Objectives In this study, the author intended to investigate whether Gami-cheongpetang (GCP), Gagam-jeongkitang (GJG), Gami-samooltang (GSM) and Gami-ijoongtang (GIJ) significantly affect in vivo (animal model) and in vitro (cultured cells) mucin secretion and MUC5AC gene expression in airway epithelial cells. Methods For in vivo experiment, the author induced hypersecretion of airway mucin in rats by introducing SO2 for 3 weeks. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to assess the effects of orally-administered GCP, GJG, GSM and GIJ in vivo mucin secretion from tracheal goblet cells of rats after 1 week. Also, the effects of the agents on TNF- or EGF-induced MUC5AC gene expression in human airway epithelial cells (NCI-H292) were investigated. Possible cytotoxicities of the agents were assessed by examining the rate of survival and proliferation of NCI-H292 cells. Results (1) GCP and GJG significantly inhibited hypersecretion of in vivo mucin, although GSM and GIJ did not affect hypersecretion of in vivo mucin; (2) GCP and GJG significantly increased in vitro mucin secretion from cultured HTSE cells. However, GSM and GIJ did not affect in vitro mucin secretion from HTSE cells; (3) GCP and GJG significantly inhibited the expression levels of EGF-induced MUC5AC gene in NCI-H292 cells. However, GSM and GIJ increased the expression levels of EGF-induced MUC 5AC gene in NCI-H292 cells; (4) GCP, GJG, GSM and GIJ did not significantly inhibit the survival and proliferation of NCI-H292 cells. Conclusions These results suggest that GCP, GJG, GSM and GIJ can not only affect the secretion of mucin but also affect the expression of mucin gene. The author suggests that the effects of GCP, GJG, GSM and GIJ with their components should be further investigated by using animal experimental models that simulate the diverse pathophysiology of pulmonary diseases.
들깨 메탄올 추출물이 acetylcholinesterase(AChE)의 활성 및 PC 12 cell 세포사멸에 미치는 영향을 검토하였다. AChE에 대한 억제환성은 들깨 메탄을 추출물의 농도가 높을수록 유의적으로 높았으며 추출물의 분획물 중에서는 n-butanol층이 가장 높은 억제율을 나타내었다. L-glutamate 또는 ${\beta}-amyloid$ protein $(A{\beta})$으로 유도된 PC 12 cell에 대한 세포사멸 억제효과도 추출물의 농도가 높을수록 유의적으로 증가하였다. 또한 rat brain에 $FeSO_{4^-}H_2O_2$로 산화적 스트레스를 유발시켜 추출물의 TBARS 생성 억제활성을 조사한 결과 들깨 메탄을 추출물은 농도가 높아질수록 산화적 스트레스에 대한 억제활성이 증가하였으며 분획물 중에서는 n-butanol층에서 가장 높은 억제활성을 나타내었다. 이상의 결과들로 미루어 볼 때 들깨 메탄을 추출물은 AChE 활성을 억제하고 glutamate 또는 $A{\beta}$에 의하여 유도된 PC12 cell의 세포사멸을 억제하며 이러한 효과는 들깨 메탄을 추출물의 항산화력에 기인할 수도 있을 것으로 사료되었다.
불가사리 골편의 콜라겐으로부터 활성 펩타이드를 분리하기 위하여 초음파를 처리하여 조직을 단편화 시키고 이후 collagnease를 처리하였다. 초음파를 처리할 경우 40kHz의 경우 38.89%의 수율을 나타내었다. 이후 펩타이드의 분자량을 측정하여 12, 20.6, 24, 43, 58a, 100, 116 kDa에서 특정 밴드를 보였다. 이후 Sephadex G-75 컬럼을 이용하여 fraction 별로 모아 사용하였다. 세포 독성을 측정하고 시료 처리 후 형태학적 관찰을 동반한 결과 24 kDa의 경우 최고 농도인 1.0 mg/mL에서 26.7%를 나타내었으며 4번의 계대 이후에도 형태학적 변화가 나타나지 않아 독성이 없다고 해석할 수 있다. 이후 UVA처리 후 MMP-1의 발현을 탐색한 결과 116 kDa부터 24 kDa까지 최고농도인 1.0 mg/mL에서 40, 46.3, 56.8, 57.9, 62.4%의 control 대비 저해율을 보였다. 외부적 스트레스인 UVA에 의한 AP-1의 활성도를 증가시키는 과정을 억제한 것으로 볼 수 있으며 결과적으로 MMP-1의 발현을 효과적으로 조절한 것이라 사료되어 향후 불가사리 콜라겐 유래 펩타이드의 향장소재 활용 가능성이 높다고 할 수 있겠다.
