has been established. However, because recombinant enzyme is not able to enter the central nervous system, its efficacy is limited to the non-neurological manifestations of Gaucher disease. Importantly, approximately a half of Korean patients with Gaucher disease suffer from neurological manifestations. In addition, Korean Gaucher disease patients exhibit distinct mutation spectrum from those in other populations. Common mutations in Korean patients with Gaucher disease are also associated with neurological phenotype. Therefore, therapeutic strategies tailored to Korean patients were necessary. Interestingly, a chemical chaperone, ambroxol, has been known to increase residual enzymatic activities of the select mutant GBAs encoded by mutations prevalent in Korean patients. One promising aspect of this drug is that it can cross blood-brain barrier, and enhance the enzyme activity in the brain. In vitro study suggested this chemical chaperone as one of new therapeutic agents in Gaucher disease, and a well-designed human trial is required to confirm its efficacy.

• 대한유전성대사질환학회지
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• 제18권1호
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• pp.23-29
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• 2018

Carbamoyl phosphate synthetase 1 (CPS1) 결핍은 고암모니아혈증을 특징으로 하는 요소 회로 이상 질환 중 하나로 상염색체 열성으로 유전되며 2q35 염색체에 존재하는 CPS1 유전자 변이로 인해 발생된다. CPS1 결핍은 발병 연령에 따라 신생아형과 신생아기 이후에 발생하는 지연형으로 나뉜다. CPS1 결핍의 임상 양상의 중증도는 주로 효소 활성 결핍의 정도에 따라 다를 수 있으며, 고암모니아혈증으로 신경 기능 이상 및 장애를 초래하게 된다. 본 증례는 생후 25일 즈음 구토, 의식 저하, 고암모니아혈증을 보여 시행한 생화학적, 분자유전학적 검사(targeted gene panel sequencing)를 통해 CPS1 결핍을 진단하였다. 수액 치료, 관장, 소듐 벤조에이트 치료로 고암모니아혈증 및 임상 양상 호전 보여 응급 투석을 시행하지 않았으며 생후 17개월까지 관찰한 결과 고암모니아혈증의 재발없이 성장과 발달 및 신경학적 예후가 좋음을 보고하는 바이다.