The beneficial effect of glycerol as a cryoprotectant, especially for sperm cryopreservation, has been shown in many studies. However, glycerol is toxic to living cells, and boar sperm in particular show greater sensitivity to glycerol than sperm from other domestic animals. Amides have been studied as alternative cryoprotectants for freezing stallion sperm. Sperm frozen in methylformamide or dimethylformamide as cryoprotectants show similar motility when thawed compared with sperm frozen in glycerol. We evaluated the cryoprotective effects of dimethylformamide on boar sperm freezing. To test the effect of amides, the concentration of boar semen was adjusted to $10^9sperm/mL$, and seminal plasma was removed using Hulsen solution. After centrifugation, the pellet was diluted in modified-Modena B extender. Lactose-egg yolk (LEY) extender was used as the cooling extender. The freezing extender was madeed aaddition of the optimal amount of glycerol and amides to LEY-Glycerol-Orvus ES Paste extender, and this extender was used for the second dilution. Diluted sperm were frozen in liquid nitrogen using the 0.5 mL straw method. Sperm frozen in extender with glycerol as a cderol were compared with those frozen in extender including the different amides. Sperm were tested for motility, viability, the sperm chromatin structure assay, and normal apical ridge after thawing. The percent of motile sperm diluted in glycerol was as high as that in the stallion study (61%). Dimethylformamide showed positive effects on sperm quality and was better than glycerol. Methylformamide provided similar sperm quality as glycerol. Therefore, dimethylformamide is useful for reducing cryoinjury in boar sperm and is expected to be useful as an alternative cryoprotectant.
Kim, Hyejeong;Jeong, Haengdueng;Cho, Yejin;Lee, Jaehoon;Nam, Ki Taek;Lee, Han-Woong
Laboraroty Animal Research
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제34권4호
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pp.257-263
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2018
Trefoil factor 1 (TFF1, also known as pS2) is strongly expressed in the gastrointestinal mucosa and plays a critical role in the differentiation of gastric glands. Since approximately 50% of all human gastric cancers are associated with decreased TFF1 expression, it is considered a tumor suppressor gene. Tff1 deficiency in mice results in histological changes in the antral and pyloric gastric mucosa, with severe hyperplasia and dysplasia of epithelial cells, resulting in the development of antropyloric adenoma. Here, we generated Tff1-knockout (KO) mice, without a neomycin resistant ($Neo^R$) cassette, using the clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9 (CRSIPR/Cas9) system. Though our Tff1-KO mice showed phenotypes very similar to the previous embryonic stem (ES)-cell-based KO mice, they differed from the previous reports in that a reduction in body weight was observed in males. These results demonstrate that these newly established Tff1-KO mice are useful tools for investigating genetic and environmental factors influencing gastric cancer, without the effects of artificial gene insertion. Furthermore, these findings suggest a novel hypothesis that Tff1 expression influences gender differences.
결정방위 (100)인 단결정 P형 실리콘 기판으로 N+PP+ 태양전지를 제작하였다. 뒷면의 P+층의 형성은 940℃에서 60분간 boron nitride를 사용하는 첫번째 boron predeposition과 boron glass를 제거하지 않고 1145℃에서 3시간 동안 행하는 두번째 predeposition으로 이루어지며 boron 확산층의 어닐링은 1100℃에서 40분간 하였다. 앞면의 N+ 층의 형성은 900℃에서 7∼15분동안 POCI3 source를 사용하는 Phosphorus Predeposition으로 이루어지며 어닐링은 800℃에서 1시간 동안 dryO2분위기로 하였다 금속전극층의 형성은 Ti, Pd, Ag의 순으로 앞, 뒷면에 이들 금속들을 질공증착한 후 사진식각을 함으로써 이루어지며 이에 다시 전기도금을 하여 전체 전극층의 두께를 3∼4μm정도로 증가시켰다. 표면 광반사를 줄이기 위해 앞면에 400℃에서 silicon nitride를 입혔으며 마지막으로 550℃에서 10분간 alloy를 함으로써 금속전극의 신뢰도를 높혔다. 그 결과 제작된 면적 3.36㎠의 N+PP+ 전지들은 100mW/㎠의 인공조명하에서 단락전류 103mA, 개방전압 0.59V ,충실도 0.8을 보였다. 따라서 실제 전면적(수광면적)효율이 14.4%(16.2%)가 되어 BSF가 없는 N+P 전지의 11%전면적 변환효율에서 약3.5%의 효율이 개선되었다.