인간의 체내에서 과량으로 생성된 활성산소가 자체 방어기전에 의해서 분해 혹은 소거되지 않는 경우에 이는 생체 조직 내 세포와 면역체계에 관련된 효소들을 손상시켜 암이나 면역질환과 같은 퇴행성 질환을 야기 시키는 것으로 알려지고 있다. 이에 본 연구에서는 고대 이집트 시대이래 지금까지 서구에서 약초 혹은 향초로서 사용되어온 13종 허브추출물에 대해서 유해산소 소거능을 검색하고 SRB assay 방법에 따라 두가지 암세포주(Hepa-lclc7, KB-3-1)와 정상세포주(L-929)에 대한 세포 독성을 조사하였다. 또한 이들에 의한 대식세포의 활성화와 같은 면역체계의 증강 유도 여부를 파악하기 위하여 NO test에 따라 대식세포의 활성화 정도를 간접적으로 측정하였다. 그 결과 13종류의 허브추출물에서 일반적으로 medicinal 허브로 분류되고 있는 eucalyptus, peppermint, mate, sage, thyme, yarrow 등의 수퍼옥사이드 소거능이 다른 허브들에 비해 상대적으로 강한 것으로 나타났다. 또한 이들은 Hepa-1c1c7, KB-3-1과 같은 암세포주 및 L-929와 같은 정상세포주에 대하여도 세포독성을 나타냈으며 이때 각각의 허브추출물에 의해 측정된 암세포주에 대한 $IC_{50}$ 값들은 정상세포주에 대한 $IC_{50}$ 값들보다 크거나 유사한 경향을 나타내어 암세포주에만 선택적으로 세포독성을 나타내지 않았다. 면역증강 활성실험에 있어서는 수퍼옥사이드 소거능이 다른 허브들에 비해 상대적으로 강한 6종류의 허브추출물 중에서 sage 만이 표준시료의 37% 정도의 활성을 나타내어 각 시료의 수퍼옥사이드 소거능과 면역증강 활성과의 연관성은 크지 않은 것으로 나타났다.
식품재료인 메주와 다시마 그리고 이들 재료를 사용하여 자연발효에 의해 제조한 전통 막장에 대한 일반성분을 분석한 결과 기존의 막장에 비해 무기물의 함량이 증가하였다. MNNG에 대한 항돌연변이 효과(400$\mu$g/plate)에서 S. typhimurium TA100 균주에 대해 다시마 분말 5% 첨가 막장이 다른 첨가 농도보다 높은 95.0%의 강한 억제효과를 나타내었다. 4NQO에서도 5%의 다시마 분말을 첨가한 막장이 TA98과 TA100 두균주에 대해서 400$\mu$g/plate에서 각각 81.4%와 88.8%로 다른 첨가 군보다 높은 억제효과를 나타내었다. B($\alpha$)P에 대한 억제효과에서는 동일농도에서 TA98, TA100 두균주에 대하여 다시마 분말 5% 첨가 막장이 각각 85.3%와 91.0%로 다른 첨가군보다 높은 억제활성을 나타내었으며, Trp-P-1에 대해 두균주에 대해서는 96.5%와 92.0%로 다른 농도보다 높은 억제효과를 나타내었다. 암세포 성장 억제효과를 검토한 결과에서는 5%다시마 분말 첨가 막장이 1.0mg/ml시료농도에서 A549가 61.2%, KATOIII는 61.8%, 그리고 HepG2는 66.8%의 성장억제 효과를 나타내었다.
