• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제30권4호
• /
• pp.323-328
• /
• 1992

질트리코모나스의 항원 분석을 시행하기 위하여 병원성이 화인된 질트리코모나스(Trichamonas vaginnlis) 6개주(HY-1,2,3,9,10,13)의 항일을 sodium dodecyl sulfate - polyacrlyamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) 한 결과 Coomassie brilliant blue 염색상에서 peptide의 밀도 차이를 제외하고는 주간에 동일한 단백질 분포양상을 보였으며, 12kDa에서 170kDa까지 약 35개 정도의 분획이 관찰되었다. 또한 질트리코모나스 HY월주를 항원으로 하고 질트리코모나스 6개주에 대해 면역된 마우스의 항혈청을 이용하여 enzyme-linked immunoelectrotransfer blot(EITB)을 시행한 결과 각 주마다 서로 다른 반응양상을 보였으며, 51kDa과 96kDa에서 질트리코모나스의 특이한 공통 반응대가 관찰되었고, 각기 다른 6개주의 항원에 대해 HY-1주의 항혈청으로 ETTB한 결과 HY-1 함원(homologous antigen)과의 반응 양상과 타항친(heterologous antigen)과의 반응 양상간의 특이한 차이는 관찰할 수 없었다. 이상의 결과로 보아 질트리코모나스 각 주의 항원은 항인-항체 반응에서 주간에 이종(antigenic heterogeneity)을 형성하고 있는 것으로 보였으며, 41, 47, 55, 74 및 94kDa에서 질트리코모나스애 특이한 공통반응대를 보었으며, 이 부분이 숙주-기생충의 상 호관계에 있어서 중요한 의의를 내포하고 있을 것으로 생각된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제27권1호
• /
• pp.9-14
• /
• 1989

폐흡충중의 진단은 일반적으로 객담에서 충란을 검출하는 것이 가장 확실한 진단법으로 간주되고 있지만 이소기생의 경우는 물론, 본 기생충의 감염자 및 감염 강도의 감소로 인해 실제 폐에 기생한 경우에 있어서도 객담 검사의 민감도가 매우 낮아져 혈청학적 검사의 필요성이 점차 대두되고 있다. 따라서 식염수 추출액을 항원으로 하여 효소면역 측정법을 실시하는 방법으로 면역 진단을 실시하고 있으나 조항원의 단백 구성이 복잡하여 간흡충을 비롯한 몇몇 흡충류 감염자 혈청에서 교차 반응이 야기되고 있다. 그동안 정제 항원을 만들고자 하는 시도가 많았음에도 불구하고 특이 항원의 분리는 실제로 불가능하였다. 이와 같은 문제점을 보완하기 위하여 폐흡충 조항원을 SDS-PAGE로 전기영동한 다음 EITB를 이용하여 항원대별 항원성 및 특이성을 관찰하여 폐흡충 조항원의 폐흡충증 혈청에 대한 특이 반응대를 확인해 보고자 하였다. 실험에 사용된 항원은 실험적으로 개에 감염시켜 24주만에 얻은 폐흡충 성충의 식염수 추출액이며 3∼20%의 linear gradient gel에서 SDS-PAGE하였다. Silver 염색한 결과 229 kDa∼10kDa 사이에서 26개의 항원대를 구성하고 있었으며 주요 항원대에 대하여 EITB를 실시한 결과 폐흡충 감염자 혈청은 229, 91, 60, 50, 35∼31, 27, 25, 21, 17, 11 및 10kDa의 분자량을 갖는 항원대와 반응하였다. 간흡충 감염자 혈청은 35∼31, 19, 11및 17 kDa의 항원대와 반응하였고 낭미충 감염자 혈청은 229, 31∼31, 27, 25 및 17kDa의 항원대와 반응하였다. 광절열두조충 1예도 17 kDa의 항원대와 반응하였다. 따라서 91, 60, 21 및 10kDa의 항원대 중 일부가 폐흡충 조항원에 있어서 체홉충에 대한 종특이 항원대로 생각되었으며 향후 immunoblot을 이용한 폐흡충중의 면역진단에 이용될 수 있는 항원대로 간주할 수 있었다.

• 생명과학회지
• /
• 제5권2호
• /
• pp.63-69
• /
• 1995

Cockroach antigen have been known as a cause of allergic disease. German ockroach(Blattella germanica L.) was chosen because it has the highest distribution range and poulation density. To identify the common and specific antigens of adult and larval stage of german cockroach, we made monoclonal antibodies which were confirmen by SDS-PAGE and EITB. Anti-B. germanica antibody producing hybridomas were 24 among the total 960wells. Only 4 hybridomas did not have cross reaction to other species of cockroach and hluse dust mites(Dermatophagodies farinae and D. pteronyssius). SDS-PAGE revealed about 20 bands from 90Kd to 15Kd to 15Kd. ETB showed specific antigens a6 60, 72 and 82Kd which were experimented by the culture supernatant of 4 selected hybridomas. Especially 60Kd coincided with a band of immunized mouse sera.

