본 연구는 누에 숙잠 혈림프의 멜라닌 생성 억제 효과에 대해 알아보기 위해 수행되었다. 실샘을 제거한 누에 숙잠에서 혈림프를 정제하였고, 이의 항산화, 멜라닌 생성 억제, 티로시나아제 활성 억제 효과 여부를 실험한 결과는 다음과 같다. 1. 숙잠의 실샘을 제거한 후, 나머지 누에조직을 분쇄하여 원심분리 후 여과하였던 기존의 방식에서 연속식 원심분리로 정제 방법을 개선한 결과, 수율은 53% 증가하였고 정제기간은 5일 단축되었다. 2. 누에 숙잠 혈림프의 DPPH 자유라디칼 소거능을 측정한 결과 비타민 C 보다는 효과가 떨어졌지만 세리신 단일 물질보다 높은 효과를 나타내었다. 3. 숙잠 혈림프 단백질을 음이온 교환 크로마토그래피로 분리하여 활성산소 억제 효과를 측정한 결과, 70 kDa과 30 kDa 단백질이 모두 포함되어 있는 혈림프 단백질(상등액)이 대조군보다 2배, 70 kDa 단백질이 30 kDa 단백질에 비해 약 1.7배 활성산소 억제 효과를 나타냄을 확인하였다. 4. 누에 숙잠 혈림프의 멜라닌 생성 억제 효과는 미백화장품 소재로 널리 사용되는 상백피와 알부틴보다 각각 9.15%, 11.56% 더 우수함을 확인하였다(혈림프 1% 농도 기준). 5. 티로시나아제 활성 억제 효과는 대조인 상백피보다 누에 숙잠 혈림프의 티로시나아제 활성 억제 효과가 우수하였으나 단일 물질인 알부틴보다는 억제 효과가 떨어지는 결과를 나타내었다. 하지만 정제 혈림프 농도 $450{\mu}g/m{\ell}$에서는 90%에 이르는 티로시나아제 활성 억제 효과를 확인하였다.
To clarify the effect of anti-juvenile hormone analogue (AJH) on the larval ecdysis by feeding at early stage of the 4th instar, the total amount of protein and activity of chitinolytic enzymes in the integument of Bombyx mori were analyzed, PAGE pattern of the protein was observed and the morphological changes of integument during molting period were also observed and the morphological changes of integument during molting period were also observed by means of TEM. The total amount of protein was greatly increased in premolting, then reached maximum level just before ecdysis, and rapidly decreased after the larval ecdysis in the control, while in the AJH treatment, increased 12 hr later than the control and its maximum was only 82.6% of the control. Two specific proteins, which were presumed as the protein originated from endocuticle, also appeared 12 hr later than the control and were maintained to 132 hr after AJH treatment from the aspects of the Native- and SDS-PAGE patterns, although those of the control disappeared instantly after ecdysis. Chitinase and $\beta$-N-acetylglucosaminidase activities were also suppressed and delayed by AJH treatment. Furthermore, it was observed that the apolysis took place 12 hr later than the control but new epicuticle was not formed at least until 132 hr after AJH treatment. From these results, it is suggested that the larval molting process of silkworm develops 12 hr later than the control but new epicuticle was not formed at least until 132 hr after AJH treatment. From these results, it is suggested that the larval molting process of silkworm develops 12 hr later than the control by AJH treatment but no further processing takes place just after apolysis.
Trophic interactions of introduced biocontrol fungi with soil animals can be a key determinant in the fungal proliferation and activity. This study investigated the trophic interaction of an introduced biocontrol fungus with soil nematodes. The biocontrol fungus Trichoderma harzianum ThzID1-M3 and the fungivorous nematode Aphelenchoides sp. (10 per gram of soil) were added to nonsterile soil, and microbial populations were monitored for 40 days. Similar results were obtained when the experiment was duplicated. ThzID1-M3 stimulated the population growth of indigenous nematodes (p < 0.05), regardless of whether Aphelenchoides sp. was added. Without ThzID1-M3, indigenous nematodes did not increase in number and the added Aphelenchoides sp. nematodes almost disappeared by day 10. With ThzID1-M3, population growth of nematodes was rapid between 5 and 10 days after treatment. ThzID1-M3 biomass peaked on day 5, dropped at day 10, and then almost disappeared at day 20, which was not influenced by the addition of nematodes. In contrast, a large quantity of ThzID1-M3 hyphae were present in a heat-treated soil in which nematodes were eliminated. Total fungal biomass in all treatments peaked on day 5 and subsequently decreased. Addition of nematodes increased the total fungal biomass (p < 0.05), but ThzID1-M3 addition did not affect the fungal biomass. Hyphae of total fungi when homogenously distributed did not support the nematode population growth; however, hyphae of the introduced fungus did when densely localized. The results suggest that soil fungivorous nematodes are an important constraint on the hyphal proliferation of fungal agents introduced into natural soils.
