A high-throughput screening strategy was developed to simplify the selection process for improved mannitol producing strain after chemical mutagenesis. Ethylmethyl sulfonate (EMS) was used as a chemical mutagen to alter the fructokinase-I gene which is an essential enzyme to metabolize fructose for growth. Leuconostoc mesenteroides treated with EMS were plated on the modified MRS solid medium containing fructose as a sole carbon source. Strains showing inhibited growth were primarily selected to evaluate the mannitol producing ability. By applying this strategy, L. mesenteroides ATCC 8293 M1, L. mesenteroides ATCC 9135 M3 and L. mesenteroides D1 M3 showed improvement in mannitol production.
돌연변이유기를 통한 유용견전형질의 해조류품종을 개발하기 위해 화학적돌연변이유발원인 Ethyl-methanesulphonate(EMS)에 대한 구멍갈파래(Ulva pertusa Kjellman) 엽체의 감수성을 검토하여 효과적인 돌연변이유기조건을 찾고자 하였다. EMS를 처리한 배지에 엽체를 생장시키며 변이를 유발시키고자 하였을 때, $0.05{\%}$와 $0.025{\%}$의 EMS 처리구에서 각각 $100{\%}$와 약 $20{\%}$의 생장억제가 일어났다. 한편 고농도의 EMS액에 엽체를 일정시간 침적한 후 정상배양함으로서 변이를 유발코자 했을 때, $1.0{\%}$ EMS액에 40분과 $0.5{\%}$ EMS액에 80분 처리한 경우 각각 $100{\%}$와 약 $10{\%}$의 생장억제가 일어났다. EMS 처리된 엽체는 생장형과 체색이 모체와 전혀 다른 변이체로 나타나기도 하였는데 이들의 polypeptide 일부에 변화가 있음이 SDS-PAGE로 조사되었다.
A new bacterial strain, was isolated from activated sludge, identified and named P. aeruginosa EMS1. The new strain produced surface-active rhamnolipids by batch cultivation in mineral salts medium with waste flying oils. The mutant strain KH7, designated P. aeruginosa EMS1, derived by random mutagenesis with N-methyl-N-nitro-N-nitrosogoanidine treatment producing high levels of the biosurfactants was selected by an ion-pair plate assay. The mutant strain KH7 showed 4-5 times more hydrocarbon emulsification as compared to the parent when grown on waste frying oils and various hydrocarbons. Furthermore, P. aeruginosa EMS1 and mutant strain KH7 was also able to use whey as a co-substrate for growth and biosurfactant production. As results of this study, mutant strain KH7 is a very efficient biosurfactant producer, and its culture conditions are relatively inexpensive and economical. Rhamnolipid is synthesized by the rhlAB-encoded rhamnosyltransferase. To be convinced of these genes, we performed PCR based on P. aeruginosa PAO1 whole-genome database. rhl gene cluster nucleotide and amino acid sequences were compared for both parent and mutant. Comparison of nucleotide sequence of rhlAB, there were usually terminal's codons exchange.
염 내성 돌연변이체를 선발하기 위하여, ethyl methane sulfonate(EMS)로 처리된 돌연변이 종자 집단을 사용하였다. 150 mM NaCl 고염 스트레스 하에서 종자 발아 내성을 보이는 세 종류의 EMS 돌연변이체를 선발하였다. 세 종류의 EMS 돌연변이체들 중, salt tolerance 42-14(sto42-14) 돌연변이체는 175 mM NaCl 고농도에서 종자 발아율이 대조구(WT)에 비해 7배 이상의 높은 발아율을 보였다. 또한 내염성 sto42-14 돌연변이체는 glucose(Glc)에 대해서도 비감수성을 갖고 있음을 관찰되었고, 흥미롭게도 sto42-14돌연변이체에 $20{\mu}M$ gibberellin(GA)을 처리한 결과, 대조구에 비해 하배축과 뿌리의 생장이 억제됨을 관찰할 수 있었다. 이러한 결과를 바탕으로, 고염 내성 sto42-14 돌연변이체는 Glc 뿐만 아니라 GA호르몬 반응에도 관련되어져 있음을 알 수 있다.