• 생명과학회지
• /
• 제5권2호
• /
• pp.7-7
• /
• 1995

Cockroach antigen have been known as a cause of allergic disease. German ockroach(Blattella germanica L.) was chosen because it has the highest distribution range and poulation density. To identify the common and specific antigens of adult and larval stage of german cockroach, we made monoclonal antibodies which were confirmen by SDS-PAGE and EITB. Anti-B. germanica antibody producing hybridomas were 24 among the total 960wells. Only 4 hybridomas did not have cross reaction to other species of cockroach and hluse dust mites(Dermatophagodies farinae and D. pteronyssius). SDS-PAGE revealed about 20 bands from 90Kd to 15Kd to 15Kd. ETB showed specific antigens a6 60, 72 and 82Kd which were experimented by the culture supernatant of 4 selected hybridomas. Especially 60Kd coincided with a band of immunized mouse sera.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제32권4호
• /
• pp.243-248
• /
• 1994

질편모충 항원 분석의 일환으로 막항원의 분석을 시도하였다 수확 세척된 질편모충 HY-l의 homogenate를 sucrose step-gradient를 이용하여 differential centrifugation하였으며 25%/45%의 sucrose 경계면으로녁터 막분회을 얻었다. 분리된 막분회은 transmission electron microscopy를 통하여 순수 분리되었는지 확인하였고 효소면역 전기영동 이적법(EITB)을 이용하여 항원성을 관찰하였으며 그 결과는 다음과 같았다. 분리된 막분획은 투과전자 현미경상에서 extended sheet나 concentric vesicle의 형태가 거의 균질하게 분포하고 있었으며 막 분획에서 특징적으로 나타나는 trilaminal appearance를 보여 질편모충의 막분획이 순수 분리된 것으로 간주할 수 있었다. 분리된 막분획은 EITB상에 토끼의 항혈청과 반응하였을 때 46, 60, 110, 120, 130 및 150 kfDa에서 항원성이 있는 반응대가 관찰되었으며 N-hydroxysuccinimido-biotic으로 표지하여 분리된 표면항원의 녁획과 비교하였을 때 60 KDa의 항원 분획이 서로 일치하는 것으로 나타났다. 따라서 60 kfDa 의 항원 분획은 료면 항원임을 확신할 수 있었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제27권1호
• /
• pp.1-8
• /
• 1989

폐흡충증의 진단은 객담검사법이 가장 확실한 진단 방법이기는 하지만 폐흡충이 폐에 기 생한 경우에도 충란 검출이 어려울 때가 있으므로 혈청학적 진단법이 이용되고 있다. 혈청학적 진단법에 사용되는 항원인 기생충 추출물, 즉 조항원은 분류학적으로 유사한 기생충과 서로 공유하고 있는 공통 항원 때문에 교차 반응을 일으키는 경우가 있다. 이 연구는 발육단계 별 폐흡충에서 만든 조항원을 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)로 전기영동한 다음 EITB(enzyme-linked immunoelectrotransfer blot)를 이용하여 항원대별 항원성 및 특이성을 관찰하여 시기별로 채취한 고양이 혈청에 대한 특이 반응대를 관찰해 보고자 시행하였다. 실험에 사용한 항원은 실험적으로 고양이에 감염시켜 3, 5, 8및 12주 만에 얻은 폐흡충의 식염수 추출액 (SEPn; n=감염된 시기)이며 3∼20% linear gradient gel에서 SDS-PAGE하였다. Silver stain결과 폐흡충 조항원은 최소한 30개 이상의 band들로 구성되어 있었는데 각 발육단계 에 공통된 항원대로 203, 63, 35, 21, 19, 13 kDa band들이 관찰되었고, 단계별로 차이점도 관찰 되었다. SEPl2에서는 새로운 229 kDa band가 관찰되었다. 주요 항원대에 대하여 EITB를 한 결과 각 항원과 감염 후 5주 이상 된 혈청과 공통적으로 반응한 항원대는 203, 115, 91, 85, 67, 63, 48, 39, 35 및 25 kDa band들이었고, 8주 이상 된 혈청과의 반응에서는 19, 13및 10 kDa 항원대와 공통적으로 일관성 있게 반응하였다. SEP12는 12주 된 혈청과 229 kDa에서 특이하게 반응하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제26권4호
• /
• pp.245-254
• /
• 1988

