• 제목/요약/키워드: Dengue

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The Two-Component Protease NS2B-NS3 of Dengue Virus Type 2: Cloning, Expression in Escherichia coli and Purification of the NS2B, NS3(pro) and NS2B-NS3 Proteins

  • Champreda, Veerawat;Khumthong, Rabuesak;Subsin, Benchamas;Angsuthanasombat, Chanan;Panyim, Sakol;Katzenmeier, Gerd
    • BMB Reports
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    • 제33권4호
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    • pp.294-299
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    • 2000
  • Proteolytic processing of the dengue virus serotype 2 polyprotein precursor is catalyzed by a host signal peptidase and a virus encoded two-component protease consisting of the nonstructural proteins, NS2B and NS3. We expressed in Escherichia coli the NS2B, NS3(pro) and NS2B-NS3 proteins from the dengue virus type 2 strain 16681 as N-terminal fusions with a hexahistidine affinity tag under the control of the inducible trc promoter. All fusion proteins were purified to >90% purity by detergent extraction of inclusion bodies and a single step metal chelate chromatography. Proteins were refolded on-column and recovered with yields of 0.5, 6.0 and 1.0 mg/l of E. coli culture that was grown to $OD_{600}=1.0$ for NS2B, NS3(pro) and NS2B-NS3, respectively. Purified proteins gave strong signals in Western blots using $Ni^{2+}-nitrilotriacetic$ acid as a probe for the presence of the polyHis tag. During the purification process, $(His)_{6}NS2B-NS3$ was apparently not autoproteolytically cleaved at the NS2B/NS3 site.

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지카 바이러스 및 뎅기 바이러스의 외피 단백질을 구성하는 도메인의 생물정보학적 분석 (Bioinformatic Analysis of Envelope Protein Domains of Zika Virus and Dengue Virus)

  • 최재원;김학용
    • 한국콘텐츠학회논문지
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    • 제19권11호
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    • pp.632-643
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    • 2019
  • 최근 지구 기후의 변화, 해외 여행객의 증가 및 국가 간 물류 이동의 증가 등과 같은 요인으로 인해 모기와 같은 절지동물이 매개하는 아보바이러스(arthropod-borne virus, arbovirus) 감염으로 인한 대규모의 피해가 전 세계적으로 끊임없이 발생하고 있다. 그 중에서도 플라비바이러스 속에 해당하는 지카 바이러스와 뎅기바이러스에 의한 피해가 대표적이다. 본 연구에서는 다양한 생물정보학 데이터베이스를 바탕으로 지카 바이러스 및 뎅기 바이러스가 숙주 감염에 필수적인 기능을 수행하는 외피 단백질에 대한 심층적인 분석을 수행했다. 외피 단백질을 구성하는 도메인들에 대한 분석을 통해 도메인의 종류, 위치 및 기능을 파악했으며 각 도메인별 상동성을 분석했다. 이로부터 낮은 상동성을 보이는 도메인인 EDIII를 도출하였으며, EDIII를 구성하는 펩타이드에 대한 상동성 및 면역원성 분석과 3차원 구조 모델링을 수행했다. 더 나아가 이들이 갖는 생물학적 의미와 활용 방안에 대해 논의했다.

In Vitro Determination of Dengue Virus Type 2 NS2B-NS3 Protease Activity with Fluorescent Peptide Substrates

  • Khumthong, Rabuesak;Angsuthanasombat, Chanan;Panyim, Sakol;Katzenmeier, Gerd
    • BMB Reports
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    • 제35권2호
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    • pp.206-212
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    • 2002
  • The NS2B-NS3(pro) polyprotein segment from the dengue virus serotype 2 strain 16681 was purified from overexpressing E. coli by metal chelate affinity chromatography and gel filtration. Enzymatic activity of the refolded NS2B-NS3(pro) protease complex was determined in vitro with dansyl-labeled peptide substrates, based upon native dengue virus type 2 cleavage sites. The 12mer substrate peptides and the cleavage products could be separated by reversed-phase HPLC, and were identified by UV and fluorescence detection. All of the peptide substrates (representing the DEN polyprotein junction sequences at the NS2A/NS2B, NS2B/NS3, NS3/NS4A and NS4B/NS5 sites) were cleaved by the recombinant protease NS2B-NS3(pro). No cleavage was observed with an enzymatically inactive S135A mutant of the NS3 protein, or with a modified substrate peptide of the NS3/NS4A polyprotein site that contained a K2093A substitution. Enzymatic activity was dependent on the salt concentration. A 50% decrease of activity was observed in the presence of 0.1M sodium chloride. Our results show that the NS3 protease activity of the refolded NS2B-NS3(pro) protein can be assayed in vitro with high specificity by using cleavage-junction derived peptide substrates.

