A sensitive reverse transcriptase-PCR (RT-PCR) method to detect viable Escherichia coli O157:H7 in milk was established. The primer sets were designed based on the nucleotide sequences of the rfbE (per) and wbdN genes in the O157 antigen gene cluster of E. coli O157:H7. RT-PCR using five different primer sets yielded DNA with sizes of 655, 518, 450, and 149-bp, respectively. All five of the E. coli O157:H7 strains were detected by RT-PCR, but 11 other bacterial species were not. The sensitivity of RT-PCR was improved by adding yeast tRNA as a carrier to the crude RNA extract. The RT-PCR amplifying the 149-bp DNA fragment was the most sensitive for detecting E. coli O157:H7 and the most refractory to the bactericidal treatments. Heat treatment at $65^{\circ}C$ for 30 min was the least inhibitory of all bactericidal treatments. Treatment with RNase A strongly inhibited the RT-PCR of heated milk but not unheated milk. This study described RT-PCR methods that are specific and sensitive with a detection limit of 10 E. coli O157:H7 cells, and showed that pre-treating milk samples with RNase A improved the specificity to detect viable bacteria by RT-PCR.
The objective of this research was to provide the characterization and method for producing anti-E. coli O157:H7 antibodies in egg-laying hens and to determine if the antibody can restrain the proliferation of E. coli O157:H7 in-vitro. Selected antigenic fractions (whole cell, outer membrane protein and lipopolysaccharide (LPS)) from E. coli O157:H7 were injected to hens in order to produce anti-E. coli O157:H7 antibodies. The immune response and the egg yolk antibodies of laying hens against the whole cell, outer membrane protein and LPS antigens were monitored by ELISA. The level of antibodies against whole cell antigen monitored through ELISA sharply increased after the initial immunization, and it was found to be maximum on day 49 however, the level was maintained up to day 70. Antibodies (5 mg/ml) directed against the whole cell inhibited E. coli proliferation 10-13 times more than outer membrane protein or LPS. The antibody response against the whole cell antigens appeared to have higher activity in restraining the proliferation of E. coli O157:H7 than antibody against outer membrane protein or LPS. Results reflected that increasing the IgY's in the egg yolk could prevent greater economic losses due to human and animal health from pathogenic bacteria i.e. E. coli O157:H7.
본 연구는 황련, 금은화, 그리고 백작약 등 한약재 복합 추출물의 E. coli O157:H7에 대한 항균효과와, 한약재 복합추출물과 dioctahedral smectite의 합제의 E. coli O157:H7 감염 마우스에 대한 효과를 평가하기 위해 수행되었다. 한약재 복합추출물, CLP1000을 이용하여 E. coli O157:H7에 대한 항균효과 확인 시험을 수행한 결과, CLP1000 10%와 20%를 첨가한 배지에서 E. coli O157:H7의 성장을 각각 30%와 47%를 억제하는 효과가 관찰되었다. 또한, E. coli O157:H7을 김염시킨 마우스에 CLP1000, dioctahedral smectite (DHS), 그리고 CLP1000와 DHS 합제 (CLPS1000)를 각각 7 일 동안 경시별로 마우스 분변 중의 E. coli O157:H7 균수의 변화를 관찰한 결과, 투여 3일째에, 10% CLPS1000을 투여한 군에서 대조군과 비교하여 E. coli O157:H7의 균수가 유의성 있게 감소하였으며(p < 0.05), 투여 7일째에는 10% CLP1000 (p < 0.05)과 10% CLPS1000을 투여한 군에서 대조군과 비교하여 E. coli O157:H7의 균수가 유의성 있게 감소하는 결과를 나타내었다. 따라서 본 연구의 결과로부터, CLPS1000을 E. coli O157:H7에 감염된 마우스에 투여할 경우 감염증상을 완화 시킬 수 있을 것으로 기대된다.
While searching for healthier diets, people became more attentive to agricultural organic products. However, organic foods may be more susceptible to microbiological contamination because of the use of livestock manure compost and liquid manure, potential sources of pathogenic bacteria. This study was undertaken to investigate the persistence of Salmonella enterica, Escherichia coli O157:H7, and Listeria monocytogenes in soil, liquid manure amended soil, and liquid manure. Loamy soil, liquid manure amended soil, and liquid manure were inoculated with S. enterica, E. coli O157:H7, and L. monocytogenes. Samples were incubated in consistent moisture content at $25^{\circ}C$. Samples had been periodically collected during 120 days depending on the given conditions. S. enterica and E. coli O157:H7 survived over 120 days in loamy soil and over 60 days in liquid manure amended soil, respectively. L. monocytogenes decreased faster than other pathogens in soil. S. enterica, E. coli O157:H7, and L. monocytogenes survived for up to 5 days in liquid manure. S. enterica and E. coli O157:H7 in soil decreased by 2 to $2.5log\;CFU\;g^{-1}$ for 120 days. S. enterica and E. coli O157:H7 in liquid manure amended soil decreased slowly for 21 days. However, S. enterica, E. coli O157:H7, and L. monocytogenes sharply decreased after 21 days. S. enterica, E. coli O157:H7, and L. monocytogenes in soil increased by 0.5 to $1.0log\;CFU\;g^{-1}$ for 7 days. Foodborne pathogens in soil and liquid manure amended soil gradually decreased over time.
