• Journal of Pharmaceutical Investigation
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• 제24권1호
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• pp.1-9
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• 1994

In order to study systemic peptide delivery through the ocular route, the stabilities of methionine enkephalin (Met-Enk) and $[D-ala^2]-methionine$ enkephalinamide (YAGFM) in the corneal extracts of rabbits were investigated using reversed phase HPLC. Met-Enk was found to be hydrolyzed most rapidly in the corneal epithelium, but YAGFM was relatively stable. Aminopeptidases appeared to contribute over 60% to the degradation of Met-Enk and the degradation rate of Met-Enk followed the first order kinetics. The half-lives of Met-Enk in the extracts of the corneal epithelium and endothelium were 36 and 673 min, respectively. From the effects of enzyme inhibitors, it was found that the application of the mixture of amastatin, thimerosal and EDTA was very useful for the inhibition of peptide degradation.

• 미생물학회지
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• 제29권5호
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• pp.307-313
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• 1991

A yellow-green, fluorescent siderophore A3 was extracellularly produced under iron-limited growth conditions from Pseudomonas synxantha A3. The physicochemical and biological properties of siderophore A3 were examined. The approxiamte molecular weights of the Fe(III)-siderophore A3-1 complex and Fe(III)-siderophore A3-2 complex were estimated to be about 1,300 and 1,100, respectively, by Bio-gel P2 gel exclusion chromatography. The molar ratio between the siderophore and the Fe(III)was 1.08 mole. The molecular weight of the complex could be calculated with this ratio and the new values were 1,150 and 960, respectively. The binding constant(K) between thesiderophore A3 and Fe(III) that determined by displacing the iron from the Fe(III)-siderophore complex with EDTA was 4.12*10$^{18}$ at pH 5.0. Siderophore A3 appeared to have antibacterial activity on several bacterial strains, however, ferric siderophore Ae complex did not show that activity. The cytotoxicity of siderophore A3 was obtained from Human Chronic Myelogenous Leudemia K562 cells. Inhibition concentration (50%)($IC_{50}$ ) was $0.17\mu$\{g/ml}.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제2권2호
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• pp.218-225
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• 1999

A protease without tryptic and chymotryptic activities was purified from the hepatopancreas of shrimp, Penaeus orientalis, using Q-Sepharose ionic exchange, benzamidine Sepharose-6B affinity, Mono-Q, and gel chromatography. Molecular weight (M.W.) of the protease was estimated to be 27kDa by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS­PAGE). The amino acid composition of the protease was different from that of protease from P. japonicus or trypsin from P. orientalis. The protease was completely inhibited by benzamidine, $N\alpha-p-tosyl-L-lysine$ chloromethyl ketone (TLCK), and phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and was not affected by leupeptin, pepstatin, N-tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK), iodoacetate, and ethylenediamine tetra acetate (EDTA). The enzyme did not have any activity against Na-benzoyl-DL-arginine p-nitroanilide (BAPNA) or N-benzoyl-L-tyrosine ethyl ester (BTEE) which are specific substrates of trypsin and chymotrypsin, respectively. However, the protease showed hydrolytic activity for a carboxyl terminal of Tyr, Trp, Phe, Glu, and Cys.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제29권10호
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• pp.1553-1560
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• 2019

In a previous study, the antimicrobial peptides extracted from Lactobacillus plantarum UTNGt2 of wild-type fruits of Theobroma grandiflorum (Amazon) were characterized. This study aimed to investigate the antimicrobial mechanisms of peptides in vitro and its protective effect on fresh tomatoes. The addition of partially purified Gt2 peptides to the E. coli suspension cells at the exponential ($OD_{605}=0.7$) growth phase resulted in a decrease with 1.67 (log10) order of magnitude compared to the control without peptide. A marginal event (< 1 log10 difference) was recorded against Salmonella, while no effect was observed when combined with EDTA, suggesting that the presence of a chelating agent interfered with the antimicrobial activity. The Gt2 peptides disrupted the membrane of E. coli, causing the release of ${\beta}$-galactosidase and leakage of DNA/RNA molecules followed by cell death, revealing a bacteriolytic mode of action. The tomatoes fruits coated with Gt2 peptides showed growth inhibition of the artificially inoculated Salmonella cocktail, demonstrating their preservative potential.

