Reproductive traits of Palaemon gravieri such as embryo size, number of embryo (fecundity), incubation period, larval development mode, larval development period, larval survival and larval growth were described and compared to analyze the correlation among those traits. Embryo volume is a primary factor determining other ensuing reproductive features. Egg volume was $0.042mm^3$ in the first developmental stage. Embryo volume in P. gravieri was comparatively small which is indicative of great number of embryo (y = 3.0161x + 0.0185 $R^2$ = 0.74 positive isometric relationship) and relatively long incubation period. Larvae survived from zoea 1 to post-larvae and it took 45 days at $22^{\circ}C$. Survival rate of the larvae was rather great in the early stage and thereafter steadily decreased. Daily growth rate of larvae in P. gravieri at $22^{\circ}C$ was 0.0195 mm on average. They grew steadily as time went by. Incubation period was between 10-14 days at $22^{\circ}C$. Larval development mode was almost complete planktotrophic. PNR (point of no return) appeared to be the third day on average. Survival rate of larvae without feeding declined rapidly between 3 and 4 days. Larval development period and stage frequency were 23-30 days and 11 stages which imply prolonged larval period and high mortality. The pattern of brood production followed fast successive parturial pattern. Most ovigerous female had mature ovary when they performed parturial molt soon after hatching (larval release).
This study was carried out to investigate the effect of co-culture system(bovine oviduct epithelial cells; BOEC) and defined culture system (modified TALP ; mTALP) on the conception of embryos transferred, and pregnancy and twin birth rates after transfer of fresh or frozen-thawed bovine blastocysts produced in vitro were also evaluated. Oocytes from the slaughterhouse ovaries were matured and fertilized using general protocol. The results obtained were as the following. The pregnancy rate after transfer was higher in co-culture group than in mTALP group, but was not signficantly different, and there is no difference between fresh embryo group and frozen-thawed embryo group in conception rate. The conception rate was not different whether 3∼4 blastocysts or 2 blatocysts transferred into a recipient, but the production rate of twin calves was significantly higher (p<0.05) when 3∼4 embryos transferred. The average birth weight of twin calves(24.38kg) was numerically, but not significantly lighter than that of single calves(26.68kg).
These experiments were carried out to determine the effect of pregnancy in bisected embryo. The embryos of ICR mouse were microsurgically bisected at morula and blastocyst stage using microsurgical blade attached a micromanipulator. These bisected embryos without zona pellucida were cultured up to blastocyst stage and cell count and diameter of stained blastomere, and transferred pseudopregnant mice. And the development of these bisected embryos was compared with the results of production of young of the corresponding intact embryos or cell stage. When the bisected mouse embryos were cultured in vitro for 20 to 24 hours in morula stage(77.2%) or 3 to 6 hours in blastocyst stage(84.1%), them were developed to the expanded blastocyst stage. There were no significant(P<0.05) differences in the development rate of bisected embryos between in morula and blastocyst stages. The embryo size of blastocyst developed in vitro from bisected embryo was small(P<0.05)than intact embryo. However, the number of blastomeres with bisected embryo (24.7+1.3and 21.5+1.2 respectively) were significantly(P<0.05) reduced, compared with that of intacted embryos(36.3+1.1 and 41.4+1.2 respectively). When compared with the result of pregnancy rate(63.6%) after surgical transfer of bisected morulae, a similar result(65.4%) was obtained with bisected blastocyst stage(P< 0.05). However, production of youngs (38.8%) after transfer of bisected morula, a similar result (38.1%) was obtained with bisected blastocyst stage (P<0.05).
The ultrasound-guided oocytes cllection (ovum pick-up ; OPU) has become a substitution for superovlation in cattle. The objective of this study was to examine the effect of OPU frequency on the in vitro production of embryos in Hanwoo cattle. Six cycling Hanwoo cows were distributed into two groups for either once or twice weekly OPU sessions. Oocytes were collected by ultrasound-guided follicle aspiration(SA600) using a 6.5HMz transducer and attached with 18 gauge needle, with vacuum pressure of 40 mmHg. The cumulus-oocyte complexes (COCs) collected from each donor were matured in TCM 199 supplemented with 10% fetal bovine serum at 5% CO2 in air at 38.5$^{\circ}C$ for 22h and in vitro matured oocytes were co-incubated with sperm(separated by Percoll gradient) for 6h. The zygotes were co-cultured on cumulus cell monolayer in 10ul droplets in the same culture medium and conditions used for IVM for 7 days. On Day 7 of culture, development to blastocysts was examined. Although the number of oocytes collected was variable depending on individuals, overall embryo production in the twice per week OPU sessions was better that in the once per week sessions(6~21 vs 2~7 blastocysts produced, respectively). Two cows(E, A) were good oocyte donors and embryo production was superior in cow C ; however, cow F was a poor donor as compared to the others. In conclusion, these results suggest that for embryo production, twice weekly OPU sessions were better than once per week for producing embryos in vitro from Hanwoo cattle.
There have been intensive attempts to establish reliable methods far in vitro production (IVP) methods for of porcine embryos. Although a great deal of progress has been made, our current IVP systems still need to be improved. In this review, we focused on studies about in vitro maturation and fertilization (IVM-IVF) of porcine oocytes and their in vitro culture (IVC), especially on an excellent piglets production system using modified IVP system producing porcine blastocysts with high Quality.
