Purpose: The aim of this study was to investigate the change in signal sensitivity over different acquisition start times and optimize the scanning window to provide the maximal signal sensitivity of [1-13C]pyruvate and its metabolic products, lactate and alanine, using spatially localized hyperpolarized 3D 13C magnetic resonance spectroscopic imaging (MRSI). Materials and Methods: We acquired 3D 13C MRSI data from the brain (n = 3), kidney (n = 3), and liver (n = 3) of rats using a 3T clinical scanner and a custom RF coil after the injection of hyperpolarized [1-13C]pyruvate. For each organ, we obtained three consecutive 3D 13C MRSI datasets with different acquisition start times per animal from a total of three animals. The mean signal-to-noise ratios (SNRs) of pyruvate, lactate, and alanine were calculated and compared between different acquisition start times. Based on the SNRs of lactate and alanine, we identified the optimal acquisition start timing for each organ. Results: For the brain, the acquisition start time of 18 s provided the highest mean SNR of lactate. At 18 s, however, the lactate signal predominantly originated from not the brain, but the blood vessels; therefore, the acquisition start time of 22 s was recommended for 3D 13C MRSI of the rat brain. For the kidney, all three metabolites demonstrated the highest mean SNR at the acquisition start time of 32 s. Similarly, the acquisition start time of 22 s provided the highest SNRs for all three metabolites in the liver. Conclusion: In this study, the acquisition start timing was optimized in an attempt to maximize metabolic signals in hyperpolarized 3D 13C MRSI examination with [1-13C] pyruvate as a substrate. We investigated the changes in metabolic signal sensitivity in the brain, kidney, and liver of rats to establish the optimal acquisition start time for each organ. We expect the results from this study to be of help in future studies.
Objectives Perillae Folium (PF) has been widely used in Korean herbal medicines used for treatment of acute and chronic inflammatory diseases, such as rhinitis, asthma, and enteritis. In this study, to investigate the protective effect of PF on type 1 allergic response, we determined whether PF inhibits early or late allergic responses. Methods The effect of PF was analyzed by ELISA,. RT-PCR and Western blot in RBL-2H3 cells. Levels of ${\beta}$-hexosaminidase, interleukin (IL)-4 and TNF-${\alpha}$ were measured using enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs). mRNA levels of cytokines and enzymes were analyzed with RT-PCR. Signal transduction was analyzed with Western blot. Results We found that PF suppressed ${\beta}$-hexosaminidase release in RBL-2H3 by the IgE-DNP-HSA stimulation. PF also significantly inhibited enzymes level, such as COX-1, COX-2, iNOS, and HDC2, along with reduced cytokine levels, such as IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-13, and TNF-${\alpha}$ in RBL-2H3. In addition, PF suppressed the phospholyation of ERK1/2, JNK1/2, and $I{\kappa}B{\alpha}$. Conclusions Our results indicate that PF protects against type 1 allergic response and exert an anti-inflammatory effect through the inhibition of degranulation and expression of cytokines and enzymes via the suppression of signal transduction.
Objectives : Ulmus davidiana (UD) has been widely used in Korean herbal medicines used for treatment of acute and chronic inflammatory diseases, such as rhinitis, asthma, and abscess. In this study, To investigated the protective effect of UD on type 1 allergic response, we determined whether UD inhibits early and late allergic response. Methods : The effect of UD was analyzed by ELISA and RT-PCR in RBL-2H3 cells. Levels of ${\beta}$ -hexosaminidase, interleukin (IL)-4 and TNF-${\alpha}$ were measured using enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs). mRNA levels of COX-2 and T-helper type 2(Th2) cytokines were analyzed with RT-PCR. Results : We found that UD suppressed ${\beta}$-hexosaminidase release in RBL-2H3 not only by the PMA plus A23187 stimulation, but also by the IgE-DNP-HSA stimulation at the antigen-antibody binding stage and antibody-receptor binding stage. UD also significantly inhibited COX2 level, along with reduced Th2 cytokine levels, such as IL-3, IL-4, IL-5, IL-13, GM-CSF, and TNF-${\alpha}$ in RBL-2H3. Conclusions : Our results indicate that UD protects against type 1 allergic response and exerts an anti-inflammatory effect through the inhibition of degranulation and expression of COX2 and Th2 cytokines.
