• 제목/요약/키워드: EITB

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SDS-PAGE 및 면역이적법에 의한 호르텐스극구흡충 항원분획과 항체반응 양상 (SDS-PAGE and Immunoblot Patterns of Echinostoma hortense in Experimentally Infected Rats)

  • Yong-Suk Ryang;Yoon-Kyung Jo;Ji-Sook Lee
    • 대한의생명과학회지
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    • 제4권1호
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    • pp.73-76
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    • 1998
  • 저자들은 호르텐스극구흡충의 항원 단백질과 일부 특이 항원을 알아보기 위해 다음과 같이 실험을 실시하였다. 호르텐스극구흡충 충체를 추출하여 제조한 조항원을 재료로 SDS-PAGE를 실시하여 항원 단백질을 분석하였다. 그리고 흰쥐 (rat)에게 호르텐스극구흡충 피낭유충을 감염시켜 얻은 혈청 항체와, 호르텐스극구흡충 조항원과 면역증강보조제를 함께 투여하여 얻은 혈청 항체를 재료로 하여 EITB를 실시하여, 일부 특이 항원을 규명하였으며 성적은 다음과 같다. 즉, 조항원으로 SDS-PAGE를 실시한 결과는 200.2-8.2kDa까지 46개의 분획이 관찰되었고, 이중에서 특히 강하게 관찰된 단백분획은 200.2, 107.9, 86.8, 75, 69.8, 46.8, 43.5, 34.5, 20.9, 13.6, 12.6, 11.7, 8.2 kDa이었다. 그리고 EITB룰 실시하여 분석한 특이 IgG항체는 198-13.7 kDa까지 17개의 분획을 보였고, 특히 면역염색이 강하게 나타난 분획은 198, 123.4, 100.8, 91.1, 88.1, 62.8, 34.2, 32, 29.9, 18, 15.7, 13.7 kDa이었다.

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Anisakis 감염(感染) 가토(家兎)의 시기별(時期別) 항체검출(抗體檢出)에 대한 각종 항원(抗原)의 적용성(適用性) (Application of Various Antigens on the Detection of Antibody in Rabbits Infected with Anisakid Larvae)

  • 전복실;정명숙;주경환;임한종
    • 농촌의학ㆍ지역보건
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    • 제16권1호
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    • pp.70-78
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    • 1991
  • Antibody changes in experimental anisakiasis were observed by ELlSA and SDS-PAGE/EITB using various antigens : whole worm extract antigen(WWE), somatic antigen(SOM), excretory-secretory antign(ES), and hemoglobin antigen(HB) of Anisakis Type 1. The results obtained were as follows. l) Serum levels of IgG antibody by ELISA increased from 1st week of infection and reached their maximum titer at 5th week after infection, and decreased gradually thereafter. 2) The best result expressed as positive/negative ratio could be obtained when ES antigen was used. 3) Silver stained SDS-PAGE of each antigen showed at least 20 protein bands : In WWE, 286, 278, 262, 38, 18 Kd bands ; In SOM, 38 Kd band : In ES, 286, 65, 13 Kd bands ; In Hb, 61, 55, 38, 28, 26, 22, 20, 16, 15 Kd bands iepntibied as were major bands. 4) By EITB using WWE, Serum antibody recognized major protein with molecular weight of 86 Kd and 16 Kd. Using ES, 69, 59, 16 Kd bands were observed and using Hb, 28 Kd band was observed as specific band. In conclusion, excretory-secretory antigen(ES) of Anisakis larvae was most usable for ELISA.

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Immunoblot Patterns of Taenia asiatica Taeniasis

  • Jeon, Hyeong-Kyu;Eom, Kee-Seon S.
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제47권1호
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    • pp.73-77
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    • 2009
  • Differential diagnosis of Taenia asiatica infection from other human taeniases by serology has been tested. An enzyme-linked immunoelectrotransfer blot (EITB) was applied to subjected human sera and tapeworm materials. Thirty-eight proteins reactive to serum IgG were observed between 121 and 10 kDa in adult worms, and more than 22 serum-reactive components between 97kDa and 21.5kDa were observed in eggs of T. asiatica. Antigens of adult T. asiatica revealed immunoblot bands between 120 and 21.5 kDa against T. asiatica infected sera. Antigens of adult Taenia saginata revealed 110-100, 66, 58-56, and 46 kDa immunoblot bands against T. asiatica infected sera. Antigens of adult Taenia solium also revealed 99-97, 68-66, and 46 kDa bands against T. asiatica infected sera. The immunoblot band of 21.5 kDa exhibited specificity to T. asiatica.