본 연구는 황련, 감초, 오미자 그리고 산수유 한약재 복합추출물의 $E.$$coli$ O157:H7에 대한 항균효과와, 한약재 복합추출물과 염소산나트륨 합제의 $E.$$coli$ O157:H7 감염 마우스에 대한 항균효과를 평가하기 위해 수행되었다. 한약재 복합추출물, CGSC10을 이용하여 $E.$$coli$ O157:H7에 대한 항균효과 확인 시험을 수행한 결과, CGSC10 5, 10, 그리고 20%를 첨가한 배지에서 30시간 동안 배양한 후, $E.$$coli$ O157:H7의 성장이 각각 34.7, 60.2, 그리고 76.4% 억제되는 효과가 관찰되었다. 또한, $E.$$coli$ O157:H7을 감염시킨 마우스에 CGSC10, 염소산나트륨, 그리고 CGSC10와 염소산나트륨 합제(CGSCS10)를 음용수를 통해 투여한 결과, 투여 3일째부터, 모든 투여군에서 대조군과 비교하여 $E.$$coli$ O157:H7의 균수가 유의성 있게 감소하였으며($p$ < 0.001), 투여 7일째에는, 10% CGSC10, 15mM 염소산나트륨, 그리고 CGSCS10을 투여한 군에서 대조군과 비교하여 $E.$$coli$ O157:H7의 균수가 각각 27.1, 67.7, 그리고 83.3% 정도 감소하는 결과를 나타내었다. 따라서 본 연구의 결과로부터, CGSCS10을 $E.$$coli$ O157:H7에 감염된 마우스에 음수로 투여할 경우, 감염증상을 완화 시킬 수 있을 것으로 기대된다.
Kim, Giyoung;Moon, Ji-Hea;Park, Saet Byeol;Jang, Youn-Jung;Lim, Jongguk;Mo, Changyeun
Journal of Biosystems Engineering
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제38권4호
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pp.335-340
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2013
Purpose: This study was performed to develop a lateral flow strip sensor for the detection of pathogenic Escherichia coli O157:H7 in various samples. Also, feasibility of using an image analysis method to improve the interpretation of the strip sensor was evaluated. Methods: The lateral flow strip sensor has been fabricated based on nitrocellulose lateral-flow membrane. Colloidal gold and E. coli O157:H7 antibodies were used as a tag and a receptor, respectively. Manually spotted E. coli O157:H7 antibody and anti-mouse antibody on nitrocellulose membrane were used as test and control dots, respectively. Feasibility of the lateral flow strip sensor to detect E. coli O157:H7 were evaluated with serially diluted E. coli O157:H7 cells in PBS or food samples. Test results of the lateral flow strip sensor were measured with an image analysis method. Results: The intensity of the test dot started to increase with higher concentration of the cells were introduced. The sensitivities of the sensor were both $10^4$ CFU/mL Escherichia coli O157:H7 spiked in PBS and in chicken meat extract, respectively. Conclusions: The lateral flow strip sensor and image analysis method could detect E. coli O157:H7 in 20 min, which is significantly quicker than conventional plate counting method.
본 연구는 병원성 Escherichia coli O157:H7 균주에 의한 식중독을 미연에 예방하고자 우육에 본 균주를 오염, 동결시켜 전자선에 의한 살균효과를 조사하였다. $37^{\circ}C$에서는 배양 16시간째에 최대균수를 나타내었고 $4^{\circ}C$에서는 균주의 증식이 거의 없었다. E. coli O157:H7 균주는 대수기나 정지기 모두가 $0^{\circ}C$ (chilled)와 $-18^{\circ}C$ (frozen)에서 배양시 약 $10^{7}\;CFU/mL$의 균수를 나타내었고 $-18^{\circ}C$에서는 $20^{\circ}C$ 보다 균주의 사멸율이 높았다. 동결육에 오염된 E. coli O157:H7 균주의 방사선 감수성은 $D_{(10)}$ 값이 0.45 kGy, 불활성화계수가 $3{\sim}5\;kGy$에서 $6.67{\sim}11.11$로 각각 나타났다. 본 결과로서 전자선 조사는 동결육에 오염된 E. coli O157:H7 균주의 제거방법으로 매우 효과가 있었다.
