• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제28권1호
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• pp.41-46
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• 2001

Objective: To determine the effects of leukemia inhibitory factor (LIF) on embryonal development in in vitro culture. Methods: This is designed in vitro model using eggs from mouse. The eggs from mouse were assigned 29 for control group, 53 for 20 ng/ml of LIF, 88 for 40 ng/ml of LIF, 68 for 80 ng/ml of LIF respectively for in vitro fertilization. And 26 fertilized eggs at 2 cell stage from mouse also were assigned. The mouse embryos of all groups were cultured in medium supplemented with LIF in different concentrations, whereas the eggs in control group was cultured in medium without supplement of LIF. Results: At 72 hours culture of eggs from in vitro fertilization, there was a slight increas in rate of embryonal development to morula in both LIF-20 and LIF-40 as results of 64.15% and 75% respectively, while 42.65% in inferior rate of LIF-80, compare with 51.72% in control group. But the difference between these each groups were not significant in statistically ($p{\le}0.05$). And after 96 hours culture of eggs, the rates blastocyst formation was significantly higher in both LIF-20 and LIF-40 as 56.6% and 63.63% than those in control and LIF-80 as 44.83% and 35.29% respectively. On culturing eggs from in vivo fertilization, the rates of blastocyst formation was significantly not only higher as 85% and 81.81% respectively in medium supplemented with LIF-40 and LIF-80 than 42.3% in LIF-20 but also embryonal cell viability were remakedly improved at 96 hours after culture. Conclusion: The LIF in low dose is embryotrophic, but LIF in high dose is embryotoxic on eggs from in vitro fertilization. Whereas on culturing eggs from in vivo fertilization, LIF is more beneficial with dose dependent in high concentration.

• 한국응용곤충학회지
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• 제53권4호
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• pp.381-389
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• 2014

매실의 낙과 피해를 일으키는 복숭아씨살이좀벌은 경기도, 충청남북도, 전라남북도 지역의 매실과 살구, 그리고 중국산 복숭아 종자에서 확인되었다. 복숭아씨살이좀벌은 땅에 떨어진 핵과류의 핵 속에서 유충 상태로 월동하고, 노숙유충은 4월 중순까지, 번데기는 3월 하순에서 4월 하순까지 관찰되었으며, 성충은 4월 하순~5월 상순 사이에 90% 이상이 우화하는 것으로 조사되었다. 암컷 성충은 핵이 경화되기 이전 씨앗이 액상일 때 과실 씨앗의 외피 바로 밑에 산란하였으며, 산란관의 길이가 5 mm를 넘지 않아 산란이 가능한 매실의 크기는 직경이 2 cm를 넘지 않았다. 하나의 과실에 최대 5개의 알이 관찰되었으며, 알 기간은 2일을 넘지 않았다. 부화한 유충은 먼저 고형화되는 배로 이동하여 이를 섭식하면서 성장하는데 이 과정에서 유충들 사이의 경쟁으로 인해 한 마리의 유충만 생존하였다. 6월 상순경 피해를 받은 과실의 대부분이 부패증상을 보이며 낙과하였다. 땅에 떨어진 과실의 핵 속에서 이듬해 봄까지 노숙유충으로 월동하였다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제20권4호
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• pp.487-495
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• 2007

The objectives of the present study were to initiate cloning of Korean native goat by somatic cell nuclear transfer (NT) and to examine whether unovulated (follicular) oocytes can support the same developmental ability of NT embryos as ovulated (oviductal) oocytes after hCG injection in stimulated cycles of the goat. The in vivo-matured and immature oocytes were collected from the oviducts and follicles of superovulated does, respectively, and the immature oocytes were maturated in vitro. Ear skin fibroblasts derived from a 3-yr-old female Korean native goat were used as the donors of nuclei or karyoplasts. Following fusion, activation and in vitro culture to a 2- to 4-cell stage, 49 in vitro-derived and 105 in vivo-derived embryos were transferred to 6 and 17 recipient does, respectively. One doe and three does of the respective groups were identified as pregnant by ultrasonography on day 30 after embryo transfer. However, only one doe, which had received in vivo-derived embryos, delivered a normal female kid of 1.9 kg on d 149. The cloned kid gained more weight than her age-matched females as much as 87% during the first 4 mo after birth (17.7 vs. $9.4{\pm}0.8$ kg) and reached puberty at 6-mo age a few months earlier than normal female does. The telomere length of the kid, which was similar to that of the donor fibroblast at 2-mo age, decreased 8% between 2- and 7-mo ages. Moreover, at 7-mo age, she had 21% shorter telomere than her age-matched goats. To our knowledge, this is the first case in which a cloned animal born with a normal weight exhibited accelerated growth and development. The unusually rapid growth and development of the cloned goat may have resulted from SCNT-associated epigenetic reprogramming involving telomere shortening.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제34권4호
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• pp.375-380
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• 2007

