To develop zearalenone-specific monoclonal antibodies, hybridoma cells were produced by fusion of myeloma cells $(P3{\times}63Ag\;V653)$ and spleen cells from BALB/c female mice immunized with zearalenone-oxime coupled to bovine serum albumin (BSA). After screening of antibody titer of them with a sandwich type enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), 5 hybridomas which could produced monoclonal antibodies with a high affinity for zearalenone were selected. The monoclonal antibody produced by Z-2-M26 hybridoma exhibited the high sensitivity to zearalenone and a little cross-reactivity to ${\alpha}-zearalenol$ (11%), but did not react with ${\beta}-zearalenol,\;{\alpha}-zearalenol,\;{\beta}-zearalenol$ and DON. In conclusion, the developed monoclonal antibody appeared to be a very promising immunoreagent for the future development of a specific and sensitive quantitative ELISA for zearalenone.
Intracellular free $Ca^{2+}$ contributes to regulation of various events occurring in vascular smooth muscle cells. One of these events is modulating the membrane iou currents. Single smooth muscle cells were isolated from rabbit mesenteric artery. Three kinds of $Ca^{2+}-activated\;current$ were studied with the patch clamp method. $Ca^{2+}-activated\;K^+\;current$ with a large oscillation was recorded in the depolarized potential range. The single channel conductance of this current was about 250 pS. It was abolished by replacing intracellular $K^+\;with\;Cs^+$. A $Ca^{2+}-activated$ nonselective cation current was observed in both the depolarized and hyperpolarized potential ranges. And it was blocked by replacement of extracellular $Na^+$ with N-methylglucamine (NMG) or extracellular application of $Cd^{2+}$. $Ca^{2+}-activated\;Cl^-\;current$ was revealed in the whole voltage range and was blocked by niflumic acid. These results indicate that at least three kinds of $Ca^{2+}-activated$ ionic currents exist in smooth muscle cells from rabbit superior mesenteric artery.
For a long time Rhus vemiciflua Stokes (RVS) has been traditionally used as a herbal plant in Asia. In this study, we have investigated the effect of acetone extract of Rhus verniciflua Stokes (RVSE) and fisetin, a component of RVSE, on DNA damage response in NIH3T3 cells. Exposure of cells to DVB light $(200 J/m^2)$ and postincubation in growth medium for 48 hr resulted in a decrease of cell viability to about $10-20\%$ of nontreated control. Addition of various concentrations of RVSE in the postincubation medium, however, significantly increased the cell viability as compared with the values expected. The genotoxicity-decreasing effect was also demonstrated in cells exposed to UVB light and incubated in medium containing fisetin. The genotoxicity-decreasing effect of RVSE and fisetin was further demonstrated by various analyses including cell morphology studies, trypan blue exclusion assay and DAPI staining. By Annexin V binding analysis, RVSE and fisetin were shown to decrease the early apoptosis induced by UVB exposure. These results suggest the RVSE contain components that either increase the DNA repair or decrease the apoptosis in UVB-exposed cells.
Journal of the Korean Institute of Telematics and Electronics D
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v.34D
no.9
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pp.56-63
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1997
There generally exists a large variation in the thereshold voltages of the flash EEPROM cells after they are erased by using th fowler-nordheim tunneling, thereby getting some cells to be overeased. If the overerased cells are programmed with the conventional one-step programming scheme where an 12-13V pulse with the duration of 100.mu.S is applie don the control gate for the programming, they can suffer from the significant degradation of the reliability of the gate oxide. A two-step programming schem, where an 8/12 V pulse with a duration of 50.mu.S for each voltage is applied on the control gate for the programming, has been studied to solve the problem. The experimental results hav eshown that there is little difference in the programming characteristics between those two schemes, whereas the degradation of the gate oxide due to the programming can be significantly reduced with the two-step programming scheme compared to that with the one-step programming scheme. This is possibly because the positive charge stored in the floating gate of the overerased cells is compensate dwith the electrons injected into the floating gate while the 8V pulse is applied on the control gate, which leaves the overerased cells in the normally erased state after the duration of the 8V pulse.
In this paper, the surface of electrodes used in solar cells was roughened using wet etching method among surface texturing method, and after surface treatment, dye sensitive solar cell using TiO2 oxide semiconductor was produced. The surface spectroscopic properties of surface treated electrodes were analyzed according to etching time, and by evaluating the electrical properties of TiO2 dye-sensitized solar cells produced according to etching time, the study on improving the efficiency of solar cells according to surface treatment was conducted. As a result, solar cells that etched the electrode surface for 10 minutes could see an improvement of about 27.46[%] over their existing efficiency.
Background: Toll-like receptors (TLRs) play a fundamental role in innate immunity through their capacity to recognize pathogen-associated molecular patterns. Also, TLRs that are expressed in T cells are reported to function as co-stimulatory receptors. However, the functional capacity of TLRs on CD4 T and CD8 T cells has not been directly compared. Here we compared CD4 and CD8 T cell responses to TLR2 ligand plus TCR-mediated stimulation. Methods: TLR2 expression was analyzed on T cell subsets under naive and alloantigen-primed conditions. We analyzed the effects of TLR2 co-stimulation on proliferation and survival of T cell subsets in vitro when stimulated with soluble anti-CD3 in the presence or absence of synthetic ligand $Pam_3CSK_4$. Results: TLR2 expression on CD8 T cells was induced following activation; this expression was much higher than on CD4 T cells. Thus, the molecule was constitutively expressed on Listeriaspecific memory CD8 T cells. Based on these expression levels, proliferation and survival were markedly elevated in CD8 T cells in response to the TLR2 co-stimulation by $Pam_3CSK_4$ compared with those in CD4 T cells. Conclusion: Our data show that TLR2 co-stimulation is more responsible for proliferation and survival of CD8 T cells than for that of CD4 T cells.
