• 미생물학회지
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• 제37권3호
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• pp.209-213
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• 2001

Bacillus spp. 이용하여 B3공법을 사용하는 하수 종말 처리장의 포기조에서 Bacillus sup. 변화를 FSIH방법과 포자염색 방법으로 관찰하였다. DAPI로 측정한 세균수는 $3.2{\times}10^8 ~ 4.4{\times}10^8 $ cells/ml 범위로 큰 변화가 없었으나, Bacillus sp. 균수는 $0.3{\times}10^8 ~ 2.5{\times}10^8 $ cells/ml 범위로 지점별, 조사시기별로 큰 차이가 있었다. 포자수는 $0.3{\times}10^7 ~ 8.4{\times}10^7 $ cells/ml 범위로 3월에는 세 번째 포기조, 5월에는 두 번째 포기조에서 각각 8.5, $5.5{\times}10^7$cells/ml으로 높은 값을 보였다. 총세균수는 DAPH를 측정한 값과 포자수를 합하여 사용하였고, Bacillus속 세균수는 FISH로 계수된 수와 포자수를 합하여 사용하였다. 충세균수에 대한 Bacillus sp.균의 비율은 약 8~60% 범위로 첫 번째 및 세 번째 포기조에서 각각 50%, 35% 이상의 높은 비율을 보였다. B3 공법에서는 Bacillus가 우점하고 있음이 FISH 방법으로 확인되었으며, 반송 슬러지와 하수가 유입되는 첫 번째포기 조에서 그 비율이 높았고, 다음 포기조로 가면서 그 비율이 줄어들고 있었다. Bacillus의 포자수는 뒤의 포기조로 가면서 그 수와 비율이 높아지고 있었다.

• 생명과학회지
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• 제27권12호
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• pp.1507-1514
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• 2017

김치는 한국에서 가장 인기 있는 발효식품이며, 여러 연구에서 암예방, 항비만, 항염증 등의 활성을 가지는 건강기능성 식품으로 보고되고 있다. 본 실험에서는 김치의 기능성을 높이기 위하여 항암기능성이 알려진 겨우살이 추출물을 첨가하여 개발한 암환자용 김치(kimchi B)의 암세포 증식억제능 및 그 기전에 대하여 검토하였다. 인체 폐암 A549세포를 이용하여 증식저해 효과와 apoptosis 유도 및 관련된 mRNA 유전자 발현에 미치는 영향을 관찰하였으며, 대조군으로는 표준화김치(kimchi A)를 사용하였다. A549 인체 폐암 세포를 이용한 성장 저해시험에서 MTT 방법과 hemocytometer를 이용하여 암세포 수를 개수한 결과, 김치를 첨가한 군에서 농도 의존적으로 증식억제 효과가 나타났으며, 특히 kimchi B를 첨가한 군에서 더 높은 증식억제 효과를 확인할 수 있었다. DAPI 염색을 통해 암세포 핵의 형태적 특징을 조사한 결과 kimchi B를 첨가한 군에서 DNA단편이 발견되어, A549 인체 폐암세포의 증식억제효과는 apoptosis에 의한 것으로 관찰되었다. Apoptosis의 기전을 알아보기 위하여 Bcl-2 family (Bax, Bcl-2, Bcl-xL) 발현과 p53, p21 발현을 측정한 결과, kimchi B를 첨가한 군에서 Bax 유전자는 증가하고 Bcl-2 유전자 발현이 감소하여, 이들 유전자 발현과 관련되어 apoptosis가 유도되었음을 확인할 수 있었으며, 이들 유전자들의 발현은 p21 발현 증가에 의한 것으로 보아 kimchi B를 처리한 A549인체 폐암세포는 p53 비의존적인 p21 발현증가에 의해 암세포 증식저해 효과를 나타낸 것으로 사료된다. 이 연구를 바탕으로 암환자들을 위한 기능성이 증진된 김치 개발에 활용이 가능할 것으로 기대된다.

