Haploid/double haploid plants developed from isolated microspores can significantly accelerate plant breeding. Haploid plants can naturally double their chromosomes to create a pure homozygous line of diploid plants. We present a method for producing embryos from isolated microspores of hot peppers (Capsicum annuumL.). We analyzed the polyploidization levels of the regenerated plants. The donor plants produced the optimal stage of microspores following short-term growth under low-intensity light, which resulted in high rates of embryogenesis and cotyledonary embryogenesis. To find an efficient culture method, liquid, doubled-layer, and 2-step cultures were tested. Liquid culture yielded the highest number of embryos, whereas the highest efficiency for cotyledonary embryogenesis was afforded by the doubled-layer culture. When normal cotyledonary embryos were transplanted onto a regeneration medium, they developed into complete plants. From these, 208 plants were tested via flow cytometric analysis, and 35.6% and 72.7% of the chromosomes from the Milyang-jare and LV2319 genotypes, respectively, were found to be spontaneous double haploids. These results are the same as those obtained on analyzing horticultural characteristics, including the size of leaves and the size and shape of fruits. The present study provides information on the practical application of isolated microspore culture of hot peppers, factors that affect embryogenesis, and methods for polyploidy testing.
Shrestha, Surendra Lal;Luitel, Binod Prasad;Lee, Taek Jong;Kang, Won Hee
한국육종학회지
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제42권5호
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pp.431-438
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2010
Anthers of sweet pepper $F_1$ cultivar 'Special' were cultured on Dumas De Vaulx (C medium), supplemented with $0.1mgL^{-1}$ 2, 4-D and $0.1mg{\cdot}L^{-1}$ kinetin with 3% sucrose, and 0.32% phytagel. The calluses obtained were further sub-cultured on Murashige and Skoog (MS) medium without growth regulators for regeneration. Regenerated plantlets were grown in plastic pots under plastic house and characterized their cytological and morphological characters in spring, 2008. Twenty percent plantlets were identified as haploid plants after chromosome and ploidy analysis. Haploid plants contained 12 chromosomes, high stomatal density with small stomatal length as compared to diploid plants. Stomatal length in haploids was 23.3% smaller than diploids. Haploid plants were characterized as small leaf and petiole size, poor vigor, thin stem and short plant height, short internodes and small flower buds, fruit size and fruit weight as compared to diploid plants and most of the haploid fruits were seedless. SP55, SP62, SP68, SP72 and SP77 are found high yielding double haploids with high total soluble content (8.6, 8.7, 9.2, 9.1 and $9.8^{\circ}Brix$, respectively) and desirable fruit shape, and recommended them to exploit as inbred lines for heterosis breeding.
본 연구에서는 유지형 배추인 LP08과 청경채형 LP21을 교배한 교잡종 $F_1$을 소포자 배양하여 유전적으로 고정된 계통을 획득하였다. 엽의 결각 유무 및 결각수에서 다양한 형태적 특징을 보이는 66개 고정계통을 대상으로 항암 및 항산화 물질로 알려진 플라보노이드의 함량을 분석하였다. 66개 고정 계통의 엽의 결각 유무와 플라보노이드 함량 간 상관관계는 관찰되지 않았다. 양친으로 사용된 LP08, LP21 그리고 결구 배추형 품종인 Chiifu를 대상으로 플라보노이드 분석을 실시한 결과, quercetin, naringenin, 및 kaempferol 함량의 다양한 분포가 관찰되었다. 또한 모계인 LP08에서 가장 높은 총 플라보노이드 함량을 나타내었고 결구 배추형인 Chiifu에서 가장 낮은 함량을 보였다. 66개 고정 계통을 대상으로 플라보노이드 함량을 분석한 결과, quercetin은 LP08 보다 높은 함량을 보이는 18 계통이 확인되었으나 naringenin과 kaempferol에서는 교배친 보다 높은 함량을 보이는 계통을 발견할 수 없었다. 총 플라보노이드 함량에서 kampferol은 79.7 %, quercetin은 17.4 %의 비율을 보였고 naringenin의 경우 2.8 %로 거의 대부분의 계통에서 가장 낮은 함량을 보이고 22개 계통에서는 전혀 발견되지 않았다. 또한 성분간 상관관계를 분석한 결과 quercetin과 kaempferol의 함량간에 유의한 상관관계가 있음을 확인할 수 있었다. 본 실험의 결과는 향후 플라보노이드 생합성 기작 관련 유전자 탐색을 위한 자료로 활용할 예정이다. 또한 고정 계통을 대상으로 다양하고 광범위한 형질 조사를 실시하여 배추의 품종 개발이 가능할 것으로 기대된다.