• 대한약리학회지
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• 제24권1호
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• pp.111-123
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• 1988

사람의 혈액으로부터 Elastase를 분리하는 새로운 방법을 개발하여 순도 높은 효소를 얻고 이 효소에 의하여 발생되어지는 질병의 예방과 치료에 응용하기 위하여 이 효소의 근본적인 성질규명을 시도하였다. 정제 방법으로는 Sephodex G-75를 이용한 1회의 액체 크로마토그라피와 HPLC을 이용한 2회의 코마토그라피를 거치는 2단계 방법을 사용하였다. 이때 얻어진 효소는 분자량이 $26,000{\sim}29,700$ 사이에 있는 3개의 다른 분자량을 가진 물질로 확인되었으며, 항체 반응에서 사람의 결구내 Elastase의 특성을 나타내었다. 함유하고 있는 미량의 금속이온을 분석한 결과 정제하는 단계에 따라 Zn 이온의 효소분자에 대한비는 증가하였으며 가장 순수한 분자내의 효소분자와 Zn 이온과의 비는 1 : 2였다. 이 효소는 chelating agent에 의하여 활성도를 잃게 되었으며, 반대로 chelating agents에 의하여 활성도를 잃고 있는 반응 medium에 그 chelaing agents의 농도를 초과하는 2가 이온 즉 Zn 이온, Ca 이온, 그리고 Mn 이온을 넣으면 그 활성도는 원상복귀되나 Mg이온에 의하여는 그 활성도가 원상회복 되지 않았다. 이 모든 성질을 종합하면 사람의 Neutrophil granule에 있는 Elastase는 지금까지 알려진 바와 같이 Serine pretense임과 동시에 metalloenzyme으로 제고되어야 한다고 제안한다. 나아가서chelating agents에 의하여 이 효소의 활성도를 조정할 수 있다는 것은 이 효소에 의하여 일어나는 질병의 치료에 응용할 수 있는 가능성도 보여준다.

• 대한약리학회지
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• 제31권1호
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• pp.123-133
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• 1995

삼환계 항우울제들은 calmodulin 억제 작용을 갖고 있으며, 칼슘 유입, 산화성 인산화 반응 및 ATPase 활성도를 억제하는 것으로 제시되고 있지만 사람 호중구에서의 기능 표현에 대한 효과는 밝혀져 있지 않다. 본 연구에서는 amitriptyline, imipramine과 doxepine이 superoxide와 $H_2O_2$ 생성, myeloperoxidase 유리, leukotriene $B_4$ 생성과 세포내 칼슘의 상승에 나타나는 효과를 조사하였다. 변성된 IgG에 의하여 활성화된 호중구에서 superoxide와 $H_2O_2$ 생성은 amitriptyline, imipramine과 doxepine에 의하여 억제되었고 EDTA, EGTA, verapamil과 bepredil은 superoxide 생성을 억제하였다. Chlorpromazine, trifluoperazine, staurosporine 및 H-7 또한 superoxide 생성을 억제하였다. PMA에 의한 superoxide 생성은 amitriptyline, imipramine과 doxepine, chlorpromazine과 H-7에 의하여 억제되었다. Amitriptyline, imipramine, chlorpromazine과 trifluoperazine은 변성된 IgG에 의한 myeloperoxidase 유리를 억제하였다. 변성된 IgG에 의하여 활성화된 호중구에서 $LTB_4$와 5-HETE 형성은 amitriptyline, imipramine과 doxepine에 의하여 억제되었다. 변성된 IgG에 의한 세포내 칼슘의 증가는 amitriptyline, imipramine, doxepine, chlorpromazine과 EGTA에 의하여 억제되었고, verapamil은 세포내 칼슘의 증가를 약간 억제하였으나 H-7은 세포내 칼슘의 증가에 영향이 없었다. 이상의 결과로부터 변성된 IgG에 의하여 활성화된 호중구에서의 respiratory burst, myeloperoxidase 유리와 LTB, 생성에 대한 amitriptyline, imipramine과 doxepine의 억제효과는 칼슘동원, calmodulin과 protein kinase C의 억제에 기인할 것으로 추정된다.

• 생명과학회지
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• 제16권2호
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• pp.245-252
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• 2006

피부 트러블을 가진 남,여 40명의 피부에서 분리한 collagenase를 생산하는 균주를 분리, 동정한 결과 Staphylococcus aureus로 판명되었으며 이를 S. aureus JJ-11이라 명명하였다. S. aurells JJ-11 균주의 collagenase의 최적 생산 조건은 1.5%(w/v) gelatin, 1%(w/v) yeast extract, 0.4% (w/v) $K_2HPO_4$, 0.005%(w/v) $NiSO_4{\cdot}6H_2O$를 함유한 배지 (pH 7.0)에서 $37^{\circ}C$, 200 rpm으로 18시간 동안 배양하는 것이다. 분리 균주가 생산하는 collagenase를 정제하기 위해서 amberlite IRA-900과 sephacryl S-300 HR columns를 이용하였고, 6.66-folds로 정제되었다. S. allreus JJ-11 균주가 생산하는 collagenase를 정제한 결과 분자량은 약 62 kDa이었으며, pH 7.0과 $37^{\circ}C$에서 각각 최대의 활성을 가졌고, pH와 온도에 대한 안정성은 pH 4.0-8.0, $40^{\circ}C$까지 100%의 활성이 있었다. 금속이온에 대해서는 $Fe^{2+},\;Co^{2+},\;Ba^{2+}$ 존재 하에서는 5 mM 농도에서도 활성을 유지하였다. $Sr^{2+},\;Hg^{2+}$에서는 30% 이상이 저해를 받는 것으로 확인되었다. 또한 EDTA와 O-phenanthroline에 의해 65% 이상이 저해되는 일 반적인 collagenase의 특정인 metalloproteinase의 특정을 보였으며, 그리고, 여러 가지 기절에 대해 효소활성을 비교한 결과, insoluble collagen (type I)에 대해 효소 활성이 가장 높았다.