발효콩을 주원료로 한 기능성 식품의 에탄올 추출물과 분획물에 대한 항산화 활성을 측정한 결과, 에틸아세테이트 분획물에서 31.6$\mu\textrm{g}$/mL의 강한 항산화 활성을 나타내었다. 직접 변이원인 MNNG에 대한 항돌연변이 효과에서 S. typhimurium TA100 균주에 대해 발효 콩을 주원료로 한 기능성 식품의 에탄올 추출물(200 $\mu\textrm{g}$/plate)에서 84.8%의 억제효과를 나타내었다. Trp-P-1에 대해서는 S. typhimurium TA98과 TA100 두 균주에 대해 각각 88.7%와 92.8%로 다른 분획물보다 높은 억제효과를 나타내었다. 암세포 성장억제 효과를 검토한 실험에서는 A549와 AGS 및 MCF-7의 경우 에틸아세테이트 분획물이 가장 높은 억제활성을 나타내었으며, 시료농도의 증가와 함께 억제활성도 증가하는 경향을 나타내었으며 시료농도 1 mg/mL에서 A549에 대해서 84.5%와 AGS에서는 88.7% 그리고 MCF-7에 대해서는 85.6%의 높은 암세포 성장억제효과를 나타내었다.
갈조류인 감태(Ecklonia cava)의 에틸아세테이트 분획으로부터 phloroglucinol, eckol, eckstolonol, triphlorethol-A, phlorofucofuroeckol A, dieckol의 6종의 phlorotannin이 분리되었으며, NMR 및 MS분석으로 구조가 규명되었다. 감태의 주요 활성물질 분석을 위하여, 분리된 6종 물질에 대한 항산화, 항염증 및 항알러지 효과를 평가하였다. 그 중 phlorofucofuroeckol A와 triphlorethol-A가 라디컬(DPPH, ABTS) 소거 활성이 높았으며, 염증 반응에 대한 활성을 분석하기 위하여 LPS를 처리한 대식세포주인 Raw264.7에서 산화질소(NO) 생성 억제활성을 측정한 결과, phlorofucofuroeckol A의 NO 생성 억제 효과가 가장 큰 것으로 나타났다. 또한, 알러지 반응에 대한 억제활성을 분석하기 위하여 IgE-항체로 활성화시킨 비만세포주 RBL-2H3에서 분비되는 ${\beta}-Hexosaminidase$를 측정한 결과, dieckol이 농도의존적으로 가장 높은 억제 효과를 나타냈다. 따라서, 본 연구에서 항염증 및 항알러지 활성을 중심으로 분리된 6종의 플로로탄닌 중 phlorofucofuroeckol A와 dieckol은 감태의 알러지 염증 억제활성을 나타내는 주요 물질로 사료된다.
Objectives : In the present study, the author intended to investigate Gagam-jeonggitang(GJT), Gami-hwajeongjeon(GHJ) and Gami-tonggyutang(GTT) significantly affect in vivo and in vitro mucin secretion from airway epithelial cells. Methods : In vivo experiment, the author induced hypersecretion of airway mucin, hyperplasia of tracheal goblet cells and the increase in intraepithelial mucosubstances by exposing rats to SO2 during 3 weeks. Effects of orally-administered GJT, GHJ and GTT during 1 week on in vivo mucin secretion and hyperplasia of tracheal goblet cells were assesed using ELISA and staining goblet cells with alcian blue. For in vitro experiment, confluent HTSE cells were metabolically radiolabeled with 3H-glucosamine for 24 hrs and chased for 30 min in the presence of each agent to assess the effects of each agent on 3H-mucin secretion. Possible cytotoxicities of each agent were assessed by measuring lactate dehydrogenase release. Also, the effects of each agent on contractility of isolated tracheal smooth muscle and effects of each agent on MUC5AC gene expression in cultured HTSE cells were investigated. Results : GJT, GHJ and GTI inhibited hypersecretion of in vivo mucin: GJT and GHJ inhibited the increase of number of goblet cells. However, GTT did not affect the increase of number of goblet cells; GJT and GTT significantly increased mucin secretion from cultured HTSE cells, without significant cytotoxicity. GHJ increased mucin secretion and showed mild cytotoxicity at the highest concentration: GJT, GHJ and GTT chiefly affected the 'mucin' secretion; GJT, GHJ and GTT did not affect Ach-induced contraction of isolated tracheal smooth muscle; GTT did not significantly affect the expression levels of MUC5AC gene. However, GJT significantly. inhibit the expression levels of MUC5AC gene and GHJ significantly increased the expression levels of MUC5AC gene. These results suggest that GJT, GHJ and GTI can increase mucin secretion during short-term treatment(in vitro), whereas it can inihibit hypersecretion of mucin during long-term treatment(in vivo) and GJT and GHJ can not only affect the secretion of mucin but also affect the expression of mucin gene. Conclusions : The author suggests that the effects GJT, GHJ and GTT with their components should be further investigated and it is valuable to find, from oriental medical prescriptions, novel agents which might regulate hypersecretion of mucin from airway epithelial cells.