Fagopyrum esculentum(FE) is an important food crop and medicinal plant that is used to improve diabetes, obesity, hypertension, hypercholesterolemia and constipation in Korea, but the underlying mechanisms involved in its anti-allergic activity are not fully understood. We investigated the effects on the release of inflammatory mediator and proximal signal events in $Fc{\varepsilon}RI$-mediated RBL-2H3 cell activation. FE reduced antigen (DNP-HSA)-induced release of histamine, prostaglandin D2 (PGD2) and cysteinyl Leukotriene (cysLT) in IgE-sensitized RBL-2H3 cells. In addition, it inhibited antigen-induced HDC2 and COX-2 and 5-LO mRNA expression in IgE-sensitized RBL-2H3 cells. FE also suppressed antigen-induced $Fc{\varepsilon}RI{\beta}$ and $Fc{\varepsilon}RI{\gamma}$ subunit mRNA expression in these cells. To identify the mechanisms underpinning the inhibition of release of inflammatory mediators such as histamine and PGD2 and cysLT by FE, we examined the proximal signal events of intracellular FceRI signaling molecules. FE suppressed antigen-induced phosphorylation of Lyn, Syk, LAT, $PLC{\gamma}1$, PI3K, Akt and cPLA2. Collectively, the anti-allergic effects of FE in vitro suggest its possible therapeutic application to inflammatory allergic diseases, in which its inhibition of inflammatory mediator and FceRI-dependent signaling events in mast cells may be hugely beneficial.
섬유소 분해효소를 강하게 생성하는 Rhizopus속에 속하는 균주를 인삼의 뿌리에 번식하는 부패균에서 분리하여, 이 균주가 생성하는 cello-lase에 대한 효소의 특성에 관하여 조사한 결과, (1) 본 효소의 최적 pH는 4.5, 최적온도는 5$0^{\circ}C$이었다. (2) 본 효소는 pH 3.0~7.0의 범위에서 안정하며, 5$0^{\circ}C$의 온도에서는 안정하나, 6$0^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 열에 의해 급격한 실활이 일어난다. (3) Co$^{++}$, Mn$^{++}$ 이온에 의해 효소활성이 촉진되었으며 이때 Co$^{++}$이온은 $10^{-3}$M일 때 최대 활성을 나타냈고, Mn$^{++}$ 이온은 농도가 증가할 수록 활성이 촉진되었다. (4) EDTA등에 의해서는 영향을 받지 않았으나, 2.4-DNP와 SDS에 의해 강하게 저해를 받았다. (5) 결정성 cellulose를 기질로 사용하였을 때에도 반응시간을 길게 하면 상당히 분해되었으며, 인삼피, 인삼엽, Laminaran, Xylan에 대해 특히 분해력이 강하였다. (6) Co$^{++}$, Mn$^{++}$이온이 본 효소에 열보호작용을하였으며 saponin을 반응액에 첨가하였을 때 최종농도 0.5%에서 효소활성이 가장 촉진되었다.
1. 최적광조사 조건, 470 nm에서 15초 동안 빛을 조사한 미토콘드리아성 ATP synthase는 1mmole DCPI에 의하여 그 활성이 85% 증가되었다. 2. 1mmole DNP, $10\;{\mu}mole$ HHQNO 및 $100\;{\mu}g/ml$의 oligomycin은 이 효소의 활성을 각각 61, 41% 및 12% 억제시켰다. 3. 최적 조건의 빛에 의한 $Fe^{3+}$ 및 $Fe^{2+}$ 이온의 유입효과에서, 5mmole $Fe^{3+}$ 및 0.5mmole $Fe^{2+}$ 이온에 의하여 이 효소 활성이 각각 14% 및 12% 증가되었다. 4. 광증감제인 phenazine methosulfate의 존재하에서 470nm의 빛을 조사한 후의 효소의 활성도가 크게 증가되는 것으로 보아, 미토콘드리아성 ATP synthase내에 미지의 흡광물질이 존재함을 추정할 수 있었다.
In this study, we investigate anti-allergic and anti-inflammatory effects of Leonurus sibiricus seed (LSS) extract in basophilic leukemia RBL-2H3 cells. To identify anti-allergic actions of LSS, the degranulation was evaluated in IgE and DNP-BSA stimulated RBL-2H3 cells. At the concentration of $100{\mu}g/ml$ of methanol (MeOH) extract and Methylene chloride (MC) and Ethyl acetate (EtOAc) fractions, the degranulation was significantly inhibited 16.7%, 16.7% and 27.9% respectively. And then, to assess anti-inflammatory effects of LSS, IL-4 and IL-13 mRNA level were detected in PMA/ionomycin (PI)-induced RBL-2H3 cells and cell proliferation and IL-4 mRNA level in isolated splenocytes from Balb/c mice. LSS MeOH extract and MC and EtOAc fractions significantly decreased the level of IL-4 and IL-13 mRNA in PI-induced RBL-2H3 cells and showed inhibitory effects on cell proliferation and expression of IL-4 mRNA level in mouse splenocytes. Taken together, these results suggest that LSS has potential anti-allergic and anti-inflammatory effects and EtOAc fraction is the most effective in regulating immune responses.
