• 제목/요약/키워드: DMEM

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Induction of Tyrosine Hydroxylase by Nurr-1 in hES Cells

  • An So-Yeon;Lee Yeong-Jae;Kim Eun-Yeong;Jo Hyeon-Jeong;Choe Gyeong-Hui;Park Se-Pil;Im Jin-Ho
    • 한국동물번식학회:학술대회논문집
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    • 한국동물번식학회 2002년도 춘계학술발표대회 발표논문초록집
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    • pp.85-85
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    • 2002
  • As an effort to direct differentiation of human embryonic stem cells (hES, MB03) to dopamine-producing neuronal cells, we expressed Nurr-l in hES and examined the expression of tyrosine hydroxylase (TH) after bFGF induction. To introduce Nurr-l, hES cells were maintained in humidified chamber with 5% CO₂ and 95% air in DMEM/Fl2 supplemented with FBS (10%), penicillin (100U/㎖), and streptomycin (100㎍/㎖). (omitted)

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유전자 재조합된 레트로바이러스의 생산을 위한 무혈청 배지의 개발과 레트로바이러스의 연속 생산공정 개발 (The Development of Serum-Free Media for the Betrovirus Production and Using It in Continuous Production)

  • 안지수;조수형;김병기
    • KSBB Journal
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    • 제16권3호
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    • pp.274-280
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    • 2001
  • 본 연구에서는 레트로바이러스 생산 세포인 CRIP/LacZ 세포의 배양시에 혈청의 역할을 대체 할 수 있는 여러 첨가불을 선정하고 그 농도를 정하는 실험올 수행하여, 레트로바이러 스 생산을 워한 무혈청 배지를 개발하였다. 그 결과 DMEM 을 기본배지로 하고 insulin, transfenin, BSA, EGF and linoleic acid를 포함한 무혈청 배지를 개발하였다. 이를 충전 층 연속배양기흘 이용한 레트로바이러스의 연속생산 실험에 본 결과 $6-7\times10^4 cfu/ml$서 수율을 가진 레트로바이러스를 약 8일간 생산할 수 있었다. 충전층 연속반응기에서도 T -flask와 같이 온도의 영향이 매우 중요하였고 $32^{circ}C$, 에서 가 장 높은 수율회 레트로바이러스를 생산할 수 있었다. 이는 레트로바이러스외 온도에 따흔 비활성속도가 바이러스 생산 수율에 매우 큰 영향음 마칩을 시사해 주논 결과이다. 또한 충전층 배양기에서 무혈청배지를 이용한 세포배양 시에는 무혈청배지 첨가물로 서1포 부착 물짚에 대한 연구가 필요하다고 생각된다.

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인체 폐섬유아세포 배양에 의한 수두바이러스의 생산 (Production of Varicella-zoster Virus Using Human Lung Fibroblast Cells As Host Cells)

  • 김원배;박정극
    • KSBB Journal
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    • 제11권2호
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    • pp.254-261
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    • 1996
  • 수두 바이 러스(Varicella-zoster virus, VZV) 백신을 생산하기 위하여 약독화된 수두 바이러스 주인 Oka 주를 사용하여 정상세포인 인체 폐세 포(human lung fibroblast cells)로부터 수두 바이 러스 생산조건을 검토하였다. 숙주세포의 배양을 위 한 최적 성장배지로는 DMEM이 조사된 배지 중에 서는 가장 좋음을 알 수 있었으며 숙주세포의 성장율은 세포 age의 지표인 population doubling level (PDL) 이 46 이상인 경우 낮아지는 것무로 확인되 었으며 따라서 수두바이러스 생산을 위해서는 PDL 4 46 이하의 young cell을 사용해야 할 것으로 사료된 다 한편 수두바이러스 생산을 위한 최적 증식조건 으로는 배양온도 $37^{\circ}C$, 혈청농도 2%, MOl 1:5였다. 숙주세포를 대량배양하기 위한 기본조건을 검토 하기 위하여 미 럽담체 (Cytodex-3)를 이용한 spm­n ner flask culture를 시행하였다. 미럽담체에서의 숙 주세포 성장은 T -flask와 비하여 별다른 차이가 없었으나 VZV의 증식은 T-flask 배양에서보다 훨씬 낮았다. 이는 미립담체배양에서의 높은 전단응력 과 미립담체끼리의 영김현상 때문으로 생각된다.

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생쥐 원시생식세포의 분리와 체외배양 (Isolation and Culture of Mouse Primordial Germ Cells)

  • 이황;김선욱;김종수;변태호;이상호
    • 한국수정란이식학회지
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    • 제9권3호
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    • pp.255-260
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    • 1994
  • 원시생식세포(primordial germ cell; PGC)는 성성숙 이후에 기능을 갖는 생식세포의 근원이 되는 세포로서, 다능성을 갖고 있는 것으로 알려져 있다. 그러므로 chimera 및 유전자 변환동물 생산을 위해 널리 사용되어 온 배아주(embrynic stem; ES)세포를 대신할 다른 세포계라고 생각되어져 많은 연구가 진행되고 있다. 본 실험은 체외배양을 통하여 원시생식세포의 증식과 확립을 위해 배양조건을 구명하고, 또한 성장인자의 효과를 검증하기 위하여 실시되었다. 원시생식세포는 12.5일째의 ICR 생쥐태아의 원시생식선 융기조직으로부터 추출하였으며, DMEM + 20% FCS + nucleosides + antibiotics로 조성된 sDMEM 배양액을 사용하여 mitomycin C로 전처리한 되먹임세포단층(feeder layer)위에서 체외배양하였다. bFGF 및 LIF를 20, 40ng/ml농도로 각각 또는 함께 첨가하여 성장인자의 효과를 검토하였다. 원시생식세포는 성에 따라 유의적인 colony 형성율을 보였고(♂:1.9 colonies / genital ridge, ♀:1.3 colonies / genital ridge), bFGF 및 LIF의 첨가 및 첨가농도에 따라서도 유의성 있는 결과를 보였다(0.3~1.9 colonies / genital riege). 그러나 3회 이상 계대배양을 할 경우, 원시생식세포의 colony를 4% prarformaldehyde로 20분간 고정한 후, tris-maleate buffer(pH 9.0)로 10분간 3회 세정하였다. Fast Red로 염색을 실시한 결과, 대부분의 colony가 염색반응을 보여 다능성을 갖는 원시생식세포의 colony임이 입증되었다. 그러나 대부분의 colony가 3회 이상의 계대배양시 생종율이 급격히 떨어지는 것을 감안하면, 또 다른 미지의 성장인자나 보다 적절한 배양조건이 요구된다고 생각된다.

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Growth Factors Supplementation in Culture Medium Leads to Active Proliferation of Porcine Fibroblasts

  • Kim, Bella;Ko, Na-Young;Hwang, Seong-Soo;Im, Gi-Sun;Kim, Dong-Hoon;Park, Jin-Ki;Ryoo, Zae-Young;Oh, Keon-Bong
    • Reproductive and Developmental Biology
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    • 제35권3호
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    • pp.301-306
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    • 2011
  • Fibroblasts of large animals are easy to isolate and to maintain in vitro culture. Thus, these cells are extensively applied to donor cell for somatic cell nuclear transfer, and to substrate cells to generate induced pluripotent stem cells after transfection of requited genes to be essentially required for direct reprogramming. However, limited mitotic activity of fibroblasts to differentiate along a terminal lineage becomes restrictive for their versatile application. Recently, commercial culture medium and systems developed for primary cells are provided by manufactures. In this study, we examined whether one of the systems developed for primary fibroblasts of human are effective on porcine ear skin fibroblasts. To this end, we performed proliferation assay after five days culture in vitro of porcine fibroblasts in medium DMEM, which is generally used for fibroblasts culture, and medium M106 for human dermal fibroblasts, supplemented with various concentrations of FBS and LSGS contained mainly growth factors, respectively. Consequence was that presence of 15% FBS and 0.1 ${\times}$ concentrations of LSGS in DMEM showed most active proliferation of porcine fibroblasts.

생쥐 정자세포의 분리와 체외 배양에 관한 연구 (In Vitro Culture Following Purfication of Mouse Spermatogenic Cells)

  • 김묘경;김진회;이상민;정/하해숙;이훈택;정길생
    • 한국가축번식학회지
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    • 제20권1호
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    • pp.43-52
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    • 1996
  • 본 연구는 생쥐의 고게정관내에 존재하는 분화단계의 정자세포를 발생단계별로 분리하여, 체외에서 단기간 배양체계를 확립하기 위하여 실시하였다. 8주령 이상된 생쥐의 정소로부터 정소막을 제거시킨 후, collagenase (1mg/ml), trypsin(2.5mg/ml)를 처리하여 곡세정관을 간질세포와 분리하여 배양액에 부유시켰다. 부유세포는 Celcep장치를 이용하여 세포크기와 밀도 차이에 의해 분화 단계별로 분리하였다. 회수된 세포의 균질성은 haematoxylin/eosin 또는 orcein으로 염색한 후, 광학현미경하에서 확인한 결과 약 85% pachytene spermatocyte와 round spermatid을 성공적으로 분리해냈다. 따라서 sedimentation velocity에 의해서 생쥐의 spermatogenic cell의 발달단계별 분리가 가능함을 알 수 있었다. 이러한 방법으로 분리된 pachytene spermatogenic cell들은 DMEM 배양액에서 6일 이상 배양한 결과 약 36%의 생존율을 보였다. 따라서, 분화단계별 정자 세포의 분리 및 배양체계의 확립은 웅성생식세포의 발생과정에 따른 생리 또는 분자생물학적 현상을 규명함은 물론 세포융합기술의 이용에 의한 형질전환동물 생산에의 응용을 통해 가축에 있어서의 형질전환 생산효율의 개선에 기여할 수 있으리라 사료된다.

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전통한우(칡소)의 귀세포를 이용한 핵이식에서 전기융합 조건이 핵이식 수정란의 발달에 미치는 영향

  • 최은주;이호준;김기수;윤종택
    • 한국동물번식학회:학술대회논문집
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    • 한국동물번식학회 2001년도 춘계학술발표대회
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    • pp.67-67
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    • 2001
  • 전기자극은 핵이식 시 수핵난자와 공여핵의 융합을 위해 보편적으로 사용되는 방법이다(Robl, 1999). 그러나 부적절한 전기자극은 수핵난자 세포질에 해를 입히고, 이후의 배발달에 좋지 않은 영향을 준다. 본 실험은 체세포 핵이식을 \circled1 1.9㎸/cm, 20$\mu\textrm{s}$ 2회, \circled22.0㎸/cm, 20$\mu\textrm{s}$ 2회, \circled32.2㎸/cm, 10$\mu\textrm{s}$ 2회, 및 \circled41.9㎸/cm, 30$\mu\textrm{s}$ 2회의 전기자극으로 융합을 실시하여 각 자극 별 융합율과 난자의 lysis율을 비교하고, 배양 후 배반포 발생율을 조사하였다. 공여핵은 칡소의 귀 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM에서 39$^{\circ}C$, 5%$CO_2$의 incubator에서 배양하여 monolayer confluent형성 후 0.5% FBS가 첨가된 DMEM에서 3-4일간 배양 후 trypsin처리하여 제핵된 체외성숙 난자에 핵이식하였다. \circled1,\circled2,\circled3,\circled4의 핵이식 조건을 이용하여 공여핵의 체세포와 수핵란 세포질간의 융합을 유도한 결과, 융합율은 각각 50.7%, 48.1%, 65.5%, 및 33.3%였으며, 수핵난자의 세포질 lysis율은 39.%1, 41.7%, 22.6%,및 52.7%으로 \circled32.2㎸/cm, 10$\mu\textrm{s}$ 2회의 조건에서 융합율이 유의적으로 높았고, 수핵난자의 세포질 lysis율에 있어서도 다른 군에 비하여 낮았다 각각의 핵이식 조건별로 융합한 후 난할율 및 배반포 발생율은 각각 65.7%, 73.5%, 77.2%, 및 53.3%과 47.8%, 52.0%, 49.7%, 및 21.8%로 나타나 난할율 및 배반포 발생율에 있어서 융합조건에 따라 큰 차이는 없었으나 1.9㎸/cm, 30$\mu\textrm{s}$ 2회의 조건이 다른 조건들에 비하여 유의적으로 낮았다. 따라서, 체세포와 수핵란 세포질간의 융합율과 배반포 발생에 미치는 영향은 전압보다는 시간에 더 크게 받음을 알 수 있었으며, 이와 같은 결과에서 융합시 시간을 오래 주는 것보다 전압을 높이는 것이 수핵난자의 세포질에 상해를 줄이고 이후 배반포 발생에 유리할 것으로 사료되었다.