국내 옥수수 순계주에서 Agrobacterium 공동배양으로 CP4 5-Enol-pyruvylshikimate-3-phosphate synthase (CP4 EPSPS) 유전자가 도입된 제초제저항성식물체를 개발하였다. 5개의 순계주 (HW1, KL103, HW3, HW4, HW7)의 미숙배를 Ubiquitin promoter-CP4 EPSPS 유전자와 CaMV35S promoter-nptII 유전자가 발현되도록 제조된 pCAMBIA2300 벡터를 C58C1 Agrobacterium에 형질전환하여 공동 배양하였다. 항생제로 paromomycin이 첨가된 배지에서 선발된 옥수수 형질전환체를 PCR, RT-PCR 및 Northern 분석을 통하여 유전자의 도입과 발현을 확인하였다. 또한 형질전환 식물체의 glyphosate 처리에 따른 shikimate 축적반응을 확인하였다. Paromomycin 저항성 캘러스 형성빈도는 옥수수 각 순계주 HW1, KL103, HW3, HW4, HW7에서 각각 0.37%, 0.03%, 2.20%, 2.37%, 0.81%로 나타났으며, PCR분석을 통하여 최종적으로 2개의 옥수수 순계주 (HW3, HW4)의 paromomycin 저항성 캘러스로부터 분화된 식물체에서 확인하였다. 이러한 형질전환체중에서 RT-PCR 및 Nothern blot 분석을 통하여 CP4 EPSPS 유전자가 발현되는 2개의 계통 (M266, M104) 을 선발하였고, shikimate 축적반응을 통하여 glyphosate에 대한 저항성을 갖는 계통 (M266)을 최종적으로 선발하였다. 이러한 결과는 국내 옥수수 순계주에서 제초제저항성을 갖는 옥수수 형질 전환체를 개발할 수 있음을 시사한다.

• 대한수의학회지
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• 제35권1호
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• pp.187-195
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• 1995

The present study carried out to determine the developmental capacity of bovine oocytes matured in epidermal growth factor(EGF)-containing medium, the developmental competence of bovine embryos using synthetic oviduct fluid(SOF) and the effect of glucose on the development of bovine embryos. In experiment 1, oocytes, obtained from abattoir ovaries, were matured in EGF-containing medium for 24 hours, followed by exposure to Korean native cattle spermatozoa for 18 hours and cultured by utilizing co-culture system with bovine oviduct epithelial cells(BOEC) in TCM199. In experiment 2, early bovine embryos were cultured in SOF with or without BOEC and compared with those in TCM199 with BOEC. In experiment 3, bovine embryos were cultured in the presence or absence of glucose. Seven and ten days after in vitro fertilization, developmental competence of embryos were evaluated. The rate of cleavage was significantly(P<0.05) higher in EGF-containing maturation medium(70.0%) than in control(57.7%). The rates of development to morulae and blastocysts were 30.6% and 23.3% there was no significant difference between them. The rates of in vitro fertilized embryos to morulae and blastocysts cultured in SOF with BOEC(30.4%) and in TCM199 with BOEC(38.0%) were significantly(P<0.01) higher than cultured in SOF without BOEC(13.4%) at seven days after in vitro fertilization. The rates of embryos to blastocysts cultured in SOF with BOEC(29.4%) and in TCM199 with BOEC(35.9%) were significantly(P<0.05) higher than cultured in SOF without BOEC(13.4%) at ten days after in vitro fertilization. The rates of early embryos to morulae and blastocysts cultured in the presence or absence of glucose were 12.2% and 17.5% each other, there was no significant difference between them. The results show that bovine oocytes matured in the presence of EGF can cleave better, SOF with BOEC can replace serum containing complex media, TCM199 with BOEC in bovine embryo culture and glucose have little effect on the culture of early bovine embryos.

