• KSBB Journal
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• 제8권4호
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• pp.382-389
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• 1993

초산이온이 대장균 성장을 저해하는 현상을 규명 하기 위해서 M9 배지, LB 배지를 사용해서 플라스 크, 발효조 배양을 수행하였다. 대장균의 초산 생성 은 높은 포도당 초기 농도, LB 배지와 같은 복합 배 지에서 활발하였고, 플라스크 배양과 같은 pH 조절 이 되지 않는 배양방법에셔는 초산의 생성에 따른 pH 감소에 따라 세포성장이 많이 저해되었다. 초산 을 외부에서 첨가하여 세포성장에 마치는 영향을 조 사하여 보았는데 LB 배지를 사용한 플라스크 배양 에서는 첨가된 초산의 농도가 2g/l 이상, M9 배지 를 사용한 플라스크 배양에서는 초산의 농도가 4g/l 이상, 그리고 M9 배지를 사용한 발효조 배양에 셔는 8g/l 이상에서 초산의 성장 저해효과가 나타 다. LB 한천 배지를 볕에 깐 LB 액체 배지의 플라스 크 배양을 수행하였다. LB 한천의 양이 증가함에 따라서 한천에서 포도당의 방출이 일어나 최종 대장 균 세포 O.D.가 증가하였다.

• 미생물학회지
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• 제28권4호
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• pp.297-303
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• 1990

Secretion of Serratia marcescens nuclease by E. coli harboring pNUC4 was investigated. 29.2, 54.2 and 16.6% of total nuclease were observed in culture medium, periplasm, and cytoplasm of E. coli, respectively. To investigate the secretion mechanism of Serratia nuclease by E. coli, secretion kinetics of nuclease was examined in the presences of sodium azide, and energy metabolism inhibitor; procaine, an exoprotein processing inhibitor; and chloramphenicol, a protein synthesis inhibitor. In the presence of sodium azide, periplasmic unclease was gradually decreased and the extracellular nyclease was linearly increased according to the incubation time. Similar results were obtained in presences of procaine and chloramphenicol. From these results, we concluded that two transport processes are involved in nuclease secretion: secretion of nuclease through the inner membrane is occurred by an energy-dependent process and probably requiring precusor processing: secretion of nuclease through outer membrane does not require energy, de novo protein synthesis, and precursor processing.

• 한국식품조리과학회지
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• 제13권4호
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• pp.440-447
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• 1997

향신료인 oregano(Origanum vulgare L.)를 액체배지에 첨가하여 2종류의 식중독세균(Escherichia coli O157:H7과 Staphylococcus aureus 196E)의 증식과 저온저장중 생존에 미치는 항균효과를 조사하였다. 저농도(0~2%, w/v)의 oregano를 액체배지(TSB)에 첨가하여 E. coli와 S. aureus를 $10^{6}$~$10^{7}$ cells/$m\ell$가 되게 접종한 후 35$^{\circ}C$에서의 증식과 냉장(5$^{\circ}C$)및 냉동(-2$0^{\circ}C$) 저장중 생존억제효과를 생균수의 변화로서 조사하였다. 35$^{\circ}C$에서의 E. coli의 증식은 1% 이내의 향신료 농도에서는 증식이 저해되지 않았으나, 2%의 oregano존재하에서는 짧은 유도기를 거친 후에 증식이 시작되었다. 정상기 이후의 사멸기에서는 첨가한 oregano의 농도가 높을수록 빠른 사멸속도를 나타내었다. 35$^{\circ}C$에서의 S. aureus의 증식은 0.1%의 경우에는 증식이 저해되지 않았으며 0.3%와 0.5%의 oregano 존재하에서는 긴 유도기를 거친 후에 증식이 시작되었으나 1~2%의 경우에는 계속적으로 생균수가 감소되었다. 5$^{\circ}C$에서 냉장한 경우에는 0.5%이상의 oregano에 의해 E. coli와 S. aureus 모두 우수한 항균효과를 나타내어 생존이 크게 억제되고 저장말기에 사멸하였다. -2$0^{\circ}C$에 동결저장하였을 때, E. coli는 저장기간이 길어질수록, 첨가한 향신료의 농도가 높을수록 생존억제효과가 증대되었으나 S. aureus는 저장초기에 급격히 감소한 후 거의 일정수준을 유지하였으며 첨가한 향신료의 농도에 따른 생균수의 차이는 나타나지 않았다. 동결저장에서 0.1%의 oregano를 첨가했을 때 E. coli는 대조구의 생균수에 비해 1/3~l/7로 생균수가 감소하였으나 S. aureu는 대조구에 비해 1/18~l/46로 감소하여 S. aureus에서 더 우수한 항균효과를 나타내었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제21권2호
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• pp.204-211
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• 2011