전국 토양, 앙장 농가, 저곡 창고, 시설 원예 단지, 과수원, 산, 밭 등에서 분리한 토양과 먼지 등의 시료로부터 거세미나방속 해충에 강한 독성을 보이는 7개 균주를 분류하였다. 이들을 각각 STB-1에서 STB-7까지 명명하였으며 모두 약 130kDA의 내독소 단백질을 형성하였다. 편모항원성 검정 결과 STB-1, STB-2는 B. thuringiensis subsp. kurstaki와 STB-3, STB-4, STB-5는 subsp. kenyae와 반응하였으며 STB-6, STB-7은 기존의 편모항체와 반응하지 않았다. PCR로 유전자형을 분석한 결과 STB-1은 B. thuringiensis subsp. kurastaki에서는 보고되지 않은 cryIE 유전자를 가지고 있으며 STB-5는 subsp. kenyae와는 다른 유전자형을 보였다. 기존의 편모항체와 반응을 보이지 않은 STB-6와 STB-7은 cryIA(a), cryIA(b), cryIC, cryII를 가지고 있었다.
장려뽕 16 품종에 대한 뽕잎과 오디의 항산화능을 시기별로 채취하여 비교분석 하였다. 항산화능 측정장치(munilum L-100, ABCD GmbH) 및 ARAW-KIT(antiradical ability of water-soluble substance)를 사용하였으며, ascorbic acid를 표준물질로 사용하여 calibration curve를 작성하였다. 시료의 항산화능과 분석에 소요되는 전처리 시간을 고려하여 80% MeOH, 30 sec. vortex mixing 방법을 기준 전처리 방법으로 하였다. 16품종 전체의 뽕잎에 대한 항산화능을 분석한 결과 5개엽기의 어린 뽕잎의 항산화능은 3303.4 nmol로 높았으며, 오디가 착색되기 직전 3708.0 nmol으로 최대 값을 나타낸 후 시기가 경과함에 따라 점차 감소 및 하벌 후 점차 증가 하다가 뽕잎이 경화되기 직전 춘기 어린 잎 정도의 항산화능을 유지하는 것으로 나타났다. 항산화능이 높은 뽕잎을 이용하기 위해서는 5월 하순에 채취하는 것이 수율도 높아 경제성이 있을 것으로 판단되며, 생과 또는 가공식품의 원료로 사용하기 위해 오디를 수확한 후 남은 뽕잎의 이용도 충분히 가능하므로 이를 활용하기 위해서는 하벌 전에 뽕잎의 수확 작업이 이루어지도록 해야 할 것이다. 뽕잎 수확 후 저장하는 방법보다 시기에 따른 뽕잎 자체의 성숙 정도가 뽕잎의 항산화능을 결정하는 것으로 판단된다.
인공사료사육에 있어서 핵다각체바이러스에 대한 품종별 저항성을 검토하기 위해서 7개의 장려품종을 공시해서 그 죽은 누에 비율을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 인공사료에 기른 누에에 핵다각체를 접종했을 때 바이러스의 $10^{7}$ /$m\ell$의 높은 농도를 적용할 경우에는 품종, 령기에 관계없이 대부분 거의 발병하는 높은 치사율을 나타냈으며 $10^{6}$/$m\ell$의 경우도 같은 경향으로 높은 발병률을 보였다. 2. 바이러스의 농도가 $10^{5}$/$m\ell$~$10^3$/$m\ell$의 낮은 농도에서는 바이러스에 대한 감수성에 있어서 품종간에 차이를 보여주었다. 잠111$\times$잠112와 한생1호$\times$한생2호는 각령기의 처리에 있어서 다른 품종보다 치사율이 낮음으로써 낮은 감수성을 보여주었다. 3. 어느 품종에 있어서나 일반적으로 2령때가 3령때보다 바이러스에 대한 감수성이 높았다.다.
Nosema bombycis의 경란전염은 집누에의 경우 난내 및 난면의 두가지 경로가 존재하는 것으로 입증되었다. 난내에서 병원체가 존재하는 부위가 난각 조직을 제외한 장액막, 난황, 배자 등이였다. 난내에 침입한 병원체는 난의 발육과 동조적으로 발육 증식하므로써 오랜 시일이 경과하여도 불활화 되지 않는 동시에 감염난의 치사를 줄일 수 있으며, 병원체가 안전하고 확실하게 차대의 유충으로 전달되므로난내경로는 경난전염율이 높은 것으로 밝혀졌다. 난면경로는 감염 모체의 아충에 의한 난 표면의 오염이 주 원인으로서, N. bombycis 감염아는 100%가 아뇨에 병원체가 검출되며, 4.6$\pm$0.24)X106/ml의 포자를 함유하는 것으로 밝혀졌다. 난 표면에 부착된 병원포자는 비휴면란에 도말하였을 때, 10일 정도 경과 후 부화된 유충의 54.5%가 감염되었으나, 월년 보호하거나 침산한 경우 차대잠의 감염은 인정되지 않았다. 따라서, 집누에 월년란의 경우 경란전염에 의한 질병의 만연에는 난내경로가 주요한 것으로 결론지었다.