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배양 치조골모세포의 생물학적 특성에 관한 연구 (Study on the Biological Characteristics of Cultured Osteoblasts Derived from Alveolar Bone)

  • 이용배;이성진;유석주;김성윤;신계철;김현아;유형근;신형식
    • Journal of Periodontal and Implant Science
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    • 제34권2호
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    • pp.317-332
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    • 2004
  • Osteoblasts from alveolar bone may have an important role in the bone regeneration for periodontium, but their culture and characterization are not determined yet. The purpose of this study was to investigate the biological characteristics of primary explant cultured osteoblasts(PECO) from alveolar bone. Osteoblasts were isolated and cultured from alveolar socket of extracted tooth in children. To compare the characteristics, osteoblasts and gingival fibroblasts were cultured with DMEM at $37^{\circ}C$, 5% $CO_2$, l00% humidity incubator, and human fetal osteoblasts cell line(hFOB1) were cultured with DMEM at $34^{\circ}C$, 5%, $CO_2$ 100% humidity incubator. To characterize the isolated bone cells, morphologic change, cell proliferation and differentiation were measured. Morphology of PECO was small round body or cuboidal shape on inverted microscope and was similar with hFOB1. PECO became polygonal shape with stellate and had an amorphous shape at 9th passage in culture. PECO had significantly higher activity than that of gingival fibroblasts and hFOB1 in alkaline phosphatase activity. The expression of osteocalcin and bone sialoprotein in PECO was notably increased when compared with hFOB1 and gingival fibroblasts. These result indicated that PECO from alveolar bone in children has an obvious characteristics of osteoblast, maybe applied for the regeneration of bone.

Steroid Effects on Cell Proliferation, Differentiation and Steroid Receptor Gene Expression in Adult Bovine Satellite Cells

  • Lee, Eun Ju;Choi, Jinho;Hyun, Jin Hee;Cho, Kyung-Hyun;Hwang, Inho;Lee, Hyun-Jeong;Chang, Jongsoo;Choi, Inho
    • Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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    • 제20권4호
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    • pp.501-510
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    • 2007
  • The present study was conducted to establish primary bovine muscle satellite cell (MSC) culture conditions and to investigate the effects of various steroid hormones on transcription of the genes involved in muscle cell proliferation and differentiation. Of three different types of proteases (type II collagenase, pronase and trypsin-EDTA) used to hydrolyze the myogenic satellite cells from muscle tissues, trypsin-EDTA treatment yielded the highest number of cells. The cells separated by hydrolysis with type II collagenase and incubated on gelatin-coated plates showed an enhanced cell attachment onto the culture plate and cell proliferation at an initial stage of cell growth. In this study, the bovine MSCs were maintained in vitro up to passage 16 without revealing any significant morphological change, and even to when the cells died at passage 21 with decreased or almost no cell growth or deformities. When the cells were incubated in a steroid-depleted environment (DMEM(-)/10% CDFBS (charcoal-dextran stripped FBS)), they grew slowly initially, and were widened and deformed. In addition, when the cells were transferred to an incubation medium containing steroid (DMEM(+)/10% FBS), the deformed cells resumed their growth and returned to a normal morphology, suggesting that steroid hormones are crucial in maintaining normal MSC morphology and growth. The results demonstrated that treatments with 19-nortestosterone and testosterone significantly increased AR gene expression (p<0.05), implying that both testosterone and 19-nortestosterone bind with AR and that the hormone bound-AR complex up-regulates the genes of its own receptor (AR) plus other genes involved in satellite cell growth and differentiation in bovine muscle.