Original Antigenic Sin Response to RNA Viruses and Antiviral Immunity

  • Mee Sook Park;Jin Il Kim;Sehee Park;Ilseob Lee;Man-Seong Park
    • IMMUNE NETWORK
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    • 제16권5호
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    • pp.261-270
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    • 2016
  • The human immune system has evolved to fight against foreign pathogens. It plays a central role in the body's defense mechanism. However, the immune memory geared to fight off a previously recognized pathogen, tends to remember an original form of the pathogen when a variant form subsequently invades. This has been termed 'original antigenic sin'. This adverse immunological effect can alter vaccine effectiveness and sometimes cause enhanced pathogenicity or additional inflammatory responses, according to the type of pathogen and the circumstances of infection. Here we aim to give a simplified conceptual understanding of virus infection and original antigenic sin by comparing and contrasting the two examples of recurring infections such as influenza and dengue viruses in humans.

인도에서 귀국한 가족에서 발생한 심한 고혈당 동반 소아 뎅기열 1례 (A Pediatric Case of Dengue Fever with Extreme Hyperglycemia Developed in a Family Who Returned from India)

  • 김준영;김한울
    • Pediatric Infection and Vaccine
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    • 제27권2호
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    • pp.140-146
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    • 2020
  • 뎅기열은 풍토성을 가지며 주로 열대 및 아열대지역에서 많이 발생하는 질환이고 우리나라는 발병 지역은 아니다. 발열, 발진, 두통 등의 비특이적 증상을 보이는 해외에서 돌아온 여행자를 만나는 경우 해외유입감염병을 의심해야 한다. 지속되는 구토, 복통, 출혈 경향, 간효소수치 상승, 단백뇨 등은 뎅기열에서 심한 뎅기열로의 진행의 위험인자로 알려져 있다. 심각한 고혈당은 다양한 급성 질환에서 나쁜 예후와 관련이 있고 당뇨병 등 고혈당으로 증상이 나타날 수 있는 기저질환이 동반된 경우는 심각한 뎅기열로의 진행과도 관련이 있다고 알려져 있다. 저자들은 인도에서 귀국한 청소년에서 발생한 심한 고혈당을 동반한 뎅기열을 경험하였다. 이와 함께 한국에서 보고된 소아 뎅기열 증례들을 고찰하여 보고하는 바이다.

지역주민참여 보건프로그램에 대한 비판적 접근: 파라과이 뎅기열 예방 프로그램 '밍가 암비엔탈'의 사례 (Critical Approach to Community-Based Health Program: A Case of Paraguay Dengue Prevention Program)

  • 구경모
    • 이베로아메리카
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    • 제21권2호
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    • pp.1-23
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    • 2019
  • 본 연구는 지역주민참여 보건 프로그램이 정치, 경제적 요인에 의해 실천되는 과정을 파라과이 뎅기열 예방 프로그램인 밍가 암비엔탈을 통해 분석한 것이다. 비판적 의료인류학 분야에서는 보건 의료 프로그램의 실천이 해당 질병의 예방과 퇴치라는 본연의 목적 이외에 사회문화 및 정치경제적 요인이 주요 변수로 작용될 수 있음을 설명하고 있다. 같은 맥락에서 본 연구도 지역 공동체 기반의 보건프로그램이 다양한 외적 요인에 의해 어떻게 작동되는가를 분석하였다. 그 결과 밍가 암비엔탈 프로그램은 뎅기열 퇴치라는 보건 프로그램으로서 실효성에 대한 우려에도 불구하고 국가와 지역사회의 정치인, 기업 등 다양한 이해관계 집단에 의해 실천되는 경향을 보이고 있다. 이 사례를 통해 본 연구는 지역주민참여 보건 프로그램이 그 본래의 목적과 다르게 정치경제적 관계에 의해 작동될 수 있음을 파악하였다.

Expression of Dengue virus EIII domain-coding gene in maize as an edible vaccine candidate

  • Kim, Hyun A;Kwon, Suk Yoon;Yang, Moon Sik;Choi, Pil Son
    • Journal of Plant Biotechnology
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    • 제41권1호
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    • pp.50-55
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    • 2014
  • Plant-based vaccines possess some advantages over other types of vaccine biotechnology such as safety, low cost of mass vaccination programs, and wider use of vaccines for medicine. This study was undertaken to develop the transgenic maize as edible vaccine candidates for humans. The immature embryos of HiII genotype were inoculated with A. tumefaciens strain C58C1 containing the binary vectors (V662 or V663). The vectors carrying nptII gene as selection marker and scEDIII (V662) or wCTB-scEDIII (V663) target gene, which code EIII proteins inhibite viral adsorption by cells. In total, 721 maize immature embryos were transformed and twenty-two putative transgenic plants were regenerated after 12 weeks selection regime. Of them, two- and six-plants were proved to be integrated with scEDIII and wCTB-scEDIII genes, respectively, by Southern blot analysis. However, only one plant (V662-29-3864) can express the gene of interest confirmed by Northern blot analysis. These results demonstrated that this plant could be used as a candidated source of the vaccine production.