화경을 상, 중, 하부로 나누어 신초 및 자구를 유도하기 위하여 NAA와 몇 종류의 cytokinin 첨가 배지에서 각 부위별 화경 절편체를 배양해서 얻은 결과는 다음과 같다. 화경 조직에서 상부, 중부, 하부 중 소화경이 부착된 상부조직에서 다아체 및 자구 형성이 전반적으로 가장 양호 하였다. 다아체 형성은 NAA $0.1mg{\cdot}L^{-1}$와 TDZ $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ 혼용배지에서 가장 효율적이었고 자구 형성은 NAA $0.01mg{\cdot}L^{-1}$와 kinetin $0.1mg{\cdot}L^{-1}$ 또는 NAA $0.01mg{\cdot}L^{-1}$와 kinetin $0.2mg{\cdot}L^{-1}$ 혼용배지에서 가장 효율적이었다. 온실에서 순화된 식물체는 정상적으로 개화하였으며 재식 2년차에 1.5개 내외의 자구를 가진 구를 생산할 수 있었다.
Claudia Simoes;Alessandra S. Santos;Norma Albarello;Solange Faria Lua Figueiredo
Journal of Plant Biotechnology
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제6권3호
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pp.199-204
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2004
The medicinal value of the genus Cleome justifies bio-technological studies of Cleome rosea, a Brazilian annual species from sandy coastal ecosystems (restinga), which have been submitted to an intense process of antropogenic degradation. In the present work, was analyzed the influence of cytokinins, 6-benzyladenine (BA) and 6-furfurylaminopurine (kinetin) added to the Murashige and Skoog medium (MS), on the proliferation capacity of explants from the stem axis (hypocotyl, node and internode) for a period of five monthly subcultures (150 days). Regardless of the explant sources, plantlet regeneration by direct and indirect organogenesis was observed. The largest number of shoots proliferated through direct organogenesis was obtained on medium with 4.4 $\mu{M}$ BA. Also, the highest proliferation capacity through indirect organogenesis was found on medium with 4.4 $\mu{M}$ BA + 4.6 $\mu{M}$ kinetin. The presence of kinetin alone was not effective for multiplication of the species. Elongation and rooting were obtained when shoots were transferred onto growth regulator-free medium, and acclimatization rates from 70% to 81% were achieved depending on explant sources used. Plants were then successfully established in soil and showed normal phenotypes.
Ghanbari, Sina;Fakheri, Barat Ali;Naghavi, Mohammad Reza;Mahdinezhad, Nafiseh
Journal of Plant Biotechnology
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제45권2호
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pp.146-153
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2018
Lilium ledebourii Bioss is a wild species of Lilium, which grows naturally in some provinces of Iran. Previous studies on Lilium tissue culture have been linked to direct regeneration and a few studies have been conducted on indirect regeneration, which has been studied under bright conditions. In this study, for the first time in the world, all the stages of indirect regeneration (callus induction, shoot and root induction) have been studied under dark conditions. Callus formation and the regeneration levels of L. Ledebourii Bioss were examined for three replicates in an MS (Murashige and Skoog) medium with different hormonal compositions and by using a factorial experiment in the framework of a completely random plan. For callus initiation, 2,4-D and kinetin hormones were used in five and four levels, respectively, as auxin and cytokinin. Results showed that the highest percentage of the callus was found in $3{\mu}M$ of 2,4-D and $0.5{\mu}M$ of kinetin. In terms of callus wet weight, the highest amount was found in $3{\mu}M$ of 2,4-D and $0.5{\mu}M$ of kinetin. In addition, in terms of diameter, the highest amount was found in $3{\mu}M$ of 2,4-D, and $0.5{\mu}M$ of kinetin. In summary, the 2,4-D hormone had a major impact on the percentage of regeneration increase so that the best response was related to the composition of $3{\mu}M$ of 2,4-D, and $0.1{\mu}M$ of kinetin. This study contended that auxin and cytokinin can induce long shoots and roots through cell elongation in dark condition.