전촌(田村)가 개량(改良)한 DNP법(法)에 의(依)하여 녹차(錄茶)의 침출조건(浸出條件)에 따른 ascorbic acid용출량(溶出量)에 대(對)하여 검토(檢討)를 하였다. (1) 녹차(錄茶)는 양질(良質)의 것 일수록 ascorbic acid의 용출율(溶出率)이 높고 저온(低溫)에서도 잘 용출되었다. (2) 녹차(錄茶)는 물의 온도가 높을수록 ascorbic acid의 용출율(溶出率)이 높고 $80^{\circ}C$의 온탕(溫湯)을 사용(使用)했을 때 제 1 회의 3 분(分)간 침출(浸出)에서 85%가 용출되었다. (3) 증류수의 비등시간(沸騰時間)과 ascorbic acid용출량(溶出量)과의 관계(關係)에 있어서는 비등시간(沸騰時間)이 길수록 용출량(溶出量)이 증가(增加)하였다.
감잎차의 효과적인 제조법 및 음용방법을 조사하기 위해 세가지 방법(재래식, 증자법, 발효법)에 의해 감잎으로부터 감잎차를 제조하여 vitamin C와 SOD 유사활성의 변화를 조사하였다. Vitamin C는 발효법에 의해 제조된 감잎차에서 가장 함량이 높았으며 이 수치는(551.85 mg%) 생감잎에 들어 있는 vitamin C의 (1173.67 mg%) 47%에 해당하는 양이며 재래식 및 증자법에 의한 감잎차에 대해 각각 42배, 8배나 되는 많은 양임이 밝혀졌다. 반면 SOD 유사활성은 재래식(833.33 SOD unit/g)과 발효법(816.33 SOD unit/g)에 의해 제조된 감잎차가 증자법(754.72 SOD unit/g)에 비해 조금 높은 것으로 나타났지만 절대 수치에서는 큰 차이가 없었다. 추출온도와 시간에 따라 증자법 감잎차의 vitamin C는 온도에 상관없이 추출시간의 증가에 따라 조금씩 감소하였다. 발효법 감잎차는 $60^{\circ}C$와 $70^{\circ}C$에서는 추출량이 시간의 증가에 따라 대체적으로 증가하였으나 $80^{\circ}C$와 $90^{\circ}C$에서는 추출시간 5분까지는 증가하고 이후에는 감소하였다. 발효법 감잎차의 vitamin C의 최적 추출조건은 $80^{\circ}C$와 $90^{\circ}C$에서 3분과 5분이었고 $70^{\circ}C$에서는 5분과 10분 그리고, $60^{\circ}C$에서는 10분이었다. 재래식 감잎차의 vitamin C는 그 양이 적어 실험에 사용된 DNP법에 의해서는 측정할 수 없었다. SOD유사활성을 살펴볼 때 재래식 및 증자법 감잎차는 추출시간에 따라 $80^{\circ}C$와 $90^{\circ}C$에서 조금씩 증가하는 경향을 나타내었으며 발효법 감잎차는 $80^{\circ}C$와 $90^{\circ}C$에서 증가${\rightarrow}$감소${\rightarrow}$증가하는 경향을 보였고 재래식 및 증자법에 의한 감잎차보다 $80^{\circ}C$와 $90^{\circ}C$ 경우 추출시간에 관계없이 모든 조건에서 높은 활성을 나타냈으며 SOD 유사활성 물질의 최적 추출조건은 3분과 10분이었다.
과요오드산으로 산화시킨 당을 유리아미노산과 반응시켜서 ${\alpha}-NH_2$기와 펩티딜리신의 ${\varepsilon}-NH_2$기와 반응하여 결합한 것을 확인하였다. 그래서, 제조한 과요드산-산화당은 단백질 분자 표면의 리신의 ${\varepsilon}-NH_2$기와 Schiff 염기 반응으로 공유결합하여 당단백질을 만드는 것으로 볼 수 있다. 과요드산 산화당으로 변형한 고구마 ${\beta}$-아밀라아제는 C, H는 증가, N은 감소하였다. N말단의 ${\alpha}-NH_2$기는 70% (pentamer), 73% (monomer), ${\varepsilon}-NH_2$기는 33% (pentamer), 26% (monomer)가 산화당과 반응하였다. 페놀-황산법에 의한 총당 정량과 DNP 법으로 분석한 결과, $IO_4$-산화말토헥사오스는 고구마 ${\beta}$-아밀라아제 1몰당 6몰이 결합된 것으로 나타났고, 고구마 ${\beta}$-아밀라아제에 결합된 산화가용성 전분은 효소단백질 대비 13.2% (monomer), 13.5% (pentamer), 산화말토헥사오스는 9.7% (pentamer), 9.3% (monomer)로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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