뽕나무 추기벌채 후 피해가 큰 가지썩음 증상에서 빙핵활성세균의 분리, 생물검정 및 동정과 밀도를 조사하여 본 결과 1. 총 36개의 분리세균 중 -1$0^{\circ}C$ 이상 온도에서 동결이 되는 세균은 12개였으며, -5$^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 2개균주였다. 2. 공시세균의 생물검정에 있어서 토마토와 옥수수에서는 -1$0^{\circ}C$ 이상의 동결균주에서는 일정한 경향을 볼 수 없었으나 뽕나무에서는 -5$^{\circ}C$ 이상에서 동결이 되는 세균에서만 육안으로 확실한 동상해피해를 볼 수 있었다. 3. 뽕나무, 옥수수, 토마토유묘에 피해를 주며 -5$^{\circ}C$ 이상에서 영핵활성이 있는 균주 SE9316, SE9338을 동정해 본 결과 gram음성, 간상형, 운동성이 있고 극모를 가지고 호기성균인 Pseudomonas syringae로 동정되었다. 4. 5cm, 10cm 이병뽕나무가지에서 Pseudomonas 속 영핵활성세균의 밀도는 2월과 4월이 가장 높았고, 5월에는 감소하는 경향이었으며 병반에서 멀어질수록 밀도는 감소하였다. 또한 그 밀도는 105cfu/g 이상으로서 동상해를 유발시키기에 충분한 밀도였다.
This study was designed to investigate the effects of silk fibroin (Mw 500) powder (SFP) on lipofuscin, acetylcholine (ACh) and its related enzyme activities in brain of rats. Sprague-Dawley (SD) male rats (160$\pm$10 g) were fed basic diet (control group), and experimental diets (SFP-2.5 and SFp-5.0 groups) added 2.5 and 5.0 g/kg BW/day for 6 weeks. In case of liver membranes, lipofuscin (LF) levels resulted in a considerable decreases (11.5% and 13.8%, respectively) in SFP-2.5 and SFP-5.0 groups compared with control group. But in case of brain as the most sensitive organ, LF levels were remarkably inhibited about 18.3% and 21.7% in SFP-2.5 and SFP-5.0 groups compared with control group. Acetylcholine (ACh) levels were considerable decrease (3.0% and 9.2%, respectively) in brain membranes of SFP-2.5 and SFP-5.0 groups compared with control group. choine acetyltranferase (ChAT) activities as a synthesis enzyme of ACh, and acetylcholinesterase (AChE) activities as a hydrolysis enzyme resulted in a slight increases (2.4% and 3.0%, 4.6% and 6.3%, respectively), but significance difference between ChAT and AChE activities by SFP administration could be not obtained. Monoamine oxidase-B (MAO-B) activities were significantly inhibited (9.5% and 12.6%, respectively) in brain of SEP-2.5 and SFP-5.0 groups compared with control group. These results suggest that inhibiting effects of LF accumulation and MAO-B activity of silk fibroin(SFP) may play a pivotal role in protecting learning memory impairments by attenuating a various age-related changes for improvement of brain function.
본 연구는 곤충 유전자를 이용한 항세균성 펩타이드 생산 및 농업용 소재로서의 응용에 관한 연구로서 항세균성 단백질 누에신 유전자를 베큘로 바이러스 발현계(BEVS)를 이용하여 곤충세포주에서 발현한 후 누에신 단백질의 농업용 소재로서의 가능성을 모색하기 위해 농작물을 가해하는 감자 고추의 무름병을 일으키는 Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum, 가지 및 고추의 풋마름병을 일으키는 Ralstonia solanacearum, 양송이 버섯의 세균성 갈색 무늬 병을 일으키는 Pseudomonas tolaasii 및 무와 배추의 검은썩음병을 일으키는 Xanthomonas campestris pv. campestris 에 대해서 항세균 활성을 관찰하였다. 그 결과 Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum, Ralstonia solanacearum 및 Pseudomonas tolaasii에 대해 높은 활성을 나타내었으며 Xanthomonas campestris pv. campestris에는 활성을 나타내지 않았다. Ion exchange 및 gel filtration chromatography 를 수행하여 약 20 kDa의 성숙 누에신 단백질을 순수 분리하여 pH 및 온도에 대한 안정성을 조사한 결과, pH 2~12 완충액에서 30분간 처리하였을 때에도 항세균 활성이 그대로 유지되었고 10$0^{\circ}C$에서 2시간 처리시에는 활성이 안정되었으며 4시간 처리시에도 80% 정도로 유지됨을 확인함으로써 누에신 단백질은 pH 및 온도에 대한 안정성이 있음을 확인할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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