• 미생물학회지
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• 제49권1호
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• pp.78-82
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• 2013

이전의 연구에서 토양으로부터 많은 양의 세포외 단백질분해 효소를 생산하는 신종 중온세균 Chryseobacterium sp. JK1를 분리하였다. 이 균주가 생산하는 단백질 분해효소의 특성조사 결과 최적반응온도와 pH는 각각 $40^{\circ}C$와 7.0이였으며, 좁은 최적온도 구간과 비교적 넓은 pH 구간인 pH 6.0-9.0에서 높은 활성을 보여주었다. 그리고 단백질 분해효소는 EDTA 또는 EGTA, PMSF와 금속이온 $Ag^+$ 또는 $Cu^{2+}$의 첨가에 의해 강하게 저해 되었으며, $Al^{3+}$의 첨가에 의해 약하게 저해되었다. Pepstatin과 금 속이온 $K^+$, $Ca^{2+}$, $Na^+$, $Fe^{2+}$ 또는 $Mg^{2+}$의 첨가는 저해에 큰 영향을 주지 않았다. 이와 반대로 단백질분해효소는 이가 금속이온인 $Mn^{2+}$ (5 mM)의 첨가에 의해 효소활성이 향상되었다. 농축된 배양 상등액의 활성염색 분석으로 67과 145 kDa 크기의 주요 밴드 두 개가 관찰되었다. 이러한 결과들로 Chryseobacterium sp. JK1 균주가 식품산업에 응용 가능한 세포외 중성의 serine 단백질 분해효소를 생산한다는 것을 알 수 있었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제26권2호
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• pp.285-290
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• 1997

이상의 결과를 요약하연, 혈당값은 정상대조군 78{\pm}6.20mg/dl, 인슐린 비의존형 당뇨병 환자 $184{\pm}18.94mg/dl$로 인슐린 비의존형 당뇨병 환자의 혈당값이 유의적으로 높았다. IGF-I의 수준은 정상대조군 $9.32{\pm}1.48{\mu}g/ml$, 인슐린 비의존형 당뇨병 환자 $4.19{\pm}0.84{\mu}g/ml$로 인슐린 비의존형 당뇨병 환자의 IGF-I 수준이 유의적으로 낮았다. 인슐린 비의존형 당뇨병 환자의 혈청 중 IGFBP-1, -2는 증가한 반면, IGFBP-3, -4, -5는 감소하였다. IGFBP-3의 분해에 관여하는 효소는 PMSF, aprotinin, EDTA에 의해 저해되어 metal-dependent serine proteases임을 확인하였고, 효소의 크기가 대략 97,66kDa 이었으며 효소활성이 인슐린 비의존형 당뇨병 환자에게서 큼을 확인하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제28권4호
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• pp.197-206
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• 1990

MDCK세포간에 형성된 tight junction이 Toxoplasma gondii이 숙주세포 침투에 미치는 영향에 대하여 고찰 하기 위해 여러 조건의 세포배양을 시행하였다. MDCK세포를 25-well배양기 내의 18-mm cover glass에 $1{\times}10^5,{\;}3{\times}10^5{\;}및{\;}5{\times}10^5$ 개로 분주한 후 배양 1, 2, 3 및 4일에 다수의 Toxoplasma를 첨가하여 1시간 동안 배양한 다음 Giemsa 용액으로 염색한 후 관찰하였을 때, 각 실험군에서 침투한 원충의 숫자는 숙주세포가 포화밀도를 이루면서 급격히 감소하였다. 배양액 내의 calcium 농도를 일반적인 1.8mM에서 $5{\;}{\mu}M$로 낮추어 포화밀도의 MDCK 세포간에 tight junction 형성을 억제하였을 때, 원충의 침투가 약 2배 증가하였으며(p<0.05) 포화밀도 이전의 배양에서는 원충의 침투가 감소하였다. Trypsin-EDTA를 처리하여 포화밀도의 배양에서 tight junction을 소화 시킨 경우, 원충의 침투가 약 2.5배 증가하였으며 (p<0.05) 포화밀도 이전의 배양에서는 급격히 감소하였다. 이상의 결과들로 볼 때, 포화밀도의 MDCK세포간에 형성된 tight junction이 Toxoplasma의 침투를 억제하는 것을 알 수 있었다. 이는 Toxoplasma가 숙주세포로 침투할 때 숙주세포의 막구조에 대한 특이성이 있음을 시사 하며, 상피세포에서는 tight junction 위의 막(apical membrane) 보다 옆 및 아래의 막(basolateral membrane)상의 구조를 이용하는 것으로 추정되었다.