가시오갈피종자의 적정파종기를 구명하기 위하여 개갑종자의 저온처리기간에 따른 발아율을 조사하고 파종시기에 따른 묘목의 생존율과 생육정황을 조사하였다. 1. 채종하여 $15^{\circ}C$에서 140여일 간 모래로 층적저장한 종자는 냉장온도 $(5^{\circ}C)$에서 10일부터 발아하기 시작하여 85일까지 개갑종자는 93.7%, 비개갑종자는 26.1%가 발아하였다. 개갑종자와 비개갑종자 모두에서 85일 이후에 는 발아율의 증가가 둔화되었다 2. 유묘출현율, 생존율, 묘소질을 비교한 결과 5월 11일 이전에 저온에서 발아한 종자를 포트에 가식하는 것이 적정하였다. 3. 저온처리중 발아종자 길이 에 따른 생존율을 조사한 결과는 하배축이 $0.5{\sim}2$ cm 신장하였을 때 파종한 처리구의 생존율이 가장 높았다. 4. 발아종자의 생존율은 50%차광처리에서 30% 차광보다 10배 높게 나타났다. 5. 4월 10일과 5월 11일 사이에 파종하는 것이 묘의 생육에 가장 좋으며 적정 파종시기를 지나치더라도 적절한 관리대책만 따라가면 4월부터 8월까지 거의 모든 생육기간중에 발아종자 파종이 가능하였다.
가시오갈피 뿌리, 줄기, 잎의 80% 메탄올로 추출물과 용매 분획물들의 항돌연변이 효과를 조사하기 위하여 2-AF와 Trp-P-1을 사용하여 Ames test로 검토하였다. 가시오갈피 메탄올 추출물의 돌연변이원성은 없었으며, 틀변경 변이주인 S. typhimurium TA98에서는 $500\;{\mu}g/plate$ 농도에서 모두 60% 이상의 돌연변이 억제효과를 나타내었고, S. typhimurium TA100에서는 억제효과를 거의 나타내지 않았다. 이 결과로부터 가시오갈피 메탄올 추출물이 틀변경 돌연변이에 대해 강한 억제효과를 갖는다는 것이 시사되었다. 메탄올 추출물의 분획물중 클로로포름 층이 강한 항돌연변이원 효과를 나타내었고, 부탄올과 물 층에서는 억제효과가 거의 없었다. 뿌리, 줄기, 잎의 클로로포름 층은 S. typhimurium TA98에서 2-AF를 돌연변이원으로 사용했을 경우 $300\;{\mu}g/plate$ 농도에서 각각 93.6, 76.2, 68.48%의 억제효과를 나타내었고, Trp-P-1을 돌연변이원으로 사용했을 경우 각각 87.7, 72.5, 68.8%의 억제효과를 나타내었으며, 모두 용량 의존적으로 항돌연변이 효과를 나타내었다.
가시오갈피의 종자 후숙을 촉진하고, 부패율을 낮추기 위하여 후숙전 Gibberellin 처리농도 및 침지시간, 토로스 분제를 사용한 종자소독처리에 따른 가시오갈피 종자의 배 배달 및 개갑특성을 조사하였다. 가시오갈피 종자 후속 전 적정 $GA_3$ 처리농도가 높아짐에 따라 개갑속도가 빨라지는 경향을 나타냈으며, $500\;mg\;{\cdot}\;L^{-1}$ 처리구 이상에서는 부패율 급증에 따른 개갑율 감소현상이 확인되어 부적합한 것으로 나타났다. 후숙전 종자소독처리는 가시오갈피 종자개갑에 유용한 미생물 (Trichoderma, Aspergillus 속 등)의 활동을 억제하여, 후숙과정을 지연시키는 것으로 확인되었다. 대조구 (물 24시간 침지)에 비해 $GA_3\;300\;mg\;{\cdot}\;L^{-1}$ 24시간 침지처리구에서 개갑기간이 40여일 단축되었으며, 저온휴면타파처리 ($5^{\circ}C$, 70일)후 개갑종자의 85% 이상이 정상적으로 발아하는 것이 확인되었다.
가시오갈피나무의 약효성분에 대한 기초자료를 제공하고자 자생지 및 재배지간, 산지별, 직경별, 부위별 eleutheroside E 및 chlorogenic acid는 함량을 HPLC로 분석하였다. Eleutheroside E 및 chlorogenic acid의 함량을 분석한 결과 자생지와 재배지간에 함량차이가 나타났다. 뿌리의 chlorogenic acid 함량은 덕유산(0.863%), 대암산(0.667%) 및 치악산(0.630%)의 재배지에서 채취한 시료에서 가장 높았고, eleutheroside E의 함량은 오대산(0.086%) 및 응봉산(0.074%) 자생지에서 채취한 시료에서 가장 높았다. 줄기에서의 두 성분 함량은 모두 재배종 보다 자생종에서 높았으며, chlorogenic acid 함량은 오대산(0.882%)과 연엽산(0.664%), eleutheroside E 성분은 계방산(0.141%) 및 가마봉(0.125%) 산지에서 가장 높았다. 잎에서 eleutheroside E 맞 chlorogenic acid 함량은 산지간에 차이를 보였으며, 뿌리나 줄기의 함량에 비하여 낮았다. 뿌리와 줄기의 직경에 따른 eleutheroside E함량은 직경 크기가 클수록 함량이 높았다.
Background : The purpose of this study was to investigate the anti-inflammatory properties of stems and leaves of Eleutherococcus senticosus (Rupr. & Maxim.) Maxim. (ES) from Gangwon-do. Methods and Results : Stems and leaves of ES were collected from two areas in Gangwon-do: Cheorwon-gun and Samcheok-si. Samples were extracted with water by using the pressurized liquid extraction method and with 70% prethanol A by using the heat reflux extraction method. The anti-inflammatory effects of ES were evaluated through the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide(MTT), lactate dehydrogenase(LDH) assay, nitric oxide(NO) assay, enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), and Western blot analysis in RAW 264.7 macrophages stimulated with lipopolysaccharide (LPS). 1) Results showed that ES leaf extractions were not cytotoxic at a concentration of up to 30 ㎍/㎖. The leaves of 70% prethanol A extractions of ES(30 ㎍/㎖) inhibited NO, interleukin-6(IL-6), and tumor necrosis factor-α(TNF-α) production and decreased the protein level of cyclooxygenase 2(COX-2). There was no significant change in the protein level of inducible nitric oxide synthase(iNOS). The stem extractions of ES did not exhibit anti-inflammatory effects. Conclusions : In this study, the leaves of 70% prethanol A extractions of ES demonstrated anti-inflammatory effect on RAW 264.7 macrophages. The 70% prethanol A extractions have a relatively higher anti-inflammatory effect on RAW 264.7 macrophages than water extractions.
체세포배발생을 이용한 가시오갈피 대량증식체계 확립을 위하여 저온처리에 의한 체세포배의 장기저장 실험을 수행하였다. 현탁배양 체세포배의 $4^{\circ}C$에서의 저온저장에는 구형배 이전의 조기단계의 체세포배가 적합하였고 $2\;g/{\ell}$ 이하의 낮은 접종밀도에서는 36개월 이상 저장이 가능하였다. 장기간 저온 저장한 체세포배는 상온에 옮긴 후 2,4-D를 첨가한 배지에서만 성장을 회복하여 배발생캘러스를 형성하였으며 배발생캘러스의 증식속도는 배양온도를 $32^{\circ}C$로 높였을 때에 가장 효율적이였다.
가시오갈피 군락의 유전변이를 파악하기 위하여 국내산 8개 군락과 러시아산, 중국산 각 1개 군락등 총 10개 군락, 67개체에 대한 ISSR(inter-simple sequence repeats) 표지자 분석을 실시하였다. 국내산 가시오갈피의 ISSR 표지자 분석에서 76%의 다형성 증폭산물 (primer당 평균 11.5개)을 확인했으며, 가시오갈피 수집종에 대한 RAPD 표지자 분석 (Kim등(等), 1998)의 다형성 비율 57%(primer당 평균 5.7 개) 보다 높게 나타나서, ISSR 표지자 분석이 RAPD 표지자 분석보다 많은 정보를 제공할 수 있었다. 국내 가시오갈피 8개 군락의 유전변이분석에서 군락간 유전변이가 62.8%로 매우 높게 나타났는데, 이러한 결과는 자생지의 좁은 면적과 무성번식에 의한 군락 유지기작에 기인하는 것으로 생각된다. 또한 본 연구의 제한된 시료수가 군락간 높은 유전변이를 설명하는 요인이 될 수도 있지만, 가시오갈피 군락의 번식특성과 분포양상을 고려할 때 유전적 해석에 미치는 영향은 미미한 것으로 생각된다. 유연관계분석에서는 자생지의 지리적 위치와 군락의 유전적 연관성을 찾을 수 없었으며 이러한 경향은 AMOVA 결과 및 주성분분석에서도 확인할 수 있었다. 따라서 국내 가시오갈피의 유전자원보존을 위해서는 자생지 보호와 더불어 현지의(ex situ)보존에서는 군락당 소수 개체를 다수의 군락에서 선발하는 군락 위주의 선발이 효과적일 것으로 생각된다.
가시오갈피 체세포 배를 이용한 우량종묘의 대량생산체계를 확립할 목적으로 체세포 배의 생물반응기 배양을 통해 얻은 식물체의 순화에 관한 기초시험을 수행하였다. 가시오갈피 기내배양 식물체의 토양활착은 밀폐된 공간보다 비가림 하지 않은 차광막조건에서 양호하였고 순화에는 Klasmann 상토와 원예용상토가 좋았다. 배양실 10도와 차광막에서 3월20일 순화한 기내식물체의 순화 율은 모두 90% 이상으로 양호하였다. 배양실조건에서는 $26^{\circ}C$의 순화온도에서는 10% 이하의 극히 저조한 순화 생존율을 보였으나 포장 차광막조건에서는 최고 온도가 $30^{\circ}C$를 넘는 5월20일 순화 처리구에서도 68%의 높은 순화생존율을 보여 불리한 환경조건에서 차광막순화가 순화에 더욱 적합하였다. 차광조건으로는 50% 차광망 처리가 적합하였다. 차광막에서 순화한 식물체의 묘 소질은 3월10일 순화를 시작한 식물체가 가장 좋았다.
목적 : 가시오갈피 뿌리 추출물(Extract of Eleuthrococcus senticosus Maxim root, ESMR)의 면역세포의 활성에 미치는 효과와 마우스 종양세포에서 세포독성 및 방사선 병용효과를 알기위해서 본 연구를 시행하였다. 대상 및 방법: 가시오갈피 뿌리(250 g)를 80% 메탄올로 추출한 다음, 감압농축 및 동결과정을 통해 분획을 얻었다. 세포 주는 섬유육종세포를 이용하였으며, 방사선조사는 저 에너지(250 KV)용 방사선 기기를 사용 하였다. 가시오갈피 추출물의 면역세포에 미치는 활성효과를 알아보기 위해서 마우스 비장 및 흉선세포의 생존율 측정과 비장 및 흉선림프구 아집단을 측정하였다. 세포독성 정도를 알아보기 위하여 clonogenic assay법을 이용하였다. 방사선조사 단독군의 경우 2, 4 및 6 Gy를 마우스 섬유육종세포(FSa II)에 조사하였으며, 가시오갈피와 방사선 병용군의 경우 0.2 mg/ml 농도의 가시오갈피를 방사선조사 1시간 전에 마우스 섬유육종세포에 접촉시켰다. 결 과: 가시오갈피 /뿌리 추출물 각각 10 ${\mu}g/ml$과 $100{\mu}g/ml$을 첨가한 마우스 비장 및 흉선세포 생존율은 다음과 같았다. 마우스 비장세포는 각각 $8.8{\pm}1.7%$와 $37.7{\pm}2.1%$로 증가하였으며, 흉선세포에서는 100 ${\mu}g/ml$에서 $16.7{\pm}1.6%$로 증가하였다. ESMR을 경구 투여한 마우스 비장 및 흉선림프구는 다음과 같았다. 마우스 비장세포의 B cell은 41.5 $({\pm}1.3)$에서 46.0 $({\pm}1.5)%$로, T cell은 16.9 $({\pm}0.9)$에서 22.3 $({\pm}1.2)%$로 증가하였으며, 특히 Helper T (Th) cell은 10.4 10.4 $({\pm}0.7)$에서 14.2 $({\pm}0.8)%$로, Cytotoxic T (Tc) cell은 3.6 $({\pm}0.4)$에서 5.6 $({\pm}0.3)%$로 증가하였다. 그러나 마우스 흉선세포에서 T림프구의 증가율은 거의 보이지 않았다. 마우스 섬유육종 세포에서 ESMR의 세포독성을 나타내는 생존분율은 0.2, 2.0 mg/m에서 각각 $0.36{\pm}0.02$, $0.05{\pm}0.02$으로 나타났다. 마우스 섬유육종 세포를 접종한 마우스에 ESMR 0.2 mg/ml 농도를 1시간 동안 접촉시킨 다음, 방사선조사량 2, 4 및 6 Gy를 조사한 후 얻은 생존분물은 0.39, 0.22 및 0.06이었으며, 방사선조사 단독군의 경우는 0.76, 0.47 및 0.37로 나타났다. 그리고 두 군간의 차이는 통계학적 의미를 나타냈다(p<0.05). 결 론: 가시오갈피 뿌리 추출물은 in vitro 실험에서 마우스 비장세포의 생존율을 증가시켰다. In vivo 실험에서는 마우스 비장 내 B세포 및 T세포를 증가시켰으나, 마우스 흉선세포에 대해서는 증가를 보이지 않았다. ESMR은 마우스 섬유육종 세포에 대해 강한 세포독성 효과를 나타냈다. FSa II를 접종한 마우스에서 방사선 단독 보다 ESMR을 병용한 경우 방사선에 의한 세포손상이 약 50% 이상 증가되었으며, 두 군간의 차이는 통계학적 의미를 나타냈다(p<0.05).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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