본 연구는 뽕잎을 이용한 고부가가치의 기능성식품의 제조에 적합한 뽕잎 품종을 선별하고자 품종별(YK-209, Cheong il, Yongchon and Kaeryang), 산지별(영천 및 상주), 부위별(상위, 중위 및 하위엽) 및 생육시기별(5월, 6월 및 8월)에 따른 뽕잎의 기능성 지표물질인 DNJ, GABA및 flavonoid의 함량을 HPLC로 정량하였다. 4가지 뽕잎 중 YK-209 뽕잎의 기 능성 물질 (DNJ, GABA 및 flavonoid) 함량이 가장 높았다. 그리고 YK-209 뽕잎으로부터 분리된 4가지 flavonoid 중 rutin 함량이 가장 높았으며, 그 다음으로 isoquercitrin>kaempferol-3-Ο-rutinoside>astragalin 순으로 나타났으나 그 외 3가지 뽕잎에서는isoquercitrin의 함량이 가장 높았고 그 다음으로 rutin이 차지 하였으나 품종별, 산지별, 부위별 및 성장시기별에 따라 flavonoid구성성분의 함량이 다소 차이가 있었다. 영천지역에서 수확한 YK-209뽕잎의 3가지 기능성물질의 함량이 상주에서 수확한 뽕잎보다 그 함량이 높았다. 한편, YK-209 뽕잎의 부위 중 상위엽이 중위 및 하위엽보다 3가지 기능성물질의 함량이 높았다. 끝으로YK-209뽕잎의 성장시기 중 5월에 수확한 것이 6월 및 8월에 수확한 뽕잎보다 기능성물질의 함량이 높았다. 이러한 연구결과를 미루어 볼 때 3가지 기능성 성분함량이 높은 YK-209 뽕잎(용천뽕과 개량뽕을 교배하여 얻은 것)의 5월산 상위엽을 향후 뽕잎의 이용한 기능성식품의 제조용 원료로 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
A simple and accurate assay was developed for the quantitative analysis of 1-deoxynojirimycin (1-DNJ) derived from the silkworm (Bombyx mori). Normal-phase high-performance liquid chromatography coupled with an evaporative light scattering detector (HPLC-ELSD) and a hydrophilic interaction liquid chromatography column was used. Various parameters were applied to optimize the analysis method. The limits of detection and quantification of 1-DNJ were 2.97 × 10-3 and 9.00 × 10-3 mg/mL, respectively. The calibration curve showed good linearity results. The concentration range and the r2 value were 0.0625-1.0 mg/mL and 0.9997, respectively. The accuracy test demonstrated a significantly high recovery rate (89.95-103.22%). The relative standard deviation was ≤ 1.00%. Thus, a method for the accurate identification and quantitative analysis of 1-DNJ in silkworms was developed. Moreover, in this procedure, the process of derivatization of 1-DNJ, which was required in previous experiments, could be eliminated. This technique may be actively utilized for the development of pharmaceuticals and health functional foods using 1-DNJ.
본 연구는 $\alpha$-glucosidase의 강력한 효소저해제인 1-deoxynojirimycin(DNJ)을 고효율로 생산하는 균주의 선발 및 동정, 배양최적화 및 균 배양액의 혈당강하효과 등에 관하여 조사하였다. 먼저 토양으로부터 $\alpha$-glucosidase에 대해 강력한 저해능을 나타내는 9균주를 대상으로 이 중에서 DNJ 생산성이 가장 우수한 한 개 균주를 최종 선발하였고, 이 균주를 16S rDNA 염기서열분석으로 균주동정을 하여 Bacillus subtilis S10이라 명명하였다. 본 균주의 배양액을 이온교환수지법(Amberlyst 15 $H^+$ form, Dowex $1{\times}2$-100 $OH^-$ form, Amberlite CG-50 $NH_3^+$ form)에 의해 DNJ를 정제하고, 정제된 DNJ를 LC-MS로 분석한 결과 표준 DNJ와 동일한 물질임을 확인하였다. DNJ 대량생산을 위한 S10균주의 배양 최적탄소원 및 최적질소원과 이들의 최적농도를 조사한 결과 각각 1% galactose, 1.6% polypeptone임이 밝혀졌으며, 확립된 최적화 조건에서의 DNJ 생산량은 0.75 g/L이었다. 고혈당 유도 마우스를 대상으로 각종 혈당강하제의 효과를 알아보기 위해 혈당치를 비교한 결과 무처리구의 혈당치 $510{\pm}10.9\;mg/dL$에 비해 acarbose 처리구는 $139.4{\pm}33.1\;mg/dL$, 누에분말 처리구는 $209.1{\pm}19.6\;mg/dL$, 그리고 S10 균주 배양액 처리구는 $208.6{\pm}39.8\;mg/dL$로써 무처리구에 비해 각각 72.7%, 59.0%, 그리고 59.1%의 혈당 억제율을 나타냈다. 이상의 연구결과 S10균주 배양액은 누에분말과 같은 수준의 고혈당 억제 및 완화효과가 있음이 확인되었으며 향후 S10균주의 대량생산을 통해 식후혈당조절을 위한 건 강기능식품 개발이 기대된다 하겠다.