• 한국가축번식학회지
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• 제25권2호
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• pp.101-111
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• 2001

본 실험은 preantral 난포를 antral 단계까지 성숙시 비교, 또 난포 성숙, 수정 및 배발달을 유도할 수 있는 체외배양체계를 개발하고자 시행되었다. 협막세포로 둘러쌓인 소 preantral난포 (150 $\pm$ 1.2 $\mu\textrm{m}$)를 1 mg/$m\ell$ collagenase와 0.2 mg/$m\ell$ DNase I가 포함된 Leibovitz L-15 배양액에서 효소적 방법과 물리적 방법으로 난소조직으로부터 분리하였고, 체외난포 성숙 배양액인 $\alpha$MEM을 기본 배양액으로 여러 농도의 FSH와 LH를 첨가하여 25일간 배양하였다. FSH (10~150 ng/$m\ell$) 첨가군의 성숙율과 생존율은 대조군의 그것보다 유의하게 높았으나(P ＜ 0.001), LH (1~125 ng/$m\ell$) 첨가군들과 대조군 사이에서는 유의차가 없었다. FSH (90 ng/$m\ell$)와 LH (25 ng/$m\ell$)를 공동첨가군의 생존율 (40%)과 성숙율 (244$\pm$0.5 $\mu\textrm{m}$)은 대조군의 그것 (25%, 160 $\pm$0.5 $\mu\textrm{m}$)보다 양호하였다. 결과적으로, preantral 난포를 25일간 체외배양한 후, 50%의 건강한 antral 난포를 획득할 수 있었고, 이들 난포중 60%가 제 1극체가 있는 완전한 감수분열을 이루었고 (18.1%), 10.0%가 배발달을 하여 배반포 단계에 이르렀다. 이런 결과는 협막세포가 있는 소 preantral 난포는 상기의 체외배양체계에 의해 antral 단계까지 성장할 수 있고, 체외에서 성숙된 소 preantral 난포의 난자는 분열능을 획득하고 수정 및 배발달이 가능하다는 것을 보여주었다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제5권1호
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• pp.17-21
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• 2001

생쥐 초기배아의 체외배양 시 부화에 관련된 단백질 분해효소의 발현 시기와 존재부위를 알아보고 trypsin억제제 benzamidine을 배양액에 첨가하여 부화효소의 역할을 살펴보았다. 부화 효소로 제안되고 있는 trypsin 유사효소의 발현부위를 확인하기 위해 rhodamine이 부착되어 있는 Trypsin subsfrate probe를 이용하여 형광염색하였다. 생쥐 배아의 발생과정에서 trypsin 유사효소의 발현은 후기 상실 배아에서부터 관찰되었으며, 포배기 배아에서는 영양배엽 표면에서 전체적으로 관찰되었다. 특히, 부화가 진행되고 있는 배아의 부화 개시 부위 (blebbing)에서 그 염색 정도가 상대적으로 강함을 확인할 수 있었다. 생쥐 4-세포기 배아의 체외배양 시 배양액에 trypsin 억제제인 benzamidine을 ImM 농도로 첨가하였을 때 포배기로의 발생률은 영향을 받지 않았지만, 부화율은 15.8%로 대조군의 83.0%에 비해 유의하게 (p<0.02) 낮게 나타났다. 배아의 발생단계에 따라 5mM의 benzamidine을 12시간 동안 처리한 경우 부화율이 8.7%로 대조군의 83.0%에 비해 유의하게(p<0.01)낮았다. 결론적으로, trypsin 유사효소는 초기 포배기에서부터 발현되기 시작하며 특히, 후기 포배기에서 그 효소의 작용이 부화 과정에 커다란 영향을 미치는 것이 확인되었다. 또한 배양중 부화 과정에서는 배아 자체에서 분비되는 trypsin 유사효소의 역할만으로도 부화할 수는 있지만 생체 내에서는 배아와 자궁내막 상피와의 상승적 상호 작용에 의해 부화과정이 더 활발히 진행되는 것으로 생각된다.