To examine the critical effect of oxygen concentration on embryonic development, in vitro fertilized embryos were cultured in media(TCM199 vs. SOF) supplemented sera(1O% FCS vs. 10% HS) with and without bovine oviduct epithelial cells under two gas atmosphere (5% $CO_2$ in air vs. 5% $CO_2$, 5% $O_2$, 90% $N_2$). Oocytes, obtained from abattoir ovaries, were matured in EGF containing TCM199 medium co-cultured with BOEC for 24 hours, followed by exposure to frozen-thawed, heparin4reated spermatozoa in TALP for 30 hours. And then early embryos(1~2 cell) were cultured in both TCM199 and SOF supplemented with 10% FCS or 10% RS under 5% $CO_2$ in air or 5% COi, 5% $O_2$, 90% $N_2$. Development to morulae and blastocysts was recorded on days 7, after the start of in vitro fertilization. The developmental rates of in vitro fertilized embryos to morulae and blastocysts cultured in SOF with BOEC under 5% $CO_2$, 5% $O_2$, 90% $N_2$(24.4%) were significantly(p<0.05) higher than cultured in SOF with BOEC under 5% $CO_2$ in air(14.1%) at seven days after in vitro fertilization. When early bovine embryos were cultured in TCM 199 and SOF under two different gas atmosphere, there were no significant differences in the developmental rates to morulae and blastocysts between supplements of 10% FCS and 10% HS. The rates of development to morulae and blastocysts were significantly(p<0.01) higher in TCM 199 with BOEC(24.7%) than TCM199 without BOEC(10.9%) under 5% $CO_2$ in air, otherwise SOF without BOEC(36.4%) were significantly (p<0.05) higher than in SOF with BOEC (24.4%) under 5% $CO_2$, 5% $O_2$, 90% $N_2$. In summary, these experiments have proved that the culture system in SOF supplemented 10% ES is effective on in vitro development of early bovine embryos under 5% $CO_2$, 5% $O_2$, 90% $N_2$. In addition, it is effective to development of bovine embryos that TCM 199 should be co-cultured with BOEC and SOF should be cultured without somatic cells under two different gas atmosphere.
Surapaitoon, Arpa;Suttiprapa, Sutas;Mairiang, Eimorn;Khuntikeo, Narong;Pairojkul, Chawalit;Bethony, Jeffrey;Brindley, Paul J.;Sripa, Banchob
Parasites, Hosts and Diseases
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제55권3호
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pp.295-304
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2017
Opisthorchis viverrini infection induces chronic inflammation, and a minor proportion of infected individuals develop advanced periductal fibrosis (APF) and cholangiocarcinoma (CCA). Inflammatory cytokines and/or their gene polymorphisms may link to these biliary pathologies. We therefore investigated associations among cytokine gene polymorphisms and cytokine production in 510 Thai cases infected with O. viverrini who presented with APF+ or APF-, as established by abdominal ultrasonography as well as in patients diagnosed with CCA. Levels of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines were determined in culture supernatants after stimulation of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) with O. viverrini excretory-secretory (ES) products. Pro-inflammatory cytokines, IL-$1{\beta}$, IL-6, IFN-${\gamma}$, LT-${\alpha}$, and TNF-${\alpha}$ were significantly increased in CCA patients compared with non-CCA (APF- and APF+) cases. Polymorphisms in genes encoding IL-$1{\beta}$-511C/T, IL-6-174G/C, IFN-${\gamma}$+874T/A, LT-${\alpha}$+252A/G, and TNF-${\alpha}$-308G/A were then investigated by using PCR-RFLP or allele specific-PCR (AS-PCR) analyses. In the CCA cases, LT-${\alpha}$+252A/G and TNF-${\alpha}$-308G/A heterozygous and homozygous variants showed significantly higher levels of these cytokines than the wild type. By contrast, levels of cytokines in wild type of IFN-${\gamma}$+874T/A were significantly higher than the variants in CCA cases. IFN-${\gamma}$+874T/A polymorphisms were associated with advanced periductal fibrosis, whereas IL-6-174G/C polymorphisms were associated with CCA. To our knowledge, these findings provide the first demonstration that O. viverrini infected individuals carrying several specific cytokine gene polymorphisms are susceptible to develop fibrosis and CCA.
해방풍이 가지는 건강 기능성 소재로서의 가치를 확인하고자, 해방풍 부위별 용매추출물의 항산화 활성 및 면역조절 효과를 조사하였다. 해방풍 부위별 용매추출물의 추출 수율은 10.73-30.57이며, 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량은 해방풍 잎 70% 에탄올 추출물(EL)에서 각각 10.79 g/100 g 및 2.01 g/100 g으로 가장 높은 값을 나타내었다. DPPH radical 및 ABTS radical 소거활성은 해방풍 잎 70% 에탄올 추출물(EL)이 $100-1,000{\mu}g/mL$ 농도에서 12.90-84.70% 및 11.78-57.64%로 가장 우수한 radical 소거활성을 나타내었으며, superoxide radical 소거활성 및 FRAP 활성은 해방풍 잎 70% 에탄올 추출물(EL)이 $100-1,000{\mu}g/mL$ 농도에서 각각 49.91-84.05% 및 $255.38-975.28{\mu}M$로 가장 우수한 활성을 나타내었다. 대식세포주인 RAW 264.7 세포에 해방풍 부위별 용매추출물을 처리하였을 때 nitric oxide 생성 억제능을 확인하기 위해 분석한 결과, 추출용매에 따른 nitric oxide 생성량은 70% 에탄올 및 70% 메탄올 추출물에서 가장 낮은 생성량을 보였으며, 해방풍 부위별에 따른 nitric oxide 생성량은 뿌리, 잎 및 씨앗 순으로 낮았다. 그 중에서 해방풍 뿌리 70% 에탄올 추출물(ER)에서 가장 낮은 nitric oxide 생성량을 보여 우수한 nitric oxide 억제 효과를 확인하였으며, 이를 이용하여 기능성 소재, 미용식품 및 화장품 제조용 원료 등 다양하게 활용 가능할 것으로 사료된다.
나트륨 유황전지(NAS)는 대용량 에너지 저장시스템(energy storage system, ESS) 중 하나로서, 최근 풍력에너지, 태양에너지, 해양에너지 등 그린재생에너지의 사용증가로 ESS에 대한 수요가 급증함에 따라 NAS 전지에 대한 관심이 고조되고 있다. NAS 전지는 에너지 밀도가 높고(납 축전지밀도의 3배), 사이클 수명이 길고, 자가방전이 없어 대용량 전력저장 시스템에 적합하다. NAS 전지는 양극으로 황(Sulfur), 음극으로 나트륨(Na), 고체전해질 및 분리막으로 ${\beta}$"-알루미나($Al_2O_3$)로 구성되어 있고, 양극 활물질인 황은 부도체이기 때문에 도전재인 탄소섬유(carbon felt)에 함침시켜 양극으로 사용해야 함으로, 양극재 구성 및 특성은 전지성능에 상당한 영향을 미치게 된다. 따라서 본 논문에서는 NAS 전지의 구성, 다황화나트륨($Na_2S_x$, 방전생성물) 및 양극재의 특성, 전지 성능에 미치는 영향인자들에 대해서 알아보고자 한다.
This study was performed to determine the antimelanogenic effect and tyrosinase inhibitory activities of anthocyanin rich fraction (AN-SLP) from Liriope platyphylla Wang et Tang seeds. Anthocyanins isolated from L. platyphylla seeds revealed the presence of four major anthocyanin components, which were tentatively identified as delphinidin-3-Oglucoside, delphinidin-3-O-rutinoside, petunidin-3-O-rutinoside, and malvidin-3-O-rutinoside using semipreparative HPLC, $^1H$-NMR, $^{13}C$ NMR, FAB-MS and LC/ES-MS. The inhibitory effect of AN-SLP on tyrosinase activity was studied using in vitro (against mushroom tyrosinase) and ex vivo (against B16 melanoma cell tyrosinase) models. Cellular tyrosinase activity was decreased by AN-SLP treatment in B 16 melanoma cells through dose dependent manner, but AN-SLP did not inhibit mushroom tyrosinase and L-DOPA oxidation directly. AN-SLP showed melanin inhibition by 53.2% at 50 ${\mu}g/m{\ell}$ which was 0.7 times more efficient than the antimelanogenic effect of commercial arbutin and kojic acid (36.5%) also did not show cell toxicity. Additionally, AN-SLP inhibited the activity of ${\alpha}$-glucosidase and the glycosylation of tyrosinase in melanoma cell. The resulting unsaturated glycosylation of tyrosinase makes it unstable and disturb correct transportation. From theses results, we conclude that AN-SLP could be used as anti-melanogenic agent for skin whitening.