To yield high concentrations of protein expressed by genetically modified Escherichia coli, it is important that the bacterial strains are cultivated to high cell density in industrial bioprocesses. Since the expressed target protein is mostly accumulated inside the E. coli cells, the cellular product formation can be directly correlated to the bacterial biomass concentration. The typical way to determine this concentration is to sample offline. Such manual sampling, however, wastes time and is not efficient for acquiring direct feedback to control a fedbatch fermentation. An E. coli K12-derived strain was cultivated to high cell density in a pressurized stirred bioreactor on a pilot scale, by detecting biomass concentration online using a capacitance probe. This E. coli strain was grown in pure minimal medium using two carbon sources (glucose and glycerol). By applying exponential feeding profiles corresponding to a constant specific growth rate, the E. coli culture grew under carbon-limited conditions to minimize overflow metabolites. A high linearity was found between capacitance and biomass concentration, whereby up to 85 g/L dry cell weight was measured. To validate the viability of the culture, the oxygen transfer rate (OTR) was determined online, yielding maximum values of 0.69 mol/l/h and 0.98mol/l/h by using glucose and glycerol as carbon sources, respectively. Consequently, online monitoring of biomass using a capacitance probe provides direct and fast information about the viable E. coli biomass generated under aerobic fermentation conditions at elevated headspace pressures.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제30권5호
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• pp.770-776
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• 2020

Genistein is a type of isoflavonoid found predominantly in leguminous plants. Genistein has diverse biological activities, such as anthelmintic and antioxidant effects, as well as inhibitory effects on the growth of several cancers. In addition, genistein is well known as a phytoestrogen. In this study, we attempted to biologically synthesize genistein from either p-coumaric acid or naringenin using Escherichia coli as a biotransformation host. Four genes, Os4CL, PeCHS, RcIFS, and OsCPR, were used for genistein production. To functionally express RcIFS and OsCPR, two members of the cytochrome P450 family, in E. coli, the membrane-binding anchor domain of each gene was removed, and RcIFS and OsCPR were translationally fused to generate an RcIFS-OsCPR hybrid. Os4CL and PeCHS, or the RcIFS-OsCPR hybrid, were then transformed into E. coli BL21(DE3). Using these strains, we optimized our culture system at a laboratory scale in terms of the cell density, concentrations of substrate and isopropyl-β-D-thiogalactoside, temperature, and culture medium. Under the optimized culture conditions, genistein was produced at up to 35 mg/l and 18.6 mg/l using naringenin and p-coumaric acid, respectively.

• 한국가정과학회지
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• 제4권1호
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• pp.79-92
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• 2001

본 연구에서는 미생물의 대사체계를 이용하여 유자껍질내의 유자정유성분을 생전환 시키므로써 고부가가치 고기능성 천연향의 발굴 생산을 시도하였다. 유자정유 성분 대사능 유전자를 지닌 E. coli 형질전환주 EC3, EC4, EC6의 공동 배양액을 유자정유가 유일한 탄소원인 M9배지에서 28$^{\circ}C$로 진탕배양 하였다. 각 공동 배양액(EC3+EC4. EC3+EC6, EC4+EC6 and EC3+C4+EC6)은 각 형질전환주의 단독배양 보다 3∼4배 더 높은 생육도를 나타냄을 알 수 있었다. 공동배양에 의해 생전환된 물질들은 GC-MS에 의해 확인하였다. 각 공동배양액의 주요한 대사산물로는 linalool, 4-terpineol, ${\alpha}$-terpineol이 공통적으로 검출되었다. 소량씩 존재하나 배양액의 주요한 향을 결정할 것으로 보이는 각기 다른 terpene 계열 화합물들이 각각의 공동배양액 대사산물로 검출 되었는데, 공동배양액EC3+EC4에서는 elemol, ocimene, nonanal, trans-2-nonenal이 공동배양액EC3+EC6에서는 cis-ocimene, 2-octanol, octanal. ${\alpha}$-terpinolene, 공동배양액 C4+EC6에서는 ocimene, 그리고 공동배양액EC3+EC4+EC6에서는 nonanal, 2-octenol, iso-menthol, ocimene이 각각 검출되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권8호
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• pp.1236-1241
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• 2007

Five fusion proteins between Z domains derived from Staphylococcal Protein A and Green Fluorescent Protein or Human Proinsulin were produced on the periplasm of Escherichia coli. The effects of the molecular weight and amino acid composition of the translocated peptide, culture medium composition, and growth phase of the bacterial culture were analyzed regarding the expression and periplasmic secretion of the recombinant proteins. It was found that secretion was not affected by the size of the translocated peptide (17-42 kDa) and that the highest periplasmic production values were obtained on the exponential phase of growth. Moreover, the highest periplasmic values were obtained in minimal medium, showing the relevance of the culture medium composition on secretion. In silico prediction analysis suggested that with respect to the five proteins used in this study, those that are prone to form ${\alpha}$-helix structures are more translocated to the periplasm.