Objectives In this study, the author tried to investigate whether piryongbang-gamgil-tang (PGGT) significantly affect in vitro airway mucin secretion, PMA- or EGF- or TNF-${\alpha}$-induced MUC5AC mucin production / gene expression from human airway epithelial cells and increase in airway epithelial mucosubstances and hyperplasia of tracheal goblet cells of rats. Materials and Methods For in vitro experiment, confluent RTSE cells were chased for 30 min in the presence of PGGT to assess the effect of PGGT on mucin secretion by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Also, effect of PGGT on PMA- or EGFor TNF-${\alpha}$-induced MUC5AC mucin production and gene expression from human airway epithelial cells (NCI-H292) were investigated. Confluent NCI-H292 cells were pretreated for 30 min in the presence of PGGT and treated with PMA (10 ng/ml) or EGF (25 ng/ml) or TNF-${\alpha}$ (0.2 nM) for 24 hrs, to assess both effect of PGGT on PMA- or EGF- or TNF-${\alpha}$-induced MUC5AC mucin production by ELISA and gene expression by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). For in vivo experiment, the author induced hypersecretion of airway mucus and goblet cell hyperplasia by exposure of rats to $SO_2$ during 3 weeks. Effect of orally-administered PGGT during 2 weeks on increase in airway epithelial mucosubstances from tracheal goblet cells of rats and hyperplasia of goblet cells were assesed by using histopathological analysis after staining the epithelial tissue with alcian blue. Possible cytotoxicities of PGGT in vitro were assessed by examining LDH release from RTSE cells and the rate of survival and proliferation of NCI-H292 cells. In vivo liver and kidney toxicities of PGGT were evaluated by measuring serum GOT/GPT activities and serum BUN/creatinine concentrations of rats after administering PGGT orally. Results (1) PGGT did not affect in vitro mucin secretion from cultured RTSE cells. (2) PGGT significantly inhibited PMA-, EGF-, and TNF-${\alpha}$-induced MUC5AC mucin productions and the expression levels of MUC5AC mRNA from NCI-H292 cells. (3) PGGT decreased the amount of intraepithelial mucosubstances and showed the tendency of expectorating airway mucus already produced. (4) PGGT increased LDH release from RTSE cells. However, PGGT did not show in vivo liver and kidney toxicities and cytotoxicity to NCI-H292 cells. Conclusion The result from this study suggests that PGGT can regulate the production and gene expression of airway mucin observed in diverse respiratory diseases accompanied by mucus hypersecretion and do not show in vivo toxicity to liver and kidney functions after oral administration. Effect of PGGT with their components should be further studied using animal experimental models that reflect the diverse pathophysiology of respiratory diseases through future investigations.
홍경천 뿌리의 에탄을 추출물과 분획물에 대한 항산화 활성을 측정한 결과, 에틸아세테이트 분획물에서 14.3 $\mu\textrm{g}$/DL의 강한 항산화 활성을 나타내었다. 직접 변이원인 MNNG에 대한 항돌연변이 효과에서 S. typhimurium TA100 균주에 대해 홍경천 뿌리 에틸아세테이트 분획물(2000g/p1ale)에서 다른 분획물보다 높은 89.1%의 억제효과를 나타내었다. 4NQO에서도 에틸아세테이트 분획물에서 S. typhimurium TA98 균주와 TA100균주에 대해서 동일 시료농도에서 각각 89.7%와 91.5% 로 다른 분획물보다 높은 억제효과를 나타내었다. B( u )P에 대한 억 제효과에서는 TA98, TA100 두 균주에 대하여 에틸아세테이트 분획물에서 각각 94.2%와 95.7%로 다른 분획물 보다 높은 억제활성을 나타내었으며, Tn-P-1에 대해서 는 두 균주가 각각 92.3%와 93.8%로 다른 분획물 보다 높은 억제효과를 나타내었다. 암세포 성장억 제 효과를 검토한 실험에서는 에틸아세테이트 분획물이 가장 높은 억제활성을 나타내었으며, 시료농도의 증가와 함께 억제활성도 증가하는 경향을 나타내었으며 시료농도 1 mg/CL에서 A549가 90.5%, HepG2가 81.5%, AGS가 92..2% 그리고 MCF-7이 82.6%의 암세포 성장억제효과를 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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