Cryopreservation has been broadly used as an efficient method for a long-term conservation for many types of plants especially vegetatively propagated plants. Among several cryopreservation methods, a droplet-vitrification was the most widely applicable and efficient method. Studies have developed protocols for strawberry using droplet-vitrification method and suggested the practical use of the protocol for large number of germplasm with a little modification. In this study, the droplet vitrification method of shoot tip has been tested on 31 accessions provided around the world. Shoot tips were precultured on Murashige and Skoog (MS) liquid medium supplemented with 0.3~0.5M sucrose. Precultured explants were osmoprotected with loading solution, 35% of PVS3 (C4, 17.5% glycerol and 17.5% sucrose) for 40 min and exposed to dehydration solution, PVS3 (B1, 50% glycerol and 50% sucrose) for 60 min. Then, the explants were transferred onto droplets containing 2.5 uL PVS3 on sterilized aluminum foils prior to direct immersion in liquid nitrogen (LN) for 1hr. The cryopreserved shoot tips were rapidly warmed in a water bath at 40C and then unloaded in MS with 0.8M sucrose for 40 min. The shoot tips were cultured in NH4NO3-free MS post culture medium for 2 weeks. Subsequently, the explants were moved to the MS medium for 6 weeks and evaluated the regrowth rate. By this droplet-vitrification protocol, twenty-four accessions showed at least 40% regrowth rate. Out of 24 accessions, 'Nonsan1ho' had the highest regeneration rate of 85.8% and 'Jumbo pureberry' had the lowest with 42.1%.
십자화과 식물의 유용유전자를 cloning하기 위한 기초연구로서 십자화과 식물인 Armoracia rusicna의 재분화계와 형질전환계를 확립하고, gene tagging을 하기 위하여 binary vector에 삽입된 옥수수의 transposon 유전자 Ac/Ds를 도입한 결과, NAA 0.1 mg/L와 BA 1.0 mg/L를 함유한 MS 배지에서 최적의 shoot를 유기할 수 있었으며, MS 기본배지에 옮기면 쉽게 발근을 유도할 수 있었다. 옥수수의 Ac/Ds의 유전자를 잎에 형질전환시킨 결과 8-10%의 형질전환율을 보였으며, 엽병의 경우에도 4%의 형질전환 식물체가 얻어졌다. Kanamycin 100 mg/L 농도에서 선발한 개체를 PCR 분석 및 Southern blot분석을 행하였던 결과 PCR분석으로부터 Ds유전자가 식물에 도입된 것이 확인되었고, Southern blot 분석으로부터 Ac/Ds 모두가 도입된 것이 확인되었다.
인삼조직배양에서 배양환경 조절방법의 필요성을 검토코자 생장조절물질 IBA, BA, GA 각 $3mg/\;{\ell}$ 첨가한 MS 배지에 $CO_2(2500ppm)$를 강제 통기방식에 의해 기내에 처리하여 기관분화 유형별로 특성을 조사하였던 바 결과를 요약하면 다음과 같다. 저장종자의 분화능은 저온처리 60일 종자에서 적출한 배에 비하여 80일정도 저온처리한 성숙된 배의 자엽조직이 양호하였다. 기관발생 유형에서 $CO_2$처리 효과는 부정아 형성보다 shoot primordium 의 생장과 발달에 현저한 효과가 있었고 1개의 배로부터 shoot primordium 을 통해 수백 개의 신초분화가 가능하였다. 배발생 유형에서 $CO_2$처리는 무처리에 비해 indirect somatic embryo 분화 모두에 효과가 있었다. Indirect somatic embryo는 대체로 유관속 중심주와 상배축이 미분화된 관계로 신초가 분화 생장하지 못하였다. 그리고 direct somatic embryo는 자엽 이변의 하단부에서 분화 발달하였고 지상부와 지하부 그리고 잠아를 갖는 완전한 식물체로 생장하였다.