유구낭미충(이하 낭미충)(Cysticercus cellulosae)에서 추출한 조항원으로 낭미충증(cysticercosis), 스파르가눔중(sparganosis) 및 포충중(hydatidosis) 환자 및 정상인 혈청내 IgG 항체와의 혈청학적 반응을 ELISA 및 EITB 방법으로 추적하였다. ELISA에서 낭미충의 조항원 단백은 스파르가눔중 환자 혈청과의 교차 반응도 보였고, 포충증 환자 혈청에 대해서는 낭미충 환자 혈청보다 오히려 높은 흡광도(O.D.)를 보였다. 낭미충 조항원을 SDS-PAGE로 전기영동한 결과 260 KDa∼22 KDa 범위에서 31개의 polypeptide band를 얻었으며 이 중 11개의 분획이 강한 염색성을 나타내었다. 낭미충 조항원과 낭미충중 환자 혈청과의 EITB 반응에서 22개의 항원대가 관찰되었으며 이 중 104 KDa, 82 KDa, 78 KDa 및 59 KDa는 모든 검사 혈청에서 인지되었다. 또 22개의 항원대 중 12개는 정상인 혈청에서도 반응이 관찰되어 교차반응하는 비특이성 항원 성분으로 해석되었다. 낭미충 조항원과 스파르가눔증 환자 혈청과의 반응에서 11개의 항원대가 인지되었으며 이 중 낭미충증 환자 혈청과 교차반응하는 9개의 항원대가 인지되었다. 나머지 163 KDa 및 131 KDa 항원대는 스파르가눔 환자에서만 동정되었다. 낭미충 조항원과 포충증 환자 혈청과의 반응에서는 21개의 항원대가 인지되었는데, 이 중 63 KDa는 포충증 환자에서만 인지되었고 나머지는 낭미충증 환자 혈청과 교차반응하는 항원대이었다. 한편 낭미충 조항원 중 104 KDa, 82 KDa, 72 KDa, 59 KDa및 34 KDa는 낭미충증, 스파르가눔증 및 포충중 환자와 정상인의 혈청에서도 모두 교차반응을 일으키는 항원이었다.

• 한국동물학회지
• /
• 제32권4호
• /
• pp.429-440
• /
• 1989

Spirometru erinocei의 유충인 sparganum에서 추출한 조항원 단백질을 항원으로 하여 sparganosis, cysticercosis, hydatidosis환자의 IgG 항체와 정상인의 IgG 항체를 혈청반응시켜 ELISA와 EITB에 의해 교차반응을 일으키는 비 특이항원 성분과 종특이항원 성분을 추구하였다. 1. sparganum에서 0.01 M PBS (PH 7.4)로 추출한 조항원 단백질을 SDS-PAGE로 전개하여 290 Kd에서 23 Kd범위의 분자량을 가진 25개의 단백질이 분획되었다. 2. sparganum의 조항원을 항원으로하여 ELISA로 sparganosis, cysticercosis, hydatidosis 환자의 190 항체와의 혈청 반응치는 sparganosis환자에게서는 0.44 $\pm$ 0.07에서 1.90 $\pm$ 0.03으로 negative control normal sera의 0.D (0.15 $\pm$ 0.03)를 기준으로 하였을 때 모두 양성이며 민감도(sensitivity)가 100 %이었으며 cysticercosis, hydatidosis환자혈청에서 양성반응이 나타났으며 교차반응도 있었다. 3. EITB에서는 spargancsis환자의 IgG항체에 의해 16개의 항원성분이 인지되었으며 이 중 6개의 항원성분이 정상인의 혈청에서도 인지되어 교차반응을 일으키는 항원성분이었으며 cysticercosis환자혈청에서 인지된 4개의 항원성분 중 2개의 항원성분이 sparganosis 환자혈청에서 인지된 것과 같았으며 hydatidosis환자의 190항체에 의해 인지된 19개의 항원성분 중 12개의 항원성분이 sparganosis환자혈청에서 인지된 항원 성분과 같았다. 4. 290 Kd, 200 Kd, 28 Kd의 항원성분은 sparganosis환자의 196항체에서만 인지되었고 228 Kd, 152 Kd, 66 Kd항원성분은 hydatidosis환자의 19G항체에서만 인지되었으며 66 Kd항원성분은 sparganosis, cysticercosis, hydatidosis, 정상인의 혈청에서 모두 인지되었다. We studied the serological reaction between the specific and nonspecific antigenic components from metacestode (plerocercoid) of spiromeko erimacei and IgG antibodies in sparganosis, cysticercosis. hydatidosis patients and normal human sera by ELISA and EITB. We prepared the crude extracts of sparganlim from snake, Matrix tigrina laterolis and used as antigenic components. By SDS-PAGE, we detected a total 25 peptide bands (fractions) with 290 Kd to 23 Kd molecular weight, and 8 bands of these detected bands developed strongly by silver stain. In serological test, ELISA, we recognized the cross-reaction of antigenic components reacting with IgG antibodies in heterogenous sera, cysticercosis and hydatidosis patients sera. The crude antigenic components of sparganum showed the high sensitivity in sparganosis, hydatidosis patients sera, but showed lower sensitivity in cysticercosis patients sera than the sparasanosis, hydatidosis patients sera. Sixteen antigenic components of these 25 separated bands were recognized by antibodies In sparsanosis patients sera,8 antigenic components in normal human sera, 4 antigenic components in cysticercosis patients sera and 19 antigenic compoenents in hydatidosis patients sera. The crude antigenic compnenets with 290 Kd, 200 Kd, 125 Kd and 28 Kd molecular weight was only recognized in sparganosis patients sera, but 64 Kd antigenic component was nonspecific antigenic components which were also cross-reacted with sparganosis, hydatidosis, cysticercosis patients sera and normal human sera.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제32권4호
• /
• pp.249-258
• /
• 1994