후춧가루에 존재하는 식중독 균을 저감화시키기 위한 방법으로 UV-C와 mild heat를 병합 처리 가능성을 타진하였다. Escherichia coli O157:H7 (ATCC 35150)와 Salmonella Typhimurium (ATCC 19585)를 후춧가루에 각각 $10^6$, $10^7CFU/g$ 수준으로 인위접종하여 $2.32W/cm^2$의 UV-C와 $60^{\circ}C$의 mild heat을 10분에서 70분 동안 처리하였다. 그 후 미생물 분석 및 후춧가루의 품질변화를 측정하였다. UV-C를 단독으로 70분 동안 처리했을 때 E. coli O157:H7과 S. Typhimurium는 각각 1.89, 2.24 log CFU/g 수준으로 감소하였지만, UV-C와 mild heat을 70분 동안 병합처리 했을 때는 각각 2.46, 5.70 log CFU/g으로 감소하였다. E. coli O157:H7 보다는 S. Typhimurium의 저감효과가 더 컸다. 색도는 모든 처리구에서 유의적인 차이가 없는 것으로 나타났다. 따라서 UV-C와 mild heat 병합처리는 후춧가루에 존재하는 식중독 균을 사멸시키는 데 효과적이기 때문에 산업적인 살균처리 기술로 활용될 수 있을 것으로 판단되었다.
E. coli O157:H7에 대한 마늘즙액의 항균작용을 알아보기 위하여 마늘즙액의 처리량을 농도별 조건을 달리한 후 생균수 측정을 실시하였다. 마늘즙액 농도가 1%에서는 첨가하지 않았을 때에 비해 E. coli O157:H7의 생균수가 약간 줄어들었으나 마늘즙 처리량이 3%에서는 약 5 log, 마늘즙 처리량이 5%로 증가했을 때는 약 6 log의 생균수 감소를 보였다. 마늘즙의 식육내 항균작용 효과를 알아본 결과, 저육에서 3%, 6%, 10%의 마늘즙 농도별 차이에 따른 E. coli O157:H7에 대한 항균효과는 크게 다르지 않음을 알 수 있었다. 마늘즙의 가장 뚜렷한 저해 효과는 저장 9일에 나타나 약 2 log의 생균수 감소가 관찰되었다. 저장 9일 이후에는 E. coli O157:H7의 생균수가 다시 증가하는 것으로 미루어 마늘즙의 항균 효과가 소실되는 것으로 추정된다. 본 실험의 결과, 마늘의 조미료로써의 기능과 더불어 천연 방부제로써의 항균효과에 관한 기초 자료를 얻을 수 있었다.
The inhibitory effect of the food processing agent on growth of Escherichia coli O157:H7, Salmonella Enteritidis, and Listeria monocytogenes was performed with hydrogen peroxide and lactic acid, and combination of hydrogen peroxide and lactic acid. The minimun inhibitory concentration (MIC) of hydrogen peroxide in E coli O157:H7 was 100 ppm at pH 5.0, 6.0, 6.5 and 7.0, while in Listeria monocytogenes 25 ppm at PH 5.5, 6.0 and 50 ppm at PH 6.5, 75ppm at pH 7.0. MIC of lactic acid in E coli O157:H7 was 2500 ppm at pH 5.0, 6.0, 6.5 and 7.0. MIC of lactic acid in S. Enteritidis was 1250 ppm at pH 5.0, 2500 ppm at pH 5.5, 6.0, 5.5 and 7.0, while in L monocytogenes 625 ppm at pH 5.5 and 125 ppm at pH 6.0, 6.5 and 7.0. MIC of combined hydrogen Peroxide and lactic acid in E. coli O157:H7, S. Enteritidis, and L. monocytogenes was 75 ppm of hydrogen peroxide with 2500 ppm of lactic acid at pH 6.5. The correlations between MICs of hydrogen peroxide and lactic acid in E. coli O157:H7, S. Enteritidis and L. monocytogene were obtained through the coefficient of $determination(R^2)$. $R^2$ value were 0.9994, 0.9935 and 0.9283, respectively. The inhibitory effect of hydrogen peroxide and lactic acid in E. coli O157:H7, S. Enteritidis and L. monocytogenes could be confirmed from the result of this experiment. Therefore, it was expected that the food process would increase or maintain by using lactic acid together with hydrogen peroxide.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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