• 예술인문사회 융합 멀티미디어 논문지
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• 제7권1호
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• pp.395-405
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• 2017

와송 유래 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물의 인체 폐암세포 A549에 대한 항암활성을 확인하기 위하여 본 연구를 수행하였다. 폐암 세포에 대한 세포 생존율을 측정하기 위하여 MTS assay를 수행한 결과, 농도 의존적으로 폐암세포 성장 억제효과를 보였다. 세포사멸 유도능을 확인하기 위하여 DAPI 핵염색을 통한 직접 육안관찰을 수행한 결과, EtOAc 분획물을 처리한 군에서 핵내 염색질 응축등의 세포사멸 지표가 관찰되었고, Annexin V-FITC를 이용하여 세포막에 노출된 phosphatidylinositol (PS)를 검출한 결과, 농도 의존적으로 초기 세포사멸 및 후기 세포사멸이 증가하였다. 세포사멸의 또다른 지표인 세포주기 억제능을 확인하기 위하여 G2/M기 관련 유전자인 CDK1, 4, cyclin B1, D1의 mRNA 발현정도를 RT-PCR을 이용하여 확인한 결과, 농도의존적으로 mRNA의 발현량이 현저히 감소하였으며, 세포사멸의 직접적 신호전달 표적 단백질인 p53, Bax, Bcl-2 및 pro-caspase-3등의 발현정도를 확인한 결과, p53과 Bax 단백질의 발현은 농도의존적으로 증가하였고, Bcl-2와 pro-caspase-3 단백질의 발현은 시간 및 농도의존적으로 감소하였다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제13권4호
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• pp.281-285
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• 2009

Rotenone, a mitochondrial complex I inhibitor, can induce the pathological features of Parkinson's disease (PD). In the present study, naringin, a grapefruit flavonoid, inhibited rotenone-induced cell death in human neuroblastoma SH-SY5Y cells. We assessed cell death and apoptosis by measuring mitogen-activated protein kinase (MAPKs) and caspase (CASPs) activities and by performing 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining, and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) staining. Naringin also blocked rotenone-induced phosphorylation of Jun NH2-terminal protein kinase (JNK) and P38, and prevented changes in B-cell CLL/lymphoma 2 (BCL2) and BCL2-associated X protein (BAX) expression levels. In addition, naringin reduced the enzyme activity of caspase 3 and cleavages of caspase 9, poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), and caspase 3. These results suggest that naringin has a neuroprotective effect on rotenone-induced cell death in human neuroblastoma SH-SY5Y cells.

• 대한본초학회지
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• 제27권4호
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• pp.17-23
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• 2012

Objectives : Schisandrae Fructus (SF) has traditionally been used to balance level of body fluid and to strengthen kidney function. It has been reported that the SF extract has antioxidant, hepatoprotective, neuroprotective and anticancer effects. This study investigated an antiproliferative effect of SF extract on PC-3 human prostate cancer cells and analyzed active ingredients of SF extract qualitatively and quantitatively. Methods : We examined the antiproliferative effect of SF extract with MTT assay, DAPI staining and annexin-V/7-AAD double staining. The active ingredients of SF extract were identified by using HPTLC and HPLC/DAD system. Results : SF-chloroform fraction inhibited growth of PC-3 cells and changed the morphology of nucleus in a dose dependent manner. A dose-dependent apoptotic cell death was also measured by flow cytometry analysis. It was analyzed that SF-chloroform fraction contained more schizandrin than other fractions by using HPTLC and HPLC/DAD system. Conclusions : These results suggest that SF extract and schizandrin may be a potential chemotherapeutic agent for the control of PC-3 human prostate cancer cells.

• 대한약침학회지
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• 제21권4호
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• pp.268-276
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• 2018

Objectives: The purpose of this study is to investigate the anti-cancer effects of different fractions of Astragalus membranaceus (AM) in human non-small cell lung cancer (NSCLC) cells. Methods: We isolated hexane, ethyl acetate, and butanol fractions from crude ethanol extract of AM. The cell death was examined by MTT assay and trypan blue exclusion assay. Apoptosis was detected by DAPI staining, annexin V-PI double staining and cell cycle analysis. The expression of apoptosis-related proteins and mitogen-activated protein kinases (MAPKs) was examined by western blot. Results: Among various fractions of AM, the ethyl acetate fraction of AM (EAM) showed the strongest cytotoxic effect in NSCLC cells. EAM reduced the cell proliferation in a time- and dose-dependent manner in NSCLC cells. In addition, EAM induced the chromatin condensation, and increased the population of sub-G1 phase and annexin V-positive cells in a time-dependent manner, indicating that EAM induced apoptosis in NSCLC cells. Consistently, EAM enhanced the expression of cleaved caspase-8 and -9, and induced the accumulation of cleaved- poly (ADP-ribose) polymerase (PARP). Among MAPK proteins, only ERK was dephosphorylated by EAM, suggesting that ERK might be related with EAM-induced apoptosis. Conclusion: Our results clearly demonstrate that EAM exhibited anti-cancer effects in NSCLC cells by induction of apoptosis. We provide a valuable evidence which suggests that AM could be a desirable therapeutic option for treatment of NSCLC.