톡소포자충(Tomplasmngondii)은 세포내에 기생하는 구포자충(Cuidia)의 일종으로 항원은 여러 가지 단백질로 구성되어 있으며 이들 항원의 분석은 면역학적 생화학적인 면에서 시도 해 볼 필요가 있다. 톡소포자충(RH주) tachyzoite의 용해물 및 분비항원을 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)로 단백질 분획을 관찰하고 면역 전기영동이적법 (EITB, enzyme-linked immunelectrohansfer blot)을 시행하여 반응대를 관찰하였다. 토끼 (New Zealand산) 또는 BALB/c마우스를 톡소포자충으로 면역 또는 감염시키고 3주 또는 7주 후에 채혈 하였다. 면역 후 토끼나 마우스 혈청은 간접형광항체법(IFA)으로 항체가 1:1024 또는 1 : 128임을 확인하였다. 톡소포자충 용해물 및 분비항원으로 SDS-PAGE를 시행하였을 때 10 kDa에서 220 kDa까지 광범위한 단백질 분포대를 보였다. 톡소포자충 용해물 항원을 IgG 항혈청과 반응시켰을 때 주요 항원의 분자량은 23에서 35 kDa까지 5개의 반응대를 관찰하였으며 IgG와 IgM의 공동반응 대는 24. 27, 30. 35 kDa에서 관찰되었다. 분비항원을 IgG 항혈청과 반응시켰을 때 감염 마우스 의 복강액을 항원으로 한 경우 33(P30), 45 kDa의 반응대가 주요 항원임을 알 수 있었고 톡소포자 충을 CHL 세포로 in vitro에서 배양시킨 후 배양액의 상청액을 항원으로 EITB를 시행하였을 때 20 kDa. 30 kDa 이하의 분획에서 반응대가 관찰되었다. 이상으로 30 kDa 항원이 톡소포자충 tachyzoite의 용해물 뿐만 아니라 분비물에서도 관찰되는 중요한 항원임을 알 수 있었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제30권4호
• /
• pp.289-298
• /
• 1992

Acanthnmoeba sp. YM-4의 영양형은 사상의 침상위족을 내어 전형적인 각canthamoeba 속의 특징이 관찰되었으며, 포낭(씨스트)은 외벽이 등근혐이었고 내벽이 단순한 구형이거나 다소 불규칙한 2개의 세포벽을 갖고 있었다. SDS-PAGE 결과, Acanthamoeha sp. Yhf-4는 약 16개의 주요 단백질 분획이 관찰되었는데, 2차원 전기영동 결과와 함께 Acanthamoeba sp. YM-4의 단백질 분획은 A. culbertsoni와 거의 같은 양상이 관찰되었다. Acanthamoeba sp. YM-4로 면역시킨 마우스의 비장세포와 myeloma 세포를 융합한 결과, 항체를 분비하는 17개 clone을 얻을 수 있었다. 생성된 단세포를 항체 중 isotyping을 실시하였는데 실험에 사용된 McAY 6, McAY 7, McAY 8, McAY 13, McAY 16 단세포군은 IgGl 항체를, McAY 10, McAY 11 단세포군은 19M 항체를 분비하였다. 생성된 단세포군 항체는 대부분이 아메바의 세포막에 있는 항원과 반응하였으며, EITB 실험결과, McAY 7 단세포군 항체는 43 kD에서 반응대가 관찰되었고, McAY 10 단세포군 항체는 55 kD과 105 kD에서 반응대가 관찰되었다. ELISA 방법을 이용한 단세포를 항체들과 여러 아메바 간의 교차반응실험 결과, McAY 7 단세포군 항체는 Acanthamoeba sp. YM-4에만 반응하였고, McAY 6과 McAY 10은 A. culbertsoni와도 반응하였다. 또한 McAY 11은 모든 아매바와 교차반응을 보였다.