Spirometra erinacei에서 IgE와 IgG 항체를 유도하는 항원성분의 면역조직화학적 위치와 특성 (Immunohistochemical Localization and the Characteristics of Antigenic Compnent Inducing IgE and IgG Antibodies in Spirometra erinacei)

  • Chang-Hwan Kim;Sook-Jae Seo;Hong-Ja Kim;Kee-Hoon Kwak
    • 대한의생명과학회지
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    • 제2권1호
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    • pp.1-12
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    • 1996
  • Spirometra erinacei의 유충인 sparganum(metacercoid)에 감염되었을 때 호산성백혈구의 증가와 IgE 항체역가가 증가된다는 보고가 있다. 이 기생충에 감염되었을 때 IgG 항체와 IgE 항체를 유도하는 충체의 항원성분의 소재를 면역세포조직화학적 방법으로 충체의 성체와 유충에서 비교하였고, 또한 충체의 추출물을 SDS-PSGE와 EITB를 이용하여 IgG와 IgE 항체 유도 항원성분의 면역적 특성도 추구하였다. IgG와 IgE 항체 유도성분은 성체와 유충의 근층에서 공통적으로 분포되어 있었고, IgG 항원성분은 근층 뿐만 아니라 외피층과 유조직층에서도 반응이 나타났으며, 성체의 수태편절에서는 자궁 내에 있는 충난의 표면에서도 반응이 나타났다. 충체의 외피층에서 항원성분을 면역황금 표지법으로 관찰한 결과, 충체의 외피층(tegument)에서 IgG 항원성분의 분포밀도가 IgE 항원성분의 밀도보다 컸다. 충체의 추출물 중 IgG, IgE 유도 항원성 단백질의 면역학적 특성을 비교하였다. 성체의 추출물의 43개 분회 중 21개 분획이 IgG 항원성분으로서 반응하였고, IgE 항원성분으로는 21개 분획에서 반응하였다. 이들 중 11개 분획 (410, 304, 268, 174, 162, 116, 92, 86, 72, 60, and 59 kDa)에서 IgG와 IgE가 교차반응하였으며, 유충의 추출물의 36개 분획 중 IgG 항원성분으로 22개의 분획에서 반응이 나타났고, IgE 항원성분으로는 13개의 분획에서 반응하였으며, 이들 중 5개 분획(204, 116, 92, 79, and 59 kDa)에서 IgG와 IgE가 서로 교차반응하였다.

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우리나라의 주요 기생충질환(寄生蟲疾患)에 대한 혈청역학적(血淸疫學的) 조사(調査) (Studies on the Seroepidemiology of Helminthic Diseases in Korea)

  • 임한종;이준상;주경환;정명숙
    • 농촌의학ㆍ지역보건
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    • 제16권1호
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    • pp.48-60
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    • 1991
  • 폐흡충증, 스팔가눔증, 낭미충증, 아니사키스증, 개회충증 및 간흡충증의 혈청역학적 조사를 ELISA(Enzvme-linked immunosorbent assav)를 이용하여 시행하고 그 결과를 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 총 6,074명에 대한 검사결과 19.7% 에서 한 종류 이상의 혈청항체 양성을 나타내었다. 이중 아니사키스증은 8.1 %, 개회충증은 5.6%, 간흡충증은 3.6 %, 폐흡충증은 1.7%, 낭미충증은 4.5%, 스팔가눔증은 2.6%의 혈청항체 양성률을 나타내었다. 부산지역은 총 450예를 검사하여 아니사키스가 2.9%, 간흡충이 2.8%의 항체양성률을 보였고, 대전지역에서는 675명중 개회충이 6.7%, 아니사키스가 3.7% 로 비교적 높은 양성률을 나타내었다. 춘천군에서는 875명중 아니사키스증의 혈청항체가 3.4%에서 양성을 보였고 동해시지역에서는 675명 중 아니사키스가 16.9%로 나타났다. 전남 남부지역의 1,122명은 전반적으로 높은 혈청항체 양성률을 보였는데 아니사키스가 16.9%, 낭미충증항체가 12.7 %에서 양성이었고 폐흡충은 3.3%가 양성이었다. 전북일부지역 702명에 대한 조사에서는 낭미충증 항체가 9.3%에서 양성이었고 아니사키스도 4.3% 의 양성률을 나타내었다. 한편 경북 일부지역 900명에 대한 조사에서는 아니사키스와 개회충 항체가 10.6%, 16.1 %로 나타나 높은 양성률을 보였고, 제주지역에서 675명을 조사하여 아니사키스에 대한 혈청항체가 6.7% 로 비교적 높게 나타났다. 이상의 성적은 물론 윤충류 상호간의 교차반응등 보다 확실한 검정이 필요하겠으나 우리나라 사람 있어서 몇몇 윤충류 질환에 대한 혈청항체 양성률을 조사한 자료로서 앞으로의 혈청역학적 조사에 기초자료가 될 수 있을 것으로 생각한다.