Electrophysiological effects of ammonia was studied in the isolated superfused sinus node and atrial muscle cells of the rabbit heart. No significant changes were observed in the overshoot potential (05), maximum diastolic potential (MDP), and action potential amplitude (APA) of the sinus node cells following superfusion with 3.0 mM ammonia, fifty times upper limit of the normal human plasma level. However the action potential duration (APD) of sinus node cells were significantly prolonged after superfusion with 0.6 mM ammonia for 20 min or with 1.2 and 3.0 mM ammonia for 5 minutes. Ammonia in all the concentrations tested decreased the rate of spontaneous firing (RSF) from the sinus node cells. After superfusion of sinus node cells with 0.3 mM ammonia for 20 min, the RSF significantly decreased from 20 min to 25 min after onset of superfusion while a significant decrement in the RSF was observed from 7 min to 30 min following superfusion with 3.0 mM ammonia for S min. On the other hand, the effects of ammonia on the action potential of the rabbit atrial muscle cell were much similar to those on pacemaker cells except that the atrial cell was generally less sensitive to ammonia. The results suggest that ammonia may cause changes in the action potential of the rabbit cardiac cells by the direct action, and that the cardiac effects of ammonia are generally opposite to those of glycine.
In general, cloned pigs have been produced using the somatic cell nuclear transfer (SCNT) technique with various types of somatic cells; however, the SCNT technique has disadvantages not only in its low efficiency but also in the development of abnormal clones. This study aimed to compare early embryonic development and quality of SCNT embryos with those of induced pluripotent stem cells (iPSCs) NT embryos (iPSC-NTs). Ear fibroblast cells were used as donor cells and iPSCs were generated from these cells by lentiviral transduction with human six factors (Oct4, Sox2, c-Myc, Nanog, Klf4 and Lin28). Blastocyst formation rate in iPSC-NT (23/258, 8.9%) was significantly lower than that in SCNT (46/175, 26.3%; p < 0.05). Total cell number in blastocysts was similar between two groups, but blastocysts in iPSC-NT had a lower number of apoptotic cells than in SCNT (2.0 ± 0.6 vs. 9.8 ± 2.9, p < 0.05). Quantitative PCR data showed that apoptosis-related genes (bax, caspase-3, and caspase-9) were highly expressed in SCNT than iPSC-NT (p < 0.05). Although an early development rate was low in iPSC-NT, the quality of cloned embryos from porcine iPSC was higher than that of embryos from somatic cells. Therefore, porcine iPSCs could be used as a preferable cell source to create a clone or transgenic animals by using the NT technique.
Background: Molecular mechanisms of natural killer (NK) cell development from hematopoietic stem cells (HSCs) have not been clearly elucidated, although the roles of some genes in NK cell development have been reported previously. Thus, searching for molecules and genes related NK cell developmental stage is important to understand the molecular events of NK cell development. Methods: From our previous SAGE data-base, Gpnmb (Glycoprotein non-metastatic melanoma protein B) was selected for further analysis. We confirmed the level of mRNA and protein of Gpnmb through RT-PCR, quantitative PCR, and FACS analysis. Then we performed cell-based ELISA and FACS analysis, to know whether there are some molecules which can bind to Gpnmb. Using neutralizing antibody, we blocked the interaction between NK cells and OP9 cells, and checked IFN-${\gamma}$ production by ELISA kit. Results: Gpnmb expression was elevated during in vitro developmental stage and bound to OP9 cells, but not to NK precursor cells. In addition, we confirmed that the levels of Gpnmb were increased at NK precursor stage in vivo. We confirmed syndecan4 as a candidate of Gpnmb's binding molecule. When the interaction between NK cells and OP9 cells were inhibited in vitro, IFN-${\gamma}$ production from NK cells were reduced. Conclusion: Based on these observations, it is concluded that Gpnmb has a potential role in NK cell development from HSCs.
(+)-Eudesmin [4,8-bis(3,4-dimethoxyphenyl)-3,7 -dioxabicyclo[3.3.0]octane] was isolated from the stem bark of Magnolia kobus DC. var. borealis Sarg. and found to have neuritogenic activity. $50\;{\mu}M$ (+)-eudesmin induced neurite outgrowth and enhanced nerve growth factor (NGF)-mediated neurite outgrowth from PC12 cells. At this concentration, (+)-eudesmin also enhanced NGF-induced neurite-bearing activity and this activity was partially blocked by various protein kinase inhibitors. These included PD98059, a mitogen-activated protein kinase (MAPK) kinase inhibitor. GF109203X, a protein kinase C (PKC) inhibitor and H89, a protein kinase A (PKA) inhibitor. These results suggest that (+)-eudesmin can induce neurite outgrowth from PC12 cells by stimulating up-stream MAPK, PKC and PKA pathways.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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