• 생명과학회지
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• 제30권1호
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• pp.64-69
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• 2020

꿀벌(Apis mellifera)에는 많은 항균성 펩티드가 있습니다. 그러나 아직 많은 종류의 펩티드를 기능을 알려지지 않았다. 따라서, 알려지지 않은 기능성 펩티드의 특성화가 필요하다. 그래서 우리는 새로운 항균성 펩티드(AMP)를 분석 하였다. 우리는 Apis mellifera에서 total RNA를 분리하고 Illumina HiSeq 2500 차세대 시퀀싱(NGS) 기술을 사용하여 15,314 개의 펩티드 서열을 생성하여 새로운 AMP를 선발 하였다. AMP로서 기능을 가지는 AMP를 선발 하기 위해 AMP 서열의 특성 과 특징을 분석을 기초로 하여 알려지지 않은 펩티드 및 알려진 44 개의 펩티드가 확인 되었다. 그 중에서도 AMP5라는 특성화 되지 않은 펩티드를 선발 하였다. AMP5는 표피, 지방체, 독낭에서 발현된다. 항균 활성을 분석하기 위해 Gram-negative bacteria Escherichia coli KACC 10005 및 Bacillus thuringiensis KACC 10168에 대한 항균 활성을 합성한 AMP5 처리하여 시험 하였다. AMP5는 Gram-negative bacteria Escherichia coli에 대한 항균 활성을 나타냈다(MIC₅₀ = 22.04±0.66 μM). 일벌에 Escherichia coli을 주사했을 때 AMP5는 체내에서 항균성 펩티드로 발현이 높아졌다. 이러한 결과는 Escherichia coli에 대한 항균 활성을 나타냄을 확인하였다.

• Journal of Microbiology
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• 제44권1호
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• pp.92-97
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• 2006

We developed an mPCR assay for the simultaneous detection, in one tube, of Escherichia coli O157:H7, Salmonella spp., Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes using species-specific primers. The mPCR employed the E. coli O157:H7 specific primer Stx2A, Salmonella spp. specific primer Its, S. aureus specific primer Cap8A-B and L. monocytogenes specific primer Hly. Amplification with these primers produced products of 553, 312, 405 and 210 bp, respectively. All PCR products were easily detected by agarose gel electrophoresis, and the sequences of the specific amplicons assessed. Potential pathogenic bacteria, in laboratory-prepared and four commercially available kimchi products, were using this mPCR assay, and the amplicons cloned and sequenced. The results correlated exactly with sequences derived for amplicons obtained during preliminry tests with known organisms. The sensitivity of the assay was determined for the purified pathogen DNAs from four strains. The mPCR detected pathogen DNA at concentrations ranging from approximately 0.45 to $0.05\;pM/{\mu}l$. Thus, this mPCR assay may allow for the rapid, reliable and cost-effective identification of four potentially pathogens present in the mixed bacterial communities of commercially available kimchi.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권10호
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• pp.1751-1760
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• 2015

Mucin2 (MUC2), an important regulatory factor in the immune system, plays an important role in the host defense system against bacterial translocation. Probiotics known to regulate MUC2 gene expression have been widely studied, but the interactions among probiotic, pathogens, and mucin gene are still not fully understood. The aim of this study was to investigate the role of MUC2 in blocking effects of probiotics on meningitic E. coli-induced pathogenicities. In this study, live combined probiotic tablets containing living Bifidobacterium, Lactobacillus bulgaricus, and Streptococcus thermophilus were used. MUC2 expression was knocked down in Caco-2 cells by RNA interference. 5-Aza-2'-deoxycytidine (5-Aza-CdR), which enhances mucin-promoted probiotic effects through inducing production of Sadenosyl-L-methionine (SAMe), was used to up-regulate MUC2 expression in Caco-2 cells. The adhesion to and invasion of meningitic E. coli were detected by competition assays. Our studies showed that probiotic agents could block E. coli-caused intestinal colonization, bacteremia, and meningitis in a neonatal sepsis and meningitis rat model. MUC2 gene expression in the neonatal rats given probiotic agents was obviously higher than that of the infected and uninfected control groups without probiotic treatment. The prohibitive effects of probiotic agents on MUC2-knockdown Caco-2 cells infected with E44 were significantly reduced compared with nontransfected Caco-2 cells. Moreover, the results also showed that 5-Aza-CdR, a drug enhancing the production of SAMe that is a protective agent of probiotics, was able to significantly suppress adhesion and invasion of E44 to Caco-2 cells by upregulation of MUC2 expression. Taken together, our data suggest that probiotic agents can efficiently block meningitic E. coli-induced pathogenicities in a manner dependent on MUC2.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제44권3호
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• pp.341-348
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• 2016