• BMB Reports
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• 제41권3호
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• pp.248-253
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• 2008

Stresses and nutritional starvation are two main external signals for the induction of sex pheromones in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe. In an attempt to identify the components involved in transduction of starvation signals, we screened 135 temperature-sensitive (ts) mutants and isolated 6 mutants that induced the pheromone even in the presence of a nitrogen source. These mutants exhibited two distict induction phenotypes: pheromone induction at restrictive but not at permissive temperatures; and pheromone induction at both permissive and restrictive temperatures. The times required for the maximum pheromone induction at the restrictive temperature differed slightly in each mutant. In addition to the pheromone induction phenotype, the ts243 and ts304 mutants exhibited cell-division-cycle defects. The ts304 mutant cells showed an abnormal cytoplasmic DAPI staining pattern. The nucleolus of this mutant seemed to be fragmented, a phenomenon which is typically observed in aged yeast cells. The result of our genetic analysis indicated that the pheromone induction mutants belonged to 6 separate complementation groups. We designated these mutants pws1 to pws6.

• 한국진공학회:학술대회논문집
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• 한국진공학회 2012년도 제42회 동계 정기 학술대회 초록집
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• pp.452-452
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• 2012

저온 플라즈마를 발생시키는 대기압 마이크로-플라즈마 젯(Micro-plasma jet)을 이용하여 플라즈마와 세포와의 상호작용에 대한 연구를 진행하였다. 실험에 사용된 세포는 인체의 방광암 세포(Human bladder carcinoma cell, EJ)이며, 플라즈마 처리 후 bioassay를 통하여 세포 예정사 효과를 확인하였다. 수십 kHz (low frequency)의 펄스파 전압을 인가하여 발생시킨 플라즈마는 형성 기체로 헬륨을 사용하였고, 광 방출 분광법으로 산소의 첨가량에 따른 활성 종들의 변화를 비교해 보았다. 플라즈마 처리 후에는 DAPI staining을 통하여 세포 예정사에서 형성되는 apoptotic body를 확인하였고, 세포막 외부로 이동하는 Phosphatidic Serin (PS)과 결합하는 Annexin-V assay를 통하여 apoptosis rate를 측정하였다. 이를 바탕으로 암세포에 미치는 플라즈마 활성종의 영향을 분석하였다.

• Journal of Plant Biology
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• 제36권2호
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• pp.183-192
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• 1993

Efficient plant regeneration system was established through the culture of rice (Oryza sativa L.) microspores. Microspores released by anther shedding culture developed into proembryos and calluses in B5 medium within two weeks of culture. The optimal hormone and carbon sources were dependent on the genotypes used. Microspore's viability decreased rapidly in culture time, therefore less than 3% of the total microspores were viable at the 9th day when the first microspore division was observed. Of two types of microspores (pollen dimorphism) observed in culture, only the P-grain, larger microspores than normal one was able to divide. Using 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) fluorescence staining, it was confirmed that the symmetrical division of uninucleate microspore was the first step leading to continuous microspore development. Microspore-derived proembryos and calluses were regenerated to plants in N6 medium containing 1 mg/L NAA and 5 mg/L kinetin, and 78.3% of the regenerated plants were haploids.

• 자연과학논문집
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• 제16권1호
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• pp.143-154
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• 2005

대청호에서 세균군집의 생태학적 역할을 조사하기 위하여 대청호 본 댐과 대전 취수탑의 중간 지점인 대청호의 만입부 지점에서 1998년 9월~1999년 8월까지 DAPI 염색법으로 수심에 따른 총 세균수를 조사하였다. 조사지점의 수표면, 수심 5m, 10m, 15m, 및 25m에서 각각 채수하여 총 세균수를 측정하고 이화학적 수질요인과 총 엽록소 $\alpha$의 농도를 측정하였다. 총 세균수는 표층수에서 $1.6-1.7.0x10^6$ cells/ml, 수심 5m에서는 $2.3-11.0x10^6$ cells/ml, 수심 10m에서는 $1.2-1.4.0x10^6$ cells/ml, 수심 15m에서는$1.4-15.0x10^6$ cells/ml, 그리고 수심 25m에서는 $1.4-1.3.0x10^6$ cells/ml이었으며, 본 조사에서는 4월경부터 수온 증가에 따라 표층수의 총세균수는 증가하기 시작하여 7월경에 최대에 도달하였고, 이때 수심이 깊어질수록 총세균수는 감소하는 경향을 보였다. 각 수심에서 총세균수와 총엽록소 $\alpha$ 량 및 이화학적 수질요인과의 관계를 논의하였다.