폐모(Fritillaria thunbergii)의 자구인편, 줄기, 및 마디조직 및 정단을 구명하고자 실험한 결과는 다음과 같다. 1. 자구형성수는 자구인편조직에 비해 마디나 줄기조직에서, BA처리구보다 kinetin처리구에서 현저히 증가하였다. 줄기조직은 생장이 3cm이하일 때 채취하여 kinetin이 $1.0{\sim}3.0mg\;/L$첨가된 배지에 배양하였을 , 마디조직은 3cm이상 생장한 조직을 kinet이 5.0mg /L 첨가된 배지에 배양하였을 때 자구형성수가 증가하였다. 기내에서 생장한 마디의 액아에서 자구가 직접 형성되는 현상도 관찰되었는데 최고 15개의 자구가 마디에서 형성되었다. 2. 신초가 l0cm 이상 생장한 후 줄기조직을 채취하여 배양하였을 때는 어린 줄기조직보다 자구 형성능력이 감소하였으며 생장조절제의 첨가가 자구형성에 필수적이었고 적정농도는 kinetin 1.0 mg /L였다. 3. 지하에서 생장중인 패모에서는 줄기조직이나 정단이나 자구조직에 비해 구형성율이 높았으며 자구 형성에 적합한 당의 농도는 $5{\sim}7%$였다. 4. 이상의 결과를 종합해 보면 패모의 기내 배양재료로는 자구 인편조직에 비해 3cm정도 생장한 줄기나 마디조직을 이용하는 것이 대량중식에 효과적일 것으로 생각되었다. 특히 줄기나 마디조직은 구형성수가 최고 20배 이상 달하여 중식율이 상당히 높았다. 생장조절제 요구도는 배양재료에 따라 다소 차이가 있으나 Kinetin $1.0{\sim}5.0mg\;/L$가 적합하였다.
아마릴리스 (Hippeastrum hybridum Hort. 'Dazzler')의 효율적인 기내 급속 대량 증식체계를 확립시키고자 개화15일전 화뢰와 부착된 소화경을 재료로 하여 적합한 치상체의 선별과 캘러스 및 식물체 분화에 미치는 식물생장 조절물질의 효과를 조사하였다. 어린 화뢰내 약, 화사, 주두, 화주 및 자방은 배양 중 식물체 재분화를 위한 캘러스 및 소자구를 형성하지 못하여 배양재료로 부적합하였으나 소화경절편에서는 캘러스 및 자구가 형성되어 치상재료로 적합하였다. 배지내 첨가된 식물생장조절물질에 따라 치상체에서 직접 자구를 형성하거나 캘러스를 통해 식물체로 분화되는 2가지 경로로 형성되었는데 개화 15일전 소화경 절편을 0.5 mg/L LAA와 1.0 mg/L BA가 혼용처리된 MS 배지에 배양하여 $100\%$ 소자구형성 및 신초가 분화되어 효과적이었으며 소화경에서 직접 형성된 자구 또는 캘러스를 통해 분화된 신초는 성공적으로 식물체로 재분화 되었다.
라벤다의 기내배양을 통한 대량증식의 가능성을 알아보기 위하여 식물체 부위별 절편, 생장 조절물질 및 배지가 캘러스 유지 및 유식물체의 분화에 미치는 영향과 기내증식 개체의 변이에 대해 조사하였다. 캘러스 유도는 잎 절편을 이용한 2, 4-D 1 mg/l 와 NAA 2 mg/l 의 단독 또는 BAP 0.05 mg/l 와의 조합 처리 조건에서 양호하였다. 신초의 분화에는 경정을 이용한 BAP $2{\sim}4\;mg/l$ 단독 또는 BAP 4 mg/l +NAA 0.2 mg/l 조합 처리가 가장 양호하였다. $B_{5}$ 배지에 BAP 0.5 mg/l 와 NAA 0.01 mg/l 가 조합 첨가되었을 때 신초의 증식이 9.1배로 높게 나타났다. 분화된 신초의 뿌리 형성은 NAA $0.1{\sim}1\;mg/l$ 와 IAA 1 mg/l 에서 양호하였다. 기내에서 증식된 유식물체는 peatmoss:vermiculite:perlitc (1:1:1, v/v/v) 혼합 상토에서 90% 이상의 높은 활착율과 양호한 생육을 보였다. 재분화 식물체의 RAPD 분석 결과 primer OPA14에서 하나의 변이 band가 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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