목적: 본 연구는 노인성 황반변성(age-related macular degeneration, AMD)의 병인으로 잘 알려진 A2E의 광산화가 자외선 차단렌즈나 brown 착색렌즈에 의해 억제되는가를 알아보고자 하였다. 방법: 두 분자의 all-trans-retinal과 한 분자의 ethanolamine을 합성하여 만든 A2E에 청색광(420~470 nm, $94mW/cm^2$)을 3분 동안 조사하여 광산화를 유도하였다. UV 차단 및 brown 착색 안경렌즈의 A2E의 광산화 저해 효과는 광산화되지 않고 남아있는 A2E의 흡광도와 HPLC chromatogram 분석을 통하여 확인하였다. 결과: 자외선 차단렌즈는 청색광 조사로 유발되는 A2E의 광산화를 억제하지 못하였다. 반면 Brown 착색렌즈에서는 가시광선 차단율이 15%인 경우 A2E의 광산화율에는 별차이가 없었지만, 55%와 86% 차단된 렌즈에서는 각각 9.98%, 16.55%의 A2E 광산화 억제 효과를 보였다. HPLC로 분석한 잔존 A2E량을 확인해 보면 렌즈로 차단하지 않은 A2E의 잔존량은 $199.29{\pm}26.53{\mu}M$ 이었으나, 55% 차단율을 가진 brown 렌즈는 $264.58{\pm}31.91{\mu}M$, 86% 차단율을 가진 렌즈에서는 $402.93{\pm}26.68{\mu}M$의 A2E 잔존량을 보여 A2E 광산화 억제효과가 있음을 확인하였다. 반면, 자외선 차단렌즈의 경우에는 잔존량 분석에서도 광산화 억제효과가 없는 것으로 나타났다. 결론: 본 연구결과를 통하여 brown 착색 안경렌즈는 노인성 황반변성의 원인물질인 A2E의 광산화를 억제하는 효과가 있는 것으로 알 수 있었다.
목적 : 방사선조사가 세포내재성 병원균인 Listeria monocytogenes (LM)의 감염에 미치는 영향과 함께 감염면역과 밀접한 관계가 있는 대식세포에서의 $TNF-\alpha$ 및 Nitric oxide (NO) 생산능의 변화와 비장세포에서의 $IFN-\gamma$ 및 IL-2생산능에 미치는 영향을 알아보고자 본 실험을 시행하였다. 대상 및 방법 : 실험동물로는 BALB/c 마우스를 사용하였으며 Co-60 원격치료기를 이용하여 방사선을 조사하였다. LM감염에 미치는 영향을 관찰하기 위해서 방사선조사 1일후 $10^5$의 LM균을 복강내에 주사하고 1일, 3일, 5일후에 비장조직에서 LM생균수를 측정하였다. 방사선조사가 마우스의 생체내에서와 시험관내에서의 $TNF-\alpha$의 생산능에 미치는 효과를 관찰하기 위해서 각각 LPS로 유도하여 L929/Actinomycin D assay에 의해 $TNF-\alpha$량을 측정하였다. $IFN-\gamma$의 생성능은 방사선조사후 비장을 적출하여 비장세포액을 제조하여 Concavalin A (Con-A)로 자극한 후 정량검사를 하였다. IL-2의 생성능은 $IFN-\gamma$실험에서와 같이 비장세포를 얻어서 Con-A로 자극하여 CTLL-2세포의 성장촉진능력을 관찰함으로써 판정하였다. 방사선조사가 복강내 대식세포에서 생산되는 NO에 미치는 영향도 관찰하였다. 결과 : 방사선 (300cGy)을 조사한 군에 LM을 감염시킨 1일후 비장으로부터 검출되는 생균수는 대조군에 비해 감소하였으나 감염 3일 5일후의 생균수는 대조군에 비하여 오히려 증가하였다. 시험관내 복강대식세포에 방사선 (100-850cGy)을 조사하면 1일후 생산되는 $TNF-\alpha$의 양은 대조군에 비하여 증가하였으나, 방사선조사 (100-600cGy) 5일후 수집된 복강대식세포에 의한 $TNF-\alpha$의 생산은 오히려 감소하였고. 방사선조사 (300cGy)후 LM감염시 5일후 유도된 생체내 $TNF-\alpha$의 생산도 대조군에 비해 감소하였다. 방사선 (300cGy)을 조사한 마우스로부터 적출한 비장세포로부터 생산되는 $IFN-\gamma$와 IL-2의 양은 대조군에 비해 감소하였다. NO의 양은 100cGy 및 300cGy조사시 대조군에 비해 증가하였으며 그 이상 조사량을 증가하면 점차 감소하였다. 결론 : 방사선조사후 세포내재성 병원균인 LM감염에 대한 초기 저항성의 증가와 감염중반이후의 저항성 감소는 대식세포에서의 초기 $TNF-\alpha$ 생산능 증가후 감소, 그리고 T림프구에서의 $IFN-\gamma$및 IL-2 생산능 감소와 관련이 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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