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중국 연변지역 주요 기생충질환에 대한 혈청역학적 조사 (Seroepidemiology of helminthic diseases in Yanbian of the People's Republic of China)

  • 주경환;전복실;권혜수;조성원;이순옥
    • 농촌의학ㆍ지역보건
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    • 제23권2호
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    • pp.275-285
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    • 1998
  • 간흡충(Clonorchis sinensis), 폐흡충(Paragonimus westermani), 스팔가눔(sparganum), 뇌낭미충(Cysticercus cellulosae), 아니사키스(Anisakis spp.), 선모충(Trichinella spiralis), 개화충(Toxocara canis)에 대한 IgG항체반응을 ELISA를 이용하여 연변지역주민의 혈청역학적 조사를 시행하고 그 결과를 PC-SAS 시스템으로 통계분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1995년 10월부터 1997년 6월 사이에 수집된 총 975명의 혈청에 대한 검사결과 23.87%에서 한 종류이상의 혈청항체 양상을 나타내였다. 이중 간흡충증은 5.74%, 폐흡충증은 4.92%, 낭미충증은 1.54%, 스팔가눔증은 8.51%, 아니사키스증은 1.85%, 개회충증은 12.51%, 선모충증은 7.08%의 혈청항체 양성률을 나타내었다. 판정된 양성혈청을 통계분석한 결과 간흡충(p<0.01), 혜흡충(p<0.01), 아니사키스(p<0.05), 개회충(p<0.01), 선모충(p<0.01)의 각 연령그룹비교에서 통계학적으로 유의한 차이를 나타내었고 스팔가눔증은 성별 사이에 유의한 차이가 보였다(p<0.05). 간흡충과 폐흡충은 50대 연령층에서 높은 양성항체가를 나타내는 반면 개회충과 선모충은 20대에서 높은 항체가를 보여주었다. 또한 내과질병으로 않고 있는 환자혈청은 낭미충증을 제외한 6종류 윤충류에서 정상대조인과 비교하여 볼 때 모두 통계학적으로 유의한 차이를 나타내었다(p<0.05 혹은 p<0.01). 즉 환자가 정상대조인보다 혈청양성률이 훨씬 높았다. 이상의 결과는 물론 선충사이의 교차반응이 있을거라고 추측되며 정확한 진단을 위해서는 EITB를 시행해야 한다고 생각한다. 이번 조사는 중국 연변에서 처음으로 되는 혈청역학조사이며 앞으로 기생충진환 퇴치대책에 아주 중요한 기초자료가 될 수 있을 것으로 생각한다.

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효소면역전기영동이적법을 이용한 유조설고충 단세후군항체 및 환기혈청에 대한 항원특리성 분석 (Analysis of antigen specificity using monoclonal and polyclonal antibodies to cysticercus cellulosae by enzyme-linked immunoelectrotransfer blot technique)