본 연구는 폐글리세롤을 탄소원으로 사용하여 생장저해 없이 아미노레블린산(ALA)을 생산하는 미생물 공정을 개발하는데 그 목적이 있다. 폐글리세롤이 첨가된 배지에서 ALA 생산균주(E. coli/pH-hemA)를 배양하여 얻은 세포밀도와 ALA 생산량은 순수 글리세롤이 첨가된 배지에서 얻은 값보다 각각 1.8배와 1.2배 낮았다. 트레할로스를 첨가(30 g/l 또는 100 g/l) 함에 따라 세포생장과 ALA 생산성이 향상되었다. otsBA를 공동 발현하는 엔지니어링 균주(E. coli/pH-hemA/pS-otsBA)를 제작하여 순수 또는 폐글리세롤이 첨가된 배지에서 그 성능을 평가하였다. 폐글리세롤이 함유된 배지에서 엔지니어링 균주의 세포생장 및 생산성을 향상시키기 위하여 IPTG의 최적 첨가농도 및 시기를 결정하였다. 지수생장 초기에 0.6 mM의 IPTG를 첨가한 배양에서 세포 생장과 ALA 생산량이 최대치를 나타내었다. 이때 얻은 OD₆₀₀(세포 밀도)와 ALA 농도는 각각 16과 2,121 mg/l였는데, 이는 순수 글리세롤이 첨가된 배지에서 얻은 생산량과 비슷한 값이다. 본 결과는 ALA 생산균주에서 트레할로스 생합성 오페론의 최적 공동 발현을 통해 폐글리세롤에 대한 저항성을 높임으로써 추가적인 전처리 없이 폐글리세롤을 탄소원으로 직접 사용할 수 있음을 보여준다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제36권1호
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• pp.38-44
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• 2009

Two low temperature induced genes designated as SLTI66 and SLTI629 encoding KS-type dehydrin were heterologously expressed in E coli and A. thaliana. E coli cells expressing SLTI66 and SLTI629 protein grew better with iron stress compared to the control cells. Ectopic expression of SLTI629 conferred tolerance to iron stress in Arabidopsis but SLTI66 did not. Arabidopsis plants expressing SLTI66 showed enhanced tolerance to freezing and drought stress compared to those of wild type and SLTI629 lines. We propose that SLTI66 and SLTI629 play a different role as a protector against osmotic and metal stresses.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제30권3호
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• pp.249-257
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• 2015

위생적인 수확후처리를 통하여 안전한 농산물 생산을 유도하기 위하여 영양부추를 대상으로 수확후 처리시설 모델을 개발하였으며 개발된 수확후 처리시설 설치와 위생교육이 미생물 안전에 미치는 효과를 검증하고자 본 연구를 수행하였다. 이를 위하여 양주지역 영양부추 생산 농가의 수확 후 처리시설 환경과 영양부추에서 위생지표세균(일반세균수, 대장균군, E. coli)과 병원성미생물(Escherichia coli O157:H7, Salmonella spp., Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Bacillus cereus)을 조사하였다. 그 결과, 빗, 칼, 도마 등 수확후 처리시설에서 사용하는 작업도구의 일반세균수 오염수준은 수확후 처리시설 설치농가(A, B)에서 수확후 처리시설 비설치농가(C) 보다 1.44~2.33 log CFU / 100$100cm^2$ 정도 낮았다. 특히 도마의 경우 A농가에서 1.00 log CFU / 100$100cm^2$이하, B 농가에서 2.23 log CFU / $100cm^2$인데 반해 C 농가에서는 6.03 log CFU / $100cm^2$로 농가간의 위생 상태에 따라 B. cereus의 오염수준이 차이가 크게 나타났다. 또한 지하수에 침지 한 영양부추에서 침지 전 보다 대장균군이 0.57~1.89 log CFU/g이 증가하였다. E. coli는 영양부추, 침지한 후 지하수, 토양에서 검출되었으며, E. coli O157:H7, Salmonella spp., L. monocytogenes는 검출되지 않았다. 따라서 본 연구의 결과를 통하여 소규모 수확 후 처리시설 설치와 위생교육을 통하여 농가 내 수확후처리 환경의 위생을 개선하는데 효과적이라 판단된다. 이와 더불어 유해미생물에 의한 식중독사고를 사전에 예방하기 위해서는 수확 후에 오염된 유해미생물을 저감화 할 수 있는 세척, 소독 기술의 개발과 도입이 필요할 것으로 사료된다.

• BMB Reports
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• 제37권5호
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• pp.574-581
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• 2004

The full-length cDNA of the lumbrokinase fraction 6 (F6) protease gene of Lumbricus rubellus was amplified using an mRNA template, sequenced and expressed in E. coli cells. The F6 protease gene consisted of pro- and mature sequences by gene sequence analysis, and the protease was translated and modified into active mature polypeptide by N-terminal amino acid sequence analysis of the F6 protease. The pro-region of F6 protease consisted of the 44 residues from methionine-1 to lysine-44, and the mature polypeptide sequence (239 amino acid residues and one stop codon; 720 bp) started from isoleucine-45 and continued to the terminal residue. F6 protease gene clones having pro-mature sequence and mature sequence produced inclusion bodies in E. coli cells. When inclusion bodies were orally administrated rats, generated thrombus weight in the rat' venous was reduced by approximately 60% versus controls. When the inclusion bodies were solubilized in pepsin and/or trypsin solutions, the solubilized enzymes showed hemolytic activity in vitro. It was concluded the F6 protease has hemolytic activity, and that it is composed of pro- and mature regions.