We have demonstrated that 1-deoxynojirimycin (DNJ) isolated from Bacillus subtilis MORI could enhance the levels of adiponectin and its receptors in differentiated 3T3-L1 adipocytes, which has been shown to be effective in lowering blood glucose levels and enhancing insulin sensitivity. DNJ was not toxic to differentiated 3T3-L1 adipocytes for up to a concentration of $5{\mu}M$. In terms of expression levels of adiponectin and its receptors (AdipoR1 and AdipoR2), DNJ in concentrations as low as $0.5{\mu}M$ elevated both mRNA and protein levels of adiponectin and transcript levels of AdipoR1 and AdipoR2. In addition, DNJ increased phosphorylation of 5' adenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK) in a statistically significant manner. Finally, treatment with DNJ resulted in increased mRNA expression of glucose transporter 4 (GLUT4), which encodes for a glucose transporter, along with a significant increase in glucose uptake into the adipocytes based on results of a 2-deoxy-D-[$^3H$] glucose uptake assay. Our findings indicate that DNJ may greatly facilitate glucose uptake into adipose tissues by increasing the action of adiponectin via its up-regulated expression as well as its receptor genes. In addition, the glucose-lowering effects of DNJ may be achieved by an increased abundance of GLUT4 protein in the plasma membrane, as a consequence of the increased transcript levels of the GLUT4 gene and the activation of AMPK.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제34권2호
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pp.38-44
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2017
Mulberry leaves containing 1-deoxynojirimycin (DNJ) have been recognized as a potentially important source for prevent or treat hyperglycemia. However, DNJ content of natural mulberry leaf are as low as 0.1%. Thus, the most effective method for increasing ${\alpha}$-glucosidase inhibitory activity with the DNJ high-production is needed. In this study, we investigated the influence of ${\alpha}$-glucosidase inhibitory activity according to different pH values (6-9) and inoculation amounts (0.1-0.5%) when Bacillus subtilis cultured on mulberry leaf powder media. We confirmed that ${\alpha}$-glucosidase inhibitory activity was difference according to culture conditions of different pH values, inoculation amounts, and fermentation times. The results of mulberry leaf fermentation according to pH values and inoculation amounts were shown that the optimal conditions for ${\alpha}$-glucosidase inhibitory activity were defined as pH 7 and 9, inoculation amount 0.4%, and incubation until 2 to 4 days. These results can be provided a basic data for the optimal culture conditions increasing ${\alpha}$-glucosidase inhibitory activity from mulberry leaf fermentation.
To increase the high production of 1-deoxynojirimycin (DNJ) from Streptomyces sp. SID9135, the effect of various carbon sources, nitrogen sources, cationic metal ions, the initial pH of the medium, and agitation speed were investigated. The most effective carbon and nitrogen sources were found to be lactose 2.5% (w/v) and soybean meal 2.0% (w/v), respectively. None of the cationic metal ions examined had any detectable stimulating effect on DNJ production except $Fe^{+2}$ ion. The initial optimum pH for DNJ production ranged from 6-8 and agitation speed was most effective at 400 rpm. In the jar fermentor experiments under optimal culture conditions, the accumulation of DNJ reached about $640{\mu}g$/ml after 5 days of cultivation and the level remained the same for a further two days.
Kim, Jin-Won;Kim, Iksoo;Ahn, Mi-Young;Lee, Heui-Sam;Jung, In-Mo;Ryu, Kang-Sun
한국잠사학회:학술대회논문집
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한국잠사학회 2003년도 제46회 춘계 학술연구 발표회
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pp.54-54
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2003
DNJ concentration in silkworm, Bombyx mori was traced through the life. DNJ absent in egg existed over the concentration of 5 mg gdw-1 from 1st instar to 4th day of 5th instar during larva period. DNJ concentration decreased drastically with body weight about at 7-8th day of 5th instar when silk production became a major process. (omitted)
BACKGROUND/OBJECTIVES: Mulberry leaf (ML) has been shown to have an inhibitory effect on ${\alpha}$-glucosidase, and suppresses postprandial hyperglycemia, which may be related to its deoxynojirimycin (DNJ) content. This study was conducted to investigate the hypoglycemic and dyslipidemic effects of rice coated with ML rich in DNJ in a type 2 diabetes mouse model. MATERIALS/METHODS: The mice were divided into four groups (n = 8 each): non-diabetic normal control (NC); diabetic control (DM-C), fed with 10% polished rice powder (DM-R); and fed with 10% polished rice powder coated with DNJ-rich ML (DM-DNJR). RESULTS: Supplementation with DNJR for six weeks decreased levels of fasting blood glucose, plasma insulin, triglyceride, total cholesterol, and blood glycosylated hemoglobin; conversely, levels of glucagon-like peptide-1 and high-density lipoprotein-cholesterol showed an increase in the same treatment. In addition, weights of mesenteric, epididymal, and total adipose tissues decreased with DNJR supplementation, when compared with diabetic control db/db mice, while maltase, lactase, and sucrase activity in the small intestine were inhibited. The anti-diabetic effects were marginally greater in the DM-DNJR group than in the DM-R group. CONCLUSIONS: These results suggest that rice coated with ML rich in DNJ can reduce hyperglycemia and hyperlipidemia in db/db mice, and may prove useful for individuals with diabetes.
토양으로부터 분리한 Streptomyces sp. 30여 균주들과 한국전통식품에서 분리한 Bacillus sp. 200여 균주들로부터 ${\alpha}$-glucosidase 의 활성을 저해하고 동시에 DNJ를 생산하는 유용균주를 선발하였다. 실험결과 한국전통식품인 청국장으로부터 ${\alpha}$-glucosidase 저해능이 높고 DNJ 생산능이 우수한 한개의 균주를 선발하였다. 이 균주의 동정을 위하여 API kit에 의한 균의 당 이용능 분석, HPLC와 GC에 의한 균체의 quinone 및 지방산 분석 등과 함께 균의 16S rDNA 염기서열을 분석하였으며 주사전자현미경에 의해 균주의 형태적 특성을 관찰하였다. 그 결과 본 연구를 통해 선발한 균주는 건강기능성식품 개발 등에 적용할 수 있는 GRAS에 속하는 균주임을 확인하여 B. subtilis MORI로 명명하였다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제27권2호
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pp.277-281
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2013
Silkworm powder, which contains 1-deoxynojirimycin (DNJ), is a promising complementary and alternative medicine (CAM) in Korea. Silkworm powder was produced from Yeonnokjam pupae at d 3 of the 5th instar at the National Academy of Agricultural Science. The powder was derivatized with 9-fluorenylmethyl chloroformate (FMOC-Cl), and the DNJ-FMOC content was measured by HPLC. We investigated the content of 1-DNJ in the silkworm powder and its glucose-lowering effect when it was treated at different temperatures. The content of 1-DNJ was the lowest at $150^{\circ}C$, while it was constant at other temperatures. The silkworm extract powder was orally administered to diabetic mice (20 mg/kg/d) for 4 wk. Water intake did not significantly change when compared with the control group (T0). The blood glucose levels significantly decreased when mice where administered silkworm powder treated at $60^{\circ}C$ (T60) compared to the control group, but no difference was observed between the groups T100 and T150. Moreover, the blood levels of TG significantly decreased compared with the control group. Based on these results, we surmise that the properties of the silkworm extract powder were stable upon heating at $100^{\circ}C$ but not at $150^{\circ}C$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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