The early embryos are obtained in different time after the former egg had been laid, and the aim of the present study was to observe the development law of chicken early embryo.The embryo development has been divided into the two periods according to morphology of blastodisc. Cleavage period, from 5.5 h (0 h uterine age) to 15.5 h (10-10.5 h uterine age) after the former egg had laid, formation blastodisc of 6-7 layers cell. Later blastocyst period, from 17.5 h (12-12.5 h uterine age) to area pellucida formation after the former egg had been laid. The first division took place at 5 h (0 h uterine age), morular at 11.5 h (6-6.5 h uterine age), and blastocyst at 15.5 h (10-10.5 h uterine age) after the former egg had been laid.
The Somatic cell nuclear transfer (SCNT) method can be applied to various fields such as species conservation, regenerative medicine, farming industries and drug production. However, the efficiency using SCNT is very low for many reasons. One of the troubles of SCNT is that it is highly dependent on the researcher's competence. For that reason, four somatic cell nuclear injection methods were compared to evaluate the effect of hole-sealing process and existence of cytochalasin B (CB) on efficiency of murine SCNT protocol. As a results, the microinjection with the hole-sealing process, the oocyte plasma membrane is inhaled with injection pipette, in HCZB with CB was presented to be the most efficient for the reconstructed in SCNT process. In addition, we demonstrated that the oocytes manipulated in Hepes-CZB medium (HCZB) with CB does not affect the developmental rate and the morphology of the blastocyst during the pre-implantation stage. For this reason, we suggest the microinjection involving hole-sealing in HCZB with CB could improve SCNT process efficiency.
Cheruveetil, Mohammed Ashraf;Shetty, Prasanna Kumar;Rajendran, Arya;Asif, Muhammed;Rao, Kamini A
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제48권4호
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pp.352-361
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2021
Objective: The study assessed the developmental potential of germinal vesicle (GV) oocytes subjected to in vitro maturation (IVM) after prematuration culture with cilostamide (a phosphodiesterase-3 inhibitor) and the impact of cilostamide exposure on the morphology of meiosis II (MII) oocytes and subsequent embryo quality. Methods: In total, 994 oocytes were collected from 63 patients. Among 307 GV oocytes, 140 oocytes were selected for the experimental group and 130 oocytes for the control group. The denuded GV-stage oocytes were cultured for 6 hours with cilostamide in the experimental group and without cilostamide in the control group. After 6 hours, the oocytes in the experimental group were washed and transferred to fresh IVM medium. The maturational status of the oocytes in both groups was examined at 26, 36, and 48 hours. Fertilization was assessed at 18 hours post-intracytoplasmic sperm injection. Embryo quality was assessed on days 3 and 5. Results: In total, 92.1% of the oocytes remained in the GV stage, while 6.4% converted to the MI stage (p<0.01) after cilostamide exposure. In both groups, more MII oocytes were observed at 36 hours (25.8% vs. 21.5%) than at 26 hours (10.8% vs. 14.6%) and 48 hours (13% vs. 7.9%) (p>0.05). With the advent of cilostamide, blastocyst quality was better in the experimental group than in the control group (p<0.05). Conclusion: Cilostamide effectively blocked nuclear maturation and promoted cytoplasmic growth. Prematuration culture with cilostamide enabled synchronization between cytoplasmic and nuclear maturity, resulting in better blastocyst outcomes.
본 연구는 고양이의 불임 해결을 위한 방안의 하나로써 체외수정란을 생산할 목적으로 난자의 형태, 보존 및 번식주기별 난자의 체외발생에 미치는 영향을 조사하였다. 1. 신선 난소로부터 회수한 난구세포부착 및 나화 난자를 각각 배양했을 때 GV 및 MI으로의 체외성숙율은 74.3%와 25.7%와 및 28.6%와 11.4%,로써 난구세포 부착 난자가 나화 난자의 비해 높은 체외성숙율을 나타냈다. 2. 휴지기, 난포기 및 황체기 단계로 구분하여 채취한 난구세포 부착 난포란을 배양하였을 때 GV 및 MI기로의 체외성숙율은 각각 88.6%와 6.5%, 60.0%와 11.4%, 77.1%와 5.7%였다. 3. 신선 및 salt에 보존한 난소로부터 회수한 난구세포부착 및 나화 난자를 각각 배양했을 때 GV 및 MI으로의 체외성숙율은 74.3%와 25.7%, 37.1%와 11.4% 및 57.1%와 13.3%, 17.1%와 3.3%으로서 난구세포 부착 신선난자가 나화 또는 salt 보존 난자에 비해 높은 체외 성숙율을 나타냈다.
This experiment was carried out to investigate the effects of osmolarity of thawing diluents, seminal plasma added in thawing diluents on the sperm viability and the effects of thawing temperature, the temparature of the thawing diluents on the sperm viability and acrosomal morphology of boar spermatozoa by the straw method. The result obtained were summarized as follows: 1. The sperm viablilty after thawing of the frozen semen was shown greater in the high osmolarity(392~492mOsm) than low osmolarity(300mOsm) in thawing diluent. The added levels of seminal plasma in thawing diluent did not affect the viability of frozen-thawed boar semen. 2. In terms of thawing temperature, the sperm viability was shown higher in the frozen semen thawed at 5$0^{\circ}C$ for one min. (p<0.01) than those thawed at 2$0^{\circ}C$ or 37$^{\circ}C$ for one min. The sperm viability was not significant at the diluent temparature of 2$0^{\circ}C$or 37$^{\circ}C$ after thawing: but the sperm viability was higher in thawing diluent at 2$0^{\circ}C$ than in that at 37$^{\circ}C$. However, the effects of thawing temperature and diluent solution on normal acrosomal rate were not significant. 3. Cleavage rates of oocytes fertilized with frozen semen were 46.4% and 43.3%, respectively, which were thawed at 5$0^{\circ}C$ for one min. and then diluted in mBTS medium at 2$0^{\circ}C$or 37$^{\circ}C$. To sum up, the sperm viability was shown greater at the high of thawing diluents of frozen boar semen. In terms of thawing conditions, the sperm viability was shown greater, when semen was thawed at a high temperature for a short time and then diluted at the same temperature as that in the straw.
The recovery of epididymal sperm in animals is considered as one of the important tools to preserve high value or endangered species. However, there are no appropriate castrating indicators such as months of age in bull, sperm morphology, and motility, particularly in young Korean native bull (Hanwoo). Therefore, this study aimed to investigate sperm number, morphology, and motility of sperm in the epididymis tail of young Hanwoo bulls at 8 and 15 months of age. After castration, epididymal tails were collected and minced with blades to recover sperm. In experiments 1 and 2, sperm number, morphology, and motility were examined. Total number of sperm and percentage of normal sperm from bulls at 8 months of age was lower than that of bulls at 15 months of age after collection (P<0.05). Percentage of abnormal head, tail, proximal cytoplasmic droplet, dead and damaged acrosome of sperm from bulls at 8 months of age were higher than those of bulls at 15 months of age (P<0.05). In experiment 3, sperm motility from bulls at 8 and 15 months of age were examined before freezing and after thawing. Frozen-thawed sperm at 8 months of age showed low total motility and motile sperm with ${\geq}25{\mu}m/sec$ compared to those at 15 months of age and commercially-used sperm (P<0.05). In conclusion, sperm derived from the epididymal tail of bulls at 8 months of age showed high abnormal morphology and poor motility, which are not adequate for AI and IVF. On the other hand, sperm derived from the epididymal tail of bulls at 15 months of age showed high normal morphology and motility.
본 연구는 돼지 배아의 유리화 동결 시 CB 처리군과 CB 비처리군의 영향을 비교하였다. CB의 농도별, 처리 시간별로 처리한 뒤 유리화 동결 융해 후 정상적인 형태 회수율과 생존률을 각각 조사하였다. 1. CB를 전 처리한 군과 비처리군의 정상적인 형태율이 각각 84.2%, 81.9%로 유의한 차이가 없었으나, 융해 후 72시간 째 생존률의 결과에서는 각각 60.5%, 32.8%로 유의성(p<0.1)이 검증되었다. 2. CB 농도별 생존률에 미치는 영향은 7.5 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 처리군이 다른 처리군에 비하여 유의적으로 높았다(p<0.05). 정상 형태율 95%와 융해 후 생존률 73%로서 다른 농도에 비하여 65∼76%, 15∼57%보다 각각 높았다. 3. 7.5 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ 농도의 CB 전처리의 처리 시간에 따른 영향은 20분 처리하였을 때 정상적인 형태율은 81%로 다른 처리군(25∼69%)보다 높았고, 24시간 째 생존률의 결과로도 64%, 6∼56%로 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 또한 원심 처리군과 비처리군에서도 CB를 20분으로 처리하였을 때 가장 좋은 결과를 나타내었으며, 원심 비처리군보다는 원심 처리군이 좀 더 높은 결과를 보여 주었다.
