The composition of bacterial communities was detected in surface water of Cheonho Reservoir dominated by cyanobacteria, using fluorescent in situ hybridization (FISH) method. Total bacterial numbers were very high ranging from 0.6~$1.3{\times}10^7 \cells{\cdot}ml^-1$, whereas the ratio of Eubacteria to total bacteria was 29.8~45.8%, which was lower than that in other freshwater ecosystems. On average only 2.1% of DAPI-stained bacteria were detected by FISH with probes for $\alpha$, $\beta$, and $\gamma$-groups, respectively. Unknown eubacteria which was not bound to any probes except EUB 338, was relatively high. On the other hand, the Cytophaga-Flavobacterium group increased following the change of dominant species from Anabaena sp. to Microcystis sp. This result showed that bacterial communities could be affected by phytoplanktons, especially cyanobacteria.
Kim, Young-Ho;Kim, Youn-Sook;Lee, Jae-Ran;Lee, Eun-Kyung
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.3
no.1
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pp.31-38
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1993
A bacterial strain KY-l isolated from sewage was able to produce an extracellular agarase(agarose 4-glycanohydrolase. EC 3.2.1.81). The strain KY-1 was identified as Cytophaga fermentans subsp. agarovorans based on its morphological and physiological characteristics. The agarase was purified by ammonium sulfate precipitation followed by DEAE-Sephadex A-50. Bio-Gel P-100. and CM-Cellulose column chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was 24 kDa by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The optimum temperature and pH for the enzