Kim, Kyungmi;Lee, Heeyoung;Lee, Soomin;Kim, Sejeong;Lee, Jeeyeon;Ha, Jimyeong;Yoon, Yohan
한국축산식품학회지
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제37권4호
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pp.579-592
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2017
This study assessed the quantitative microbial risk of non-enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC). For hazard identification, hazards of non-EHEC E. coli in natural and processed cheeses were identified by research papers. Regarding exposure assessment, non-EHEC E. coli cell counts in cheese were enumerated, and the developed predictive models were used to describe the fates of non-EHEC E. coli strains in cheese during distribution and storage. In addition, data on the amounts and frequency of cheese consumption were collected from the research report of the Ministry of Food and Drug Safety. For hazard characterization, a doseresponse model for non-EHEC E. coli was used. Using the collected data, simulation models were constructed, using software @RISK to calculate the risk of illness per person per day. Non-EHEC E. coli cells in natural- (n=90) and processed-cheese samples (n=308) from factories and markets were not detected. Thus, we estimated the initial levels of contamination by Uniform distribution ${\times}$ Beta distribution, and the levels were -2.35 and -2.73 Log CFU/g for natural and processed cheese, respectively. The proposed predictive models described properly the fates of non-EHEC E. coli during distribution and storage of cheese. For hazard characterization, we used the Beta-Poisson model (${\alpha}=2.21{\times}10^{-1}$, $N_{50}=6.85{\times}10^7$). The results of risk characterization for non-EHEC E. coli in natural and processed cheese were $1.36{\times}10^{-7}$ and $2.12{\times}10^{-10}$ (the mean probability of illness per person per day), respectively. These results indicate that the risk of non-EHEC E. coli foodborne illness can be considered low in present conditions.
실험실 배양 조건에서는 발현되지 않는 대장균 K-12의 endochitinase 유전자(yheR)를 PCR로 증폭하여 pET28c와 pQE9벡터에 각각 클로닝 하였다. yheB유전자를 가진 pET28c와 pQE9 벡터를 함유한 대장균에서 생산된 endochitinase는 생장배지 내로 일부 분리되었다. 과량 생산된 endochitinase를 His-affinity 크로마토그래피와 DE-52 크로마토그래피로 부분 정제하였으며 SDS-PAGE에 의한 단백질의 분자량은 약 97,000 이었다. 정제된 효소의 최적 pH는 6이었으며 최적 온도는 $40^{\circ}C$이었다.
E. coli를 이용하여 L-phenylalanine을 대량 생산하기 위한 재조합 플라스미드 pMW10, pMW11과 pMW 12를 구성하였다. L- Phenylalanine 생산을 위한 유전자 $aroF^{FR}$, $pheA^{FR}$은 E. coli MWEC 101-5 균주로부터 분리하였다. 재조합 플라스미드를 함유하고 있는 E.coli 대사 조절변이주들의 L-phenylalanine 생산생과 안전성을 조사하여 $aroF^{FR}$, $pheA^{FR}$유전자들의 효율을 알아보았다. MWEC 101-5/pMW 11 균주에서는 24.3 g/I의 L-phenylalanine이 생산되었으나, 플라스미드의 안정성은 73.8%였다. 본 균주의 prephemte dehydratase, 고유 활동도는 E. coli K-12에 비하여 26배 증가된 것이다.
본 연구는 부산지역 하천에서 plasmid 매개성 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소(extended spectrum ${\beta}-lactamase;\;ESBL$)를 생성하는 세균을 분리하여 생성된 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소를 유형별로 분류하기 위함이다. Escherichia coli 6균주와 Klebsiella pneumoniae 15균주가 피전달균주인 Escherichia coli J53 $Azid^{R}$에 plasmid 매개성 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소 생성 인자를 전달하였다. PCR 후 얻은 유전인자를 plasmid로 매개된 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소 유전자의 염기서열 분석결과, E. coli와 K. pneumoniae 유전자를 BCM Search Launcher 및 GenBank nucleotide database를 통하여 검색한 결과 ESBL 유형은 TEM-52형과 SHV-12형이었다. TEM-52는 E. coli와 K. pneumoniae 양쪽에서 분리되었다. 그러나 SHV-12는 K. pneumoniae에서만 분리되었다. 이상의 결과로부터 plasmid 매개성 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소를 생성하는 세균이 한국에서는 이미 임상범위를 넘어 자연계까지 확산되었음을 알 수 있었다.
일부 대장균 균주는 독성을 가지고 있으며 이들을 제어하기 위해 박테리오파지와 같은 대체 항균물질에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 본 연구에서는 E. coli DH5α 균주를 모델로 이 균주의 생육을 억제하는 박테리오파지 ECP27과 병용처리했을 때 상승효과를 나타낼 수 있는 항균물질을 탐색하였다. 후보물질로는 CaCl2, 젖산, 구연산이 사용되었다. CaCl2의 경우 6시간째 농도 의존적으로 생육억제 상승효과가 나타났으나 12시간째 E. coli DH5α의 생균수가 회복되는 추세를 보였다. 그러나 30 mM 농도에서 젖산과 구연산은 박테리오파지 ECP27과 병용처리 했을 때 E. coli DH5α의 생육저해에 대하여 6시간째 상승효과를 보였으며 12시간째 생균수가 검출되지 않았다. 또한 젖산과 구연산을 단독으로 처리했을 때 12시간째 E. coli DH5α의 생균수가 확인되지 않아 독자적으로도 항균력이 우수하였다. 따라서 박테리오파지와 유기산을 병용 처리하는 것은 대장균의 생육을 효과적으로 억제하는 좋은 전략이 될 수 있을 것이다.
N4 phage, which infects E. coli K-12 strains, could not infect E. coli K-12 strains containing rtn(resistant to N4) gene on plasmids, which was isolated from Proteus vulgaris ATCC 13315. The region of rtn gene for Rtn phenotype was reduced to the 1.7 kb HincII-AccI fragment, and rtn gene seemed to have its own promoter. This putative promoter was present in 107 bp HindII-DraI fragment, and known to be functional in E. cole K-12, which is supported by the fact that phenotype of a subclone, pRMG103A1B which does not contain the 107 bp fragment, was dependent on the existance of a functional promoter in the upstream of rtn gene, and that the 107 bp fragment had promoter activity when located in the upstream of structural gene of galactodinase of E. coli. The promoter-bearing fragment contains two overlapping putative promoter sequences, both of which show a fit in eight of twelve nucleotides with consensus sequences of E. coli promoters at the -35 and -10 regions.
40 strains of E. coli isolated from residents of a doctorless area in Korea in 1976 and 40 strains of E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital from 1975 to 1976 were examined for susceptibilities to 14 antimicrobial agents by the agar dilution method. The susceptibilities of the two groups to each antimicrobial agent were compared and correlations in the antimicrobial susceptibility of the 80 strains of E. coli among the 14 antimicrobial agents were also analyzed. The results were obtained as follow: 1. With Tetracycline, Oxytetracycline, Doxycycline and Ampicillin, the mean MIC's of E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were 8.6 to 14 times higher than. those of E. coli isolated from residents of a doctorless area. 2. With Streptomycin, Minocycline and Carbenicillin, the mean MIC's o{ E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were 4.1 to 5.6 times higher than those of E. coil isolated from residents of a doctorless area. 3. With Kanamycin, Penicillin and Cotrimoxazole, the mean MIC's of E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were 2.6 to 3.7 times higher than those of E. coli isolated from residents of a doctorless area. 4. There were no significant differences in susceptibility to Erythromycin respectively between E. coli isolated from patients of Seoul National University coli isolated from residents of a doctorless area. 5. E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were resistant to Erythromycin(100%), Streptomycin(75%), Tetracycline(72.5%), Oxytetracycline(72.5%), Doxycycline(72.5%), Minocycline(67.5%), Penicillin(82.5%), Ampicillin(60%) and Carbenicillin(65%) respectively and were sensitive to Gentamicin(97.5%), Cephalexin(92.5%) and Kanamycin(72.5%) respectively. 6. E. coli isolated from residents of a doctorless, area were resistant to Erythromycin(100%), Streptomycin(40%) and Penicillin(50%) respectively and were sensitive to Gentamicin(100%), Kanamycin(92.5%), Tetracycline(87.5%), Oxytetracycline(87.5%), Doxycycline(87.5%), Minocycline(87.5%), Ampicillin(95%), Carbenicillin(92.5%) and Cephalexin(97.5%) respectively. 7. There were high correlations among the suscebtibilities of the 80 strains of E. coli to Tetracycline analogues(Tetracycline, Oxytetracycline, Doxycycline and Minocycline) and among susceptibilities of the 80 strains of E. coli to Penicillin analogues(Penicillin, Ampicillin and Carbenicillin). 8. There were relatively high correlations between the susceptibilities of the 80 strains of E. coli to Penicillin analogues and those to Tetracycline analogues, between the susceptibilities to Penicillin analogues and those to Streptomycin and between the susceptibilities to Tetracycline analogues and those to Streptomycin.
Antibiotic resistance is often associated with the production of inner membrane proteins (for example, AcrAB/TolC efflux pump) that are capable to extrude antibiotics, detergents, dyes and organic solvents. In order to evaluate the unknown MarB function of Escherichia coli, especially focused on the function of OmpF porin, several mutants were construted by T4GT7 transduction. MarA plays a major roles in mar (multiple antibiotic resistance) phenotype with AcrAB/TolC efflux pump in E. coli K-12. Futhermore, MarA decreases OmpF porin expression via micF antisense RNA. Expression of acrAB is increased in strains containing mutation in marR, and in those carrying multicopy plasmid expressing marA. MarB protein of E. coli K-12 showed its activity at OmpF porin & TolC protein as target molecule. Some paper reported MarB positively regulates OmpF function. MarA shows mar phenotype, and MarB along with MarA show decreased MIC through OmpF function. By this experiment, MarB could decrease MIC through the OmpF porin & TolC protein as target.
본 연구는 신선편이 식품에서 오염 가능성이 있는 병원성 식중독 균 E. coli O157:H7에 대해 파프리카에서 성장 예측 모델을 적용하고, 본 연구에서 개발된 성장 예측 모델을 내부 검증하였다. 이를 비교하여 신선편이 식품을 안전하게 관리하기 위한 적절한 모델을 제시하고자 하였다. 파프리카에 E. coli O157:H7접종하여 온도에 따라 12, 24, 30, $36^{\circ}C$에 보관하여 성장을 측정하였다. Gompertz 식을 이용하여 온도에 따른 성장곡선을 그리고 LT와 SGR을 산출하였다. 산출된 LT와 SGR은 각각 Davey model와 squareroot model를 이용하여 2차 모델을 개발하였다. 개발된 2차 모델에 대하여 LT와 SGR model의 $R^2$값은 각각 0.999, 0.994로 1에 근접하는 높은 적합성을 보였다. 또한 내부 검정 결과 LT와 SGR model의 Bf 값은 각각 1.01, 0.89, LT model은 안전하게 SGR model 위험하게 예측되었다. 파프리카의 LT와 SGR의 상대적인 오차 값은 모두 허용 가능한 오차 범위에 포함 되었다. 따라서 개발된 모델을 이용하여 온도에 따른 E. coli O157:H7성장을 추정할 수 있으며, 이를 위해평가 자료로 활용할 수 있을 것으로 보인다.
In this experiment, observations were made on the effects of ginseng saponin, one of the major components of Korean ginseng (Panax ginseng, C. A. Meyer) root, on the membranes of microorganism (E. coli K-12), the concentration of intracelluar and extracellular cycle AMP therein, and uptake of U-14C-glucose. When the E. coli were grown on media containing 0.1% ginseng saponin, the growth was faster than for that of the control by about 30 minutes. The lysis of E. coli grown on the ginseng saponin medium increased to about double that of the control in the stationary phase. And the amount of protein and lipopolysaccharides in the outer cell meberances increased 25% and 80% respectively in comparison with the control. By electron microscope observation, it was shown that the periplasmic region of the E. coli grown on the ginseng saponin medium was widened it was observed that the cellular cyclic AMP content of the E. coli increased significantly to the hightest levels between the late exponential phase and early stationary phase. The total cyclic AMP content of E. coli grown on the ginseng saponin medium decreased about 50% when compared to that of the control.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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