The possible effect of human follicular fluid(hFF) on the growth and development of fertilized oocytes and embryos is important because the fallopian tubes are exposed to FF after follicular rupture and the processes of fertilization and embryo cleavage occur inside the fallopian tubes. Previously, it was suggested that human FF might adversely affect on the development of early mouse embryos. In order to investigate the effect of hFF on the development of embryos, early mouse embryos were cultured in media containing various protein sources as bovine serum albumin(BSA), fetal cord serum(FCS) and FF. And we evaluated the development of early mouse embryos in terms of the morphology, cleavage rate, and cell count of blastcysts. There were no significant differences in the morula and blstocyst formation rates of 2-cell mouse embryos cultured in the media containg three different protein sources and three different concentrations of FF. The blastocyst formation rate of 1-cell mouse embryo cultured in FF group was significantly higher than that cultured in BSA group(P<0.05). The morula and blastocyst formation rates of 2-cell mouse embryos of the group cultured in the media containing FF were comparable with those of other two groups, in addition, the cell count of blastocysts of FF group in the 2-cell embryo culture was higher than those of BSA group and HCS group(P<0.01), and this finding was also noted in 1-cell embryo culture. There was no difference in the morula and blastocyst formation rates of the 2-cell mouse embryos cultured in the media containing different concentrations of FF. These results suggest that mature human follicular fluid has no inhibitory activity on the development of early mouse embryos even in high concentration and may be a good protein source which is positively associated with the development of mouse embryos in vitro especially in 1 cell embryo culture.
Park, Jaehyun;Park, Sangkyu;Seo, Jeongmin;Roh, Sangho
International Journal of Oral Biology
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제44권4호
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pp.144-151
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2019
Alopecia has emerged as one of the biggest interests in modern society. Many studies have focused on the treatment of alopecia, such as transplantation of hair follicles or inhibition of the androgen pathway. Hair growth is achieved through proper proliferation of the components such as keratinocytes and dermal papilla cells (DPCs), movement, and interaction between the two cells. The present study examined the effect of the hedgehog (Hh) signaling pathway, which is an important and fundamental signal in the cell, on the morphology and the viability of human keratinocytes and DPCs. Upregulation of Hh signaling caused a morphological change and an increase in epithelium-mesenchymal transition-related gene expression but reduced the viability of keratinocytes, while the alteration of Hh signaling did not cause any change in DPCs. The results show the possibility that the regulation of Hh signaling can be applied for the treatment of alopecia.
An experiment was carried out to find out the changes in morphology, sugars, and $\alpha$-amylase activity during the priming of rice seeds (Oryza sativa L. cv. 'Ilpumbyeo'). For priming, seeds were soaked in -0.6 MPa PEG solution at 15$^{\circ}C$ for 4 days (properly primed) and at $25^{\circ}C$ for 4 and 10 days (over-primed) and dried at room temperature. The size of coleoptile and differentiated leaves of properly primed seeds were bigger and coleoptile was separated from the other part of embryo compared with non-primed and over-primed seeds. As priming of seeds advanced, compound starch grains in the endosperm disintegrated into tiny starch granules, and small holes were found in the tiny starch granules and a cavities developed between embryo and endosperm. The radicle and plumule of properly primed germinating seeds developed faster than non-primed and overprimed germinating seeds. Sucrose, maltose, and raffinose contents of properly primed seeds decreased, while content of glucose and fructose and $\alpha$-amylase activity increased. However, sugar content and $\alpha$-amylase activity of over-primed seeds were lower compared with non-primed seeds or properly primed seeds.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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