Production of calves after transfer of nuclear transplant embryos is the latest technology to be applied in commercial livestock breeding. The objective of this study was to establish an efficient procedure to produce offsprings from nuclear transplant embryos. The fusion rates (72.7% vs. 80.8%), cleavage rates (62.5% vs. 71.4%) and rates of development in vitro (12.0% vs. 15.2%) of nuclear transplant embryos were not significantly different between 30 and 40h maturation age of cytoplast. The in vivo and in vitro-derived embryos as nuclei donor were used in this system of bovine nuclear transplantation. Fusion rates of nuclear transplant embryos were not significantly different between in vivo and in vitro-derived embryos (73.0 and 79.2%, respectively). The percentage of embryos reaching the morulae or blastocysts were 21.8% for in vivo-derived embryos and 11.9% for in vitro-derived embryos (p<0.01). Pregnancy rates after embryo transfer of nuclear transplant embryos were not significantly different between in vivo and in vitro-derived embryos (45.9 and 40.5%, respectively). However, calving rates after embryo transfer of nuclear transplant embryos were significantly higher in the in vivo-derived embryos than in vitro (p<0.01). Further research for age of cytoplast and use of in vitro-derived embryos as nuclei donor is required in this system. In conclusion, these results clearly show that the use of in vitro-derived oocytes as recipient cytoplast can improve the nuclear transplant system for genetic progress in cattle.
This study was carried out to establish the system of OPU derived embryo production, management of recipients as well as offspring production. OPU derived embryo production system was carried out of aspiration of immature oocytes 2 times per week, total 24 times for 3 months by an ultrasonographic guided follicular aspiration system and then produced in vitro-produced blastocysts by in vitro maturation, fertilization and culture system. This work was collected total 13,866 oocytes, average $8.2{\pm}4.5$ oocytes per session and 8,170 G1 + G2 grade oocytes, average 4.8 oocytes per session by 1,692 times session of total 71 donors for 4 years from 2010 to 2013. The rate of cleavage and blastocyst developmental competence were obtained 11,825 (85.3%) and 5,032 (36.3%) that was $7.0{\pm}3.8$ cleaved embryos and $3.0{\pm}2.5$ blastocysts per session. OPU derived embryo transfer were taken place in 2, 4, 6 and 7 local governments at 2010, 2011, 2012 and 2013 for 4 years and pregnancy rate were obtained 41.2, 43.9, 46.5 and 49.7% in each years. It means that pregnancy rate was continuously improved according of every year for 4 years. Pregnancy rate was significantly different according to individual local government in which was 62.7% in B, but 24.2% in F at 2012. Paternity identification was carried out total 26 offspring in C local government of 2012 and then confirmed 100% agreement of its analysis. In conclusion, the results obtained the possibility of mass production of elite cow embryos as well as offspring by OPU derived embryo production system, of which could be decreased the required time of genetic improvement.
본 연구에서는 고추의 소포자 배양 시 전처리 후 배지의 교환 여부, 배양 후 새 배지의 첨가 및 2층배지 사용시 하층고체배지의 양이 배의 생산에 미치는 영향을 조사하였다. 고온 전처리 후 배양배지를 첨가하여 배양하는 것보다 사용한 전처리 배지를 새 배양 배지로 교환하여 배양 하는 것이 배의 생산에 효과적 이었으며, 고온전처리 기간은 1일이나 2일에 비해 3일이 효과적 이었다. 배양 후 새 배지의 첨가는 약전처리 시에는 효과가 없었으나 소포자 전처리 시에는 배의 유기와 발달 모두 크게 향상되었다. 새 배지의 첨가 시기는 배양 4일 후가, 첨가 횟수는 1회가 배의 생산에 가장 효과적이었다. 한편 2층배지 사용 시 첨가하는 새 배지의 양은 1.5 ml이 효과적이었으며 이보다 많은 양을 첨가하는 경우 배의 발생과 발달 모두 저하되었다. 액체배지 사용 시에 비해 2층배지 사용 시 배의 발달이 좋았다. 또 2층배지 사용 시 하층고체배지의 양이 3 ml 일 때 보다는 5 ml이나 7 ml일 때 배의 발생은 감소하였으나 배의 질이 향상되었다. 이와 같은 결과들은 고추에서 다수의 정상자엽배를 생산 할 수 있는 소포자 배양시스템을 확립하는데 중요한 기초자료가 될 것이다.
The objective of this study was to investigate the comparison of transferable embryos and pregnancy rate between Hanwoo and Chickso. The results obtained were as follows: No differences were observed in the efficiency of superovulation rates on Hanwoo 78%, and Chickso 85%, respectively. The mean number of total embryos are each $14.76{\pm}2.16$ and $6.23{\pm}1.07$. So the mean number of transferable embryos are each $10.94{\pm}1.91$ and $4.58{\pm}1.05$. In addition, the mean number of total Hanwoo embryo from <10 and $10{\leq}$ of corpora luteum was $0.50{\pm}0.50$, $11.56{\pm}1.92$, respectively. In case of Chickso, The mean number of transferable embryo from <10 and $10{\leq}$ of CL was $2.75{\pm}1.39$, $6.00{\pm}1.00$, respectively. The pregnancy rates were Hanwoo 40%, and Chickso 37% following transfer of fresh embryos produced in vivo. Also, the pregnancy rates of Chickso 60% were significantly greater (p<0.05) than the Hanwoo 42.48% following transfer of following transfer of frozen embryos, respectively. In conclusion, these results suggest that Chickso may be effectively used for transferable embryos production in Hanwoo. Although the transferable embryos number was not enough, it seems the Chickso greatly affect pregnancy rate. The results indicated that the possibility of transferable embryos from Chickso for embryo transfer could be confirmed in this study. Based on the present findings, it was suggested that it is very important to evaluate in vivo embryo production and pregnancy rate of embryo transfer following superovulation for effective Hanwoo and Chickso production.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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