  • 조승열;강신영;김석일
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제25권2호
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    • pp.159-167
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    • 1987
  • 기생충질환의 진단에도 이용하는 혈청학적 진단에서는 근록기생충항원과 교우반응이 나타나 특이도를 떨어뜨리는 경우가 있어 문제가 되고 있다. 진단용으로 사용하는 기생충노항원의 단백질 구성성분중 교*반응을 가장 잘 일으키는 것이 어떤 것인지를 알 수 있다면 특이도가 높은 항원을 제작하는 기본정보로 사용할 수 있을 것이다. 최근 SDS-폴리아크릴아마이드젤 전기영동(SDS-PAGE)과 효소면역전기영동이적법(EITB)을 이용하여 항원항체반응을 일으키는 단백질성분을 노항원중에서 구별할 수 있게 되었다. 이 연구에서는 유구낭미충의 낭액, 두절의 생리식염수추출액, 전낭미충추출액과 스파르가눔추출액, 포충낭액, 간질추출액, 간흡충추출액, 폐흡충추출액 등 8종의 항원에 대하여 유약낭미충증 환자 24명의 혈청과 본교실에서 제작한 단세포군항체가 어떻게 반응하는지 관찰하여 항원특이성을 분석하고자 하였다. SDS-폴리아크릴아마이드젤 전기영동은 길이 9cm, 두께 1.5mm인 10~15% linear gradient gel을 사용하였고 시료 $30{mu}l$를 sample buffier와 합께 $95^{\circ}C$에서 5분간 가열한 후 3~4시간 전기영동하였다. 분리된 단백질을 다시 100V에서 2시간 동안 Towbin buffer에서 전기영동하여 nitrocellulose 종이로 이적하였다. 그후 환자혈청(1 : 100), 단세포군항체(1 : 100)과 반응시키고 peroBidase-conjugated antihuman IgG(또는 perozidase-conjugated antimouse IgG), 기질의 순으로 반응시켜 발색하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. SDS-폴리아크릴아마이드젤 전기영동후 Coomassie brilliant blue R-250으로 염색한 바 유구낭미충 낭액에는 단백질대가 최소 23개 나타나고 그중 94, 64, 48, 39, 34, 24, 15, 10, 7kDa가 주단백질이었다. 두절추출액에는 단백질대 34개가 보였고 그중 94, 64, 39, 34, 26, 24, 21, 15, 10, 7kDa가 주단백질대이었다. 전낭미충추출액도 두절추출액과 동일한 소견을 보였다. 낭액항원과 충체추출액간에는 단백질 구성성분보다는 구성비의 차이가 심하였다. 스파르가눔 추출액은 28%, 포충낭액은 15%, 간질추출액은 22%, 간흡충추출액은 6개, 폐흡충추출액은 11개의 단백질대를 보였다. 2. 환자혈청 24개를 SDS-PAGE로 분리된 단백질대와 반응시킨 결과, 낭액항원에서는 평균 7.4개와 반응하였는 바 그중 152, 94, 72, 64, 48, 24, 15, 10, 7kDa 단백질이 가장 중요하였다. 두절 추출액과는 평균 6.3개와 반응하였고 그중 94, 64, 52, 39, 34, 15, 10kDa가 중요하였다. 스파르가눔추출액과는 평균 2.7개가 반응하였고 그중 130, 64kDa가 중요하였으며 포충낭액과는 평균 1개가 반응하였고 52, 27kDa가 중요하였다. 간질, 간흡충 및 폐흡충추출액과는 반응대가 관찰되지 않았다. 3. 단세포군항체는 낭미충낭액의 15, 10, 7kDa 및 두절추출액 10kDa와 반응하였다. 이상의 결과에서 유구낭미충의 구성단백질중 15, 10, 7kDa 등 저분자량단백질이 진단특이성이 높은 분획으로 판단하였다.

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유조낭고충 낭액에서 친화성 크로마토그래피로 분리한 항원 단백질의 생화학적 성상 (Biochemical properties of a purified protein in cystic quid of Taenia solium metacestodes)

  • 조승열;김석일;강신영;공윤
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제26권2호
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    • pp.87-94
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    • 1988
  • Kim et at.(1986)은 유구낭미충 낭액을 감작시켜 만든 단세포군 항체를 CNBr활성화 Sepharose 4B에 연결시켜 친화성 크로마토그래피를 실시하고 낭액에서 A-항원을 분리한 바 있다. 이 연구는 그 항원 단백질의 생화학적 성상을 관찰한 것이다. Disc-PAGE에 의해 4.5~10% 폴리아크릴아마이드 젤에서 나타내는 Rf간을 기초로 분자량을 측정한 결과 A 항원의 분자량은 150,000 dalton이었다. A-항원은 SDS-PAGE에서 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 polypeptide로 분획이 구별되었다. 10% 2-mcrcaptoethanol로 처리하지 않거나 $95^{\circ}C$에서 5분간 처리하지 않은 A-항원의 SDS-PAGE에서는 7,000 dalton의 polypeptide가 분리되지 않았다. A-항원의 등전점(PI)은 pH6.8이었다. 낭액항원의 각 분획에 반응하는 항체를 갖는 환자혈청으로 A-항원을 SDS-PAGE/EITB한 바 환자혈청은 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 부위에서만 반응하였다. 낭액 단백질의 약70%를 차지하는 A-항원은 면역학적으로 내열성을 가졌으며 포충(hydatid cyst) 낭액 항원중 Oriol et at.(1971)의 "Antigen B"와 생화학적 성상이 비슷한 단백질이었다.