• 한국식품영양학회지
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• 제8권1호
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• pp.1-5
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• 1995

ATPase was the most available phosphatase in culture broth of 5. coli P90C. To measure the stable phosphatase activity it was necessary to react nth reaction reagent over 30 min and then we can get stable optical density at 410 m. Transfer time from preculture to main culture for the production of $\beta$-glactosidase was good after 3 hrs cultivation. Phosphatase activity was highest at log phase in main culture and as the cell begins to make $\beta$-galactosidase phosphatase activity begins to decrease.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제18권3호
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• pp.118-124
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• 2003

식품으로부터 다양한 병원 미생물을 신속 검출하기 위하여 다양한 검출 원리를 이요한 키트들이 개발 시판되고 있다. 검사키트는 신속, 정확하고 간단하게 사용할 수 있으므로 검사기관이나 실험실 뿐 아니라 식품회사에서 QC 또는 QA를 수행하기 위하여 사용이 증가되고 있는 추세이다. 이에 본 연구에서는 E. coli 0157:H7의 단클론항체를 이용하여 면역크로마토글래피법에 의해 개발된 E. coli 0157:H7 검출 키트(Donga Co, Korea, D-kit)에 대한 검출감도 및 특이성을 확인하고 식품 시료에 적용 가능성을 평가하였다. 면역크로마토그래피법에 의하여 개발 시판되고 있는 Reveal E. coli 0157:H7 kit (Neogen Co., USA. R-kit)와 VIP EHEC kit(Biocontro Inc., USA. V-kit)를 비교 키트로 사용하였다. E. coli 0157:H7 표준균주를 사용하여 실시한 검출감도 확인시험 결과 R-kit 및 D-kit는 104/m/의 농도에서 양성으로 확인되었고 $10^3$/ml에서도 약한 양성 반응을 보였으나, V-lit는 $10^5$/ml농도로 검출감도가 낮았다. 또한, 배양액을 가열하여 kit에 적용하는 것이 가열하지 않은 경우보다 검출감도를 높일 수 있었다. E. coli 0157:H7 분리 22주, verotoxin 생성 E. coli 7주 E. coli 분리주 40주 중 3주를 제외한 모든 균에서 음성의 결과를 보여 특이성을 확인하였다. 세 키트에 위양성 반응을 보인 것은 E. coli 0157:H19, E. coli 0148:H18 및 Salmonella gallinarium으로 이들 혈청형과 0157:H7 사이에는 유사한 혈청학적 특성이 존재하는 것으로 추정되었다. 이상의 실험결과로 D-kit는 E. coli 0157:H7을 검출하는데 감도 및 특이성 면에서 기존 키트인 R-kit 및 V-kit와 같이 이용한 것으로 확인되었다.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제5권3호
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• pp.286-291
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• 1998

4종류의 식중독세균(Escherichia coli O157:H7, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus 196E, Salmonella typhimurium)에 대하여 녹차 물추출물에 의한 항균작용을 조사하였다. 각 식중독세균을 tryptic soy broth(TSB)에 약 $10^{5}$CFU/ml 정도 되게 접종하여 35$^{\circ}C$에서 30시간 배양하였다. 세균의 배양중 대수증식기의 중기 혹은 말기에 녹차 물추출물을 0-2%(w/v)의 농도로 첨가하였을 때 증식억제 정도를 생균수 변화로서 비교하였다. 식중독세균의 증식은 첨가한 녹차 물추출물의 농도에 비례하여 억제되었으며 대수증식기 말기의 세균이 중기의 세균에 비하여 녹차 물추출물에 대한 내성이 컸다. Gram 양성균(L. monocytogenes, S. aureus)의 경우가 Gram 음성균(E. coli O157:H7, S. typhimurium)에 비하여 녹차 물추출물에 의한 억제효과는 월등히 컸다. 녹차 물추출물에 의한 증식억제 효과의 크기는 S. aureus, L. monocytogenes, E. coli O157:H7의 순이었으며 S. typhimurium에서 가장 강한 내성을 나타내었다.다.