• 한국수산과학회지
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• 제12권1호
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• pp.19-26
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• 1979

패류에서 저온성 대장균군의 위생학적 의의 및 패류의 위상상태를 평가하기 위한 자료를 얻고자 1978년 1월부터 12월까지 매월 참굴, 바지락, 홍합, 고막을 시료로하여 실험한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 균수의 범위는 생균수가 $1.3\times10^3-2.5\times10^6/g$, 대장균군이 $>\~5.5\times10^2/g$, E. coli MPN이 $2\~9$. $2\times10^2/100g$으로 생균수는 4월에서 10월사이에는 대부분의 시료에서 패류의 위생학적 기준치를 초과하였고 E. coli 최확수도 7검체에서 초과한 것으로 나타났다. 2. 대장균군 373균주중 298균주가 분류동정되었고 이 가운데서 E. coli 1이 138균주$(46\%)$, K. aerogenes 1이 71균주$(46\%)$였다. 3. $5^{\circ}C$에서 발육가능한 저온성 대장균군은 분리균 373균주중에서 186균주로 $50\%$였다. 4. 세균 flora는 분리균 453균주 가운데서 Vibrio가 240균주$(53\%)$, Pseudomonas가 91균주$(20\%)$로 이들 2균속이 우세한 세균류를 구성하고 있었다. 5. 세균류의 계절적 변동은 Vibrio가 5월에서 10월사이 분포도가 높은 경향을 나타냈고 Moraxella 동계아만 검출되었으며 그 외의 균속은 큰 변동이 보이지 않았다. (본 연구는 1977년도 문교부 학술연구 조성비에 의한 것임).

• BMB Reports
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• 제44권3호
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• pp.193-198
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• 2011

The chitinase-producing strain SC081 was isolated from Korean traditional soy sauce and identified as Bacillus atrophaeus based on a phylogenetic analysis of the 16S rDNA sequence and a phenotypic analysis. A gene encoding chitinase from B. atrophaeus SC081 was cloned in Escherichia coli and was named SCChi-1 (GQ360078). The SCChi-1 nucleotide sequences were composed of 1788 base pairs and 596 amino acids, which were 92.6, 89.6, 89.3, and 78.9% identical to those of Bacillus subtilis (ABG57262), Bacillus pumilus (ABI15082), Bacillus amyloliquefaciens (ABO15008), and Bacillus licheniformis (ACF40833), respectively. A recombinant SCChi-1 containing a hexahistidine tag at the amino-terminus was constructed, overexpressed, and purified in E. coli to characterize SCChi-1. $H_6SCChi$-1 revealed a hydrolytic band on zymograms containing 0.1% glycol chitin and showed the highest lytic activity on colloidal chitin and acidic chitosan. The optimal temperature and pH for chitinolytic activity were $50^{\circ}C$ and pH 8.0, respectively.

• 한국식품과학회지
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• 제44권1호
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• pp.114-120
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• 2012

해마다 반복되는 식중독 발생을 예방하기 위한 한 접근 방법으로써 시판품의 다양한 도마(항균처리 plastic 재질 3종, 항균처리 않은 plastic재질 1종, 나무재질(홍송, 고무나무, 편백나무, 박달나무, 대나무)를 대상으로 세균성 식중독의 주요한 원인균인 Escherichia coli O157:H7, S. Typhimurium, V. vulnificus, V. cholerae, V. parahaemolyticus 및 S. aureus의 6종 미생물에 대하여 저지환 시험과 real-time PCR을 이용한 정량법을 이용하여 항균력을 평가하였다. Plastic 재질의 도마들은 E. coli O157:H7, S. Typhimurium, S. aureus의 식중독균에 대해 항균력을 나타내었고, 항균력이 표시된 도마와 표시되어있지 않은 도마들 간의 항균력 차이는 크지 않았다. 나무 재질의 도마는 V. vulnificus에 대해서 항균력을 나타내었고, 5종의 나무 재질의 도마들 중 대나무 도마는 E. coli O157:H7, S. Typhimurium, V. cholerae, V. vulnificus의 4종의 균에 대해 저지환 시험에서 항균력을 나타내었으며, real-time PCR로 정량한 결과에서는 S. aureus에 대해 생육억제력을 나타내어 5종의 식중독균에 대하여 가장 광범위한 항균력을 보였다. 이는 대나무에 함유된 polyphenol과 organic acid 등의 작용으로 추측된다. 항균력이 있다고 표시된 도마에서도 시험 대상 균들 중 일부에 대해서만 항균력이 나타났으며, 재질별로 항균력에 차이가 나타났던 결과들로부터 도마에 대한 위생상의 지나친 신뢰는 큰 위험을 초래할 가능성이 있음을 인식하고, 조리의 최종관리자들에 의한 일상적인 철저한 관리가 필요하다고 판단된다.