본 연구에서는 고추의 나출 소포자 배양 시 배양 중 새배지의 첨가와 진탕이 배의 생산에 미치는 영향을 조사하였다. 액체-2층 배양에서 초기 액체배양 시에 새 배지를 첨가하면 배의 발생과 발달 모두 크게 증가하였다. 가장 효과적인 첨가 시기는 초기액체 배양을 시작한 5일 후 이었다. 한편 액체-2층 배양에서 후기 2층배양 시의 새 배지 첨가는 초기 액체배양 시 첨가 때에 비해 그 효과가 적었다. 액체-2층 배양에서 후기 2층배양 시의 1주간 진탕은 정상 자엽배 생산에 효과적이었다. 액체배양시에도 배양 1주 후의 1주간 진탕은 배의 발달에 효과적 이었다. 그러나 액체-2층배양 시와 액체배양 시 모두 진탕기간이 2 ~ 3 주간으로 길어질 때에는 배의 발달이 비정상적이었다. 본 실험 결과 얻어진 정상 자엽배들은 재분화 배지에 이식 시 용이하게 유식물체로 발달하였다. 재분화 식물체들 중에는 반수체와 배가반수체가 혼재하였으며, 이들 간에는 공변세포 내 엽록체 수의 차이가 뚜렷하였다. 이와 같은 결과들은 고추에서 다수의 정상자엽배를 생산할 수 있는 소포자 배양 시스템을 확립하는 데 중요한 기초자료가 될 것이다.
Okazaki, K.;Kawamura, K.;Kodama, T.;Shimizu, S.;Tomita, H.;Doullah, M.A.U.;Fukai, E.
한국균학회소식:학술대회논문집
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한국균학회 2015년도 춘계학술대회 및 임시총회
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pp.38-38
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2015
Throughout the world, clubroot disease is one of the most damaging diseases affecting Brassica oleracea. In order to perform QTL analysis of CR (clubroot resistance) loci in B. oleracea, we constructed a map, and analyzed CR-QTLs using the mean phenotypes of F3 progenies from the cross of a resistant double-haploid cabbage line (Anju) with a susceptible double-haploid broccoli line (GC). We identified one major QTL, pb-Bo(Anju)1 in C2 from Anju and four minor QTLs; pb-Bo(GC)1 in O5 from GC, pb-Bo(Anju)2, -3, -4 in C2, C3, and C7 from Anju, respectively. Additionally, we found that the accumulation of Pb-Bo(Anju)1 allele and the minor CR-QTLs is essential for resistance against various six isolates. Our finding markers closely linked to the CR-QTLs will help marker-assisted selection for CR. At present, we are undergoing toward map-based cloning for Pb-Bo(Anju)1 gene. The preliminary experiment delimited Pb-Bo(Anju)1 locus, encompassing among 450kB.
This experiment was designed to elucidate the life cycle of 7 species (Rh.nigricans, Rh. delemar, Rh.oryzae, Rh.acidus, Rh.tritici, Rh. formosaensis and Rh. japonicus) in genus Rhizopus isolated from Korean soil, so as to seize the appropriate stage for detecting their chromosomal number and nuclear size under the method of thin layer slide culture using modified Rogers(1965a) medium. The results are summarized as the folowings ; 1. The haploid chromosome number are found 16 in Rh. japonicus are 8, respectively. 2. Comparing the 7 species of Rhizopus with each other, it may be concluded that the basic haploid chromosome number of genus Rhizopus distributed in Korean soil are 8 and that Rh. nigricans is double of the basic hapolid chromosome number (n = 16). Besides them, the other two species (Rh. tritici and Rh. formosaensis) are believed aneuploids.
The objective of this study was to characterize the main-effect QTLs, epistatic QTLs and QTL-by-environment interactions (QE), which are involved in the control of protein content. A population of 120 doubled haploid (DH) lines derived from a cross between 'Samgang' and 'Nagdong', was planted and determined for protein content over three years. Based on the population and a genetic linkage map of 172 markers, QTL analysis was conducted by WinQTLcart 2.5 and QTLMAPPER. Three main-effect QTLs affecting protein content of brown rice were detected from 2004 to 2006 on chromosomes 1 and 11. The qPC11.2 was repeatedly detected across two years. Seven pairs of epistatic loci were identified on eight chromosomes for protein content and collectively explained 39.15% of phenotype variation. These results suggest that epistatic effects might be an even more important component of the genetic basis for protein content and that the segregation of the DH lines for protein content could be largely explained by a few main-effect QTLs and many epistatic loci.
Arsenic (As) is a toxic heavy metal that affects the major rice-growing regions of the world and can cause cancer in humans. Rice paddy fields in South Asia are mostly dependent on arsenic-contaminated water sources due to which rice takes up the arsenic from the soil through roots and accumulates it in plant different parts. Here, we present a quantitative trait locus (QTL) mapping study to find out candidate genes conferring As toxicity tolerance in rice (Oryza sativa L.) at the seedling stage. Three weeks old, 120 double haploid CNDH lines derived from a cross between the Indica variety Cheongcheong and the Japonica variety Nagdong and their parental lines were used by treating with 25 μM As. After 2 weeks ofAs stress, 5 traits such as; shoot length (SL), root length (RL), shoot fresh weight (SFW), root fresh weight (RFW), and chlorophyll contents (CHC) were measured. A linkage map of 12 rice chromosomes was constructed from genotypic data DH lines using 778 SSR markers. The linkage map covered a total genetic distance of 2121.7 cM of the rice genome with an average interval of 10.6 cM between markers. A total of seventeen QTLs (LOD>2) were mapped on chromosomes 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9, 11, and 12 using composite interval mapping with trait-increasing alleles coming from both parents. Five QTLs for SL, Two QTLs for RL, Five QTLs for SHL, Three QTLs for RFW, and Two QTLs for CHC were detected. The QTLs related to CHC were selected for forther study.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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