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단세포군항체를 이용한 친화성 크로마토그래피에 의한 스파르가눔 항원의 순수분리 (Purification of antigenic protein of sparganum by immunoaBnity chromatography using a monoclonal antibody)

  • 조승열;강신영;공윤
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제28권3호
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    • pp.135-142
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    • 1990
  • 조직기생충증인 스파르가눔증은 우리 나라를 비롯하여 동양 여러 나라에서 드물지 않게 발생하고 있으므로 보조진단법으로서 쳔청학적 진단이 필요하다. 그러나, 현재 진단에 사용하는 항원인 스파르가눔의 생리식염수 추출액은 그 단백질 구성이 복잡하고, 낭미충중, 포충증, 폐흡충증 등과 혈청학적 교차반응을 일으키는 경우가 있어 개선의 여지가 많다. 이 실험은 스파르가눔 생리 식염수 추출액의 구성단백질 중 항원성이 높고, 교차반응이 적은 구성단백질 분회만을 단세포군항체를 이용하여 친화성 크로마토그래피로 분리하고 그 항원성을 평가하고자 하였다. 먼저 Sephacryl S-300 Superane을 통과시켜 스파르가눔 생리 식염수 추출액을 5 분획으로 나눈 결과, 분자량이 90kDa 이상으로 구성된 제1, 2 분획은 항원성은 높았으나 교차반응을 많이 일으키고 있었다. 제 3분획 의 주요 구성성분은 스파르가눔증 환자 혈청과의 SDS-PAGE/EITB를 통해 가장 민감한 반응을 보였던 36, 29 kDa 단백질이었다. 이어 스파르가눔 추출액으로 면역시킨 BALB/C mice 비장세포에서 기린한 단세포군항체 중 36,29 kDa에 반응하는 단세포군항체를 리간드로 친화성 크로마토그래피를 실시하여 36, 29 kDa 단백질을 순수하게 분리하였다. 이 두 단백질은 같은 항원결정 기를 지니고 있는 것으로 판단하였다. 순수분리한 항원의 항원성을 스 파르가눔 감염자 28명과 기타 질환자 및 건강 대조군 99명의 혈청으로 평가한 결과, 이 항원은 조항원(스파르가눔 추출액)에 비해 민감도는 같았으나(96.4%) 특이도는 86.8%에서 96.9%로 개선되었다.

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Immunoblot법을 이용한 낭미충증(囊尾蟲症)진단에 있어서 각종 항원(抗原)의 적용가능성(適用可能性) 검토(檢討)에 관한 연구(硏究) (Studies on the Applicability of Various Antigen Preparations in the Immunoblot Diagnosis of Cysticercosis)

  • 고영태;주경환;정명숙;임한종
    • 농촌의학ㆍ지역보건
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    • 제16권1호
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    • pp.79-89
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    • 1991
  • A systematic study was conducted to identify and isolate a serologically pertinent antigen with high specific activity and low cross reactivity from Cysticercus parenchymal antigen. Differential centrifugation of the homogenate yield three particulate and one soluble fractions ; the $480{\times}G$ pellets($CyL_2$), the $7650{\times}G$ pellet($CyL_3$), the $100000{\times}G$ pellet($CyL_4$), and $100000{\times}G$ supernatant($CyL_6$). We compared antigenicity of these antigens to that or cystic fluid antigens($CyF_1$), saline extract of cystic wall($CyL_1$), and n-butanol treated $GyL_4$ antigen ($CyL_6$) based on SDS-PAGE and immunoblot techniques. The data obtained were as follows : 1) The ratio of O.D. value of ELISA against cysticercosis positive pool sera to that of negative pool sera was highest when using $CyF_1$ as antigen. However the ratio was relatively low in case of $CyL_{3.4}$ and $CyL_5$. 2) We have noted in previous paper that most strong antigenic activities are present in 63Kd band with low cross reactivities. An effective serologic reagent must contain components that are recognized by most infected sera. 63Kd band met this criteria and could be considered as a reliable band for the diagnosis of cysticercosis. As far as 63Kd band concern, $CyL_5$ showed most strong activities without disturbance of cross reaction by EITB in spite of low applicability to microplate ELISA. 3) $CyL_5$ could detect the serum antibody of cysticercosis even in very low titers, around cut-off values of microplate ELISA, by immunoblot. It also could detect the cross reactivities of Echinococcus species, which showed high absorbance value in micro plate ELISA and some sparganosis cases. Further purification of this antigen will be able to represents a antigen that can be used in the diagnosis of cysticercosis.

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