• 생명과학회지
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• 제20권11호
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• pp.1634-1639
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• 2010

본 연구는 무지개송어 양식 산업의 생산성 향상을 위해 전 암컷 무지개송어 대량생산을 위한 일환으로 성호르몬에 의한 생리학적 성전환과 자성발생 2배체어를 유도하였다. 생리학적으로 성전환된 수컷을 만들기 위하여 부화 후 첫 먹이를 먹는 시기에 웅성호르몬인 17 alpha-methyltestosterone (MT) 5 mg을 사료에 흡착시켜 사육수온 $13^{\circ}C$에서 적산수온 $800^{\circ}C$까지 처리한 결과 96.7%의 수컷 유도율을 보였다. 또한 정상 수컷 정액을 이용하여 수정 10분 후 $28^{\circ}C$에서 20분간 고온 처리하여 61.7%의 자성발생 2배체가 유도되었다.

• 한국어류학회지
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• 제26권2호
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• pp.89-98
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• 2014

좀수수치 Kichulchoia brevifasciata의 산란기 특징 및 초기생활사 연구는 생물학적 특성 및 복원학적 기초자료를 확보하기 위하여 실시하였다. 산란기인 2011년 6월부터 7월까지 전라북도 고훙군 금산면에서 족대를 이용하여 채집한 후 산란기 특징을 분석하였고, 초기생활사는 성숙한 개체에 Ovaprim을 0.5 mL/kg 주사하여 성숙란을 얻은 후 건식법으로 인공수정 시켜 진행하였다. 성숙한 암컷은 전장은 46~76mm이고 GSI는 $9.6{\pm}3.77%$였고, 수컷은 전장 42~52mm이고 GSI는 $3.5{\pm}1.04%$였다. 성비는 0.1로 수컷이 매우 적었으며, 특별한 이차성징은 관찰되지 않았다. 포란수는 $69{\pm}35.3$개였으며, 산란된 성숙란은 담황색의 분리침성란으로 난경 $1.46{\pm}0.07mm$였다. 수정난은 수온 $25^{\circ}C$에서 66시간 후에 부화하였으며, 부화 직후 전기자어의 크기는 전장 $5.5{\pm}0.07mm$였다. 부화 후 6일째에는 전장 $9.0{\pm}0.29mm$로 난황을 모두 흡수하여 후기자어로 이행하였으며, 부화 후 17일째에는 전장 $12.6{\pm}0.24mm$로 모든 지느러미 기조가 정수가 되어 치어기로 이행하였다. 부화 후 80일째에는 전장 $33.0{\pm}2.19mm$로 체형과 체측반문이 비교적 성어와 유사하였다.

• 한국어류학회지
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• 제25권4호
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• pp.200-207
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• 2013

우리나라 고유종인 참갈겨니를 2011년 남한강에서 채집하여 Zacco속의 유연관계와 종 보존의 기초자료를 얻기 위하여 난 발생 과정과 초기생활사를 연구하였다. Z. koreanus 난은 실험실에서 건식법으로 수정되었다. 수정란은 원형이고 투명하며, 엷은 황색난황을 가지고 있고, 유구가 없으며, 약한 점착성 침성란으로 난경은 $3.09{\pm}0.07$ mm(n=10)이었다. 수온 $20.0{\sim}23.0^{\circ}C$에서 수정 후 68시간 전후하여 난 발생이 완성되었으며, 부화자어의 크기는 전장 $10.30{\pm}0.40$ mm (n=10)이었다. 부화 6일 후에는 전장 $16.12{\pm}0.42$ mm(n=8)로 성장하였고, 난황이 거의 흡수되었으며 입과 항문이 열린 후기자어기가 되었다. 부화 17일 후에는 전장 $18.21{\pm}0.38$ mm(n=6)로 자랐고, 대부분의 지느러미에 기조가 나타났으며, 복부에는 갈색반점이 출현하였다. 부화 27일 후에는 전장 $20.01{\pm}1.12$ mm(n=5)로 성장하였고, 모든 지느러미의 기조수가 정수에 도달하였다. 부화 120일 후에는 전장 $23.29{\pm}3.12$ mm(n=10)로 성장하였으며, 외형과 반문이 성어와 유사하였다.