Wasabia japonica종자의 생장조절물질에 의한 발아율 돌연변이 유도, 유도체의 핵형 분석과 isozyme pattern을 조사한 결과는 다음과 같다. 1) 고추냉이의 종자 발아는 $GA_3$ 100ppm 처리 시 36%, BAP 10ppm 처리 시 32%, $GA_3$ 100ppm+BAP 10ppm 조합 처리 시 65%의 높은 발아율을 나타냈다. 2) colchicine과 EMS처리로 인한 돌연변이 유도에 따른 생존율은 발아전 처리의 경우 colchicine 0.5%일때 62% 생존율을 보이며, 발아 후 처리는 colchicine 0.5% 일때 85%, EMS 0.06% 일때 55%의 생존율을 보였다. 3) colchicine과 EMS처리로 유도된 식물체의 핵형 분석은 colchicine 0.5%처리로 유도된 식물체에서 다수의 4배체를 관찰할 수 있있으며, EMS 0.06% 처리의 유도체에서는 정상 배수체만이 관찰되었다. 4) 돌연변이원으로 유도된 식물체의 peroxidase pattern은 colchicine 처리 식물체가 정상체와 다른 양상 (1 band)을 보이는 반면, EMS처리 식물체는 정상체와 같은 양상 (3 band)을 보였다.
After DNA damage, umuDC is the only SOS operon that must be induced to promote SOS mutagenesis in Escherichia coli. The recombinant plasmid pBC401 and pBC402 were constructed to fuse the lac structural genes with promoter region of umuDC operon to induce the expression of lacZ gene by DNA damage. We transformed the plasmid pBC401 and pBC402 into E. coli MC1061, lacZ deleted strain and determined the activity of $\beta$-galactosidase for various mutagen; UV, mitomycin C (MMC), N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), 4-nitroqunoline-1-oxide (NQO), ethyl methanesulfonate (EMS). The $\beta$-galactosidase activities of PBC401 and pBC402 for UV, MMC, and NQO were increased in proportion to expression time until 3 hours thereafter, the activities were constant or slightly decreased. The activities for MNNG and EMS were not so high as for UV, MMC, and NQO. When MNNG and EMS were treated, $\beta$-galactosidase activity of pBC402 was slightly lower than pBC401 but when UV, MMC, and NQO were treated in pBC402, $\beta$-galactosidase activity was slightly higher than in pBC401. Therefore, the pBC402 was better than the pBC401 in terms of sensitivity for frameshift mutagen. We suggest that the plasmid pBC401 and pBC402 are easy to detect mutagens which cause frameshift mutation rather than point mutation.
생물 계면활성제의 개발을 위해 MNNG(N-Methyl-N-Nitro- Nitrosoguanidine), EMS, UV radiator random mutation을 통해 가장 우수한 biosurfactant 생산 균주를 선별하였는데 MNNG를 처리한 균주가 유화활성 1.950, 표면장력 29.0dyne/cm으로 공시균주인 Pseudomonas aeruginosa EL-MS 유화활성 0.456과 표면장력 33.0dyne/cm에 비해 우수하였다.
In order to study the mechanism for the adaptation to salt stress, we mutagenized budding yeast Saccharomyces cerevisiae with Ethylmethane sulfonate, and isolated salt-tolerant mutants. Among the salt-tolerant mutants, two strains exhibit additional temperature sensitive phenotype. Here, we report that these two salt-tolerant mutants are specific to {TEX}$Na^{+}${/TEX} rather than general osmotic stress. These mutant strains may contain mutations in the genes involved in {TEX}$Na^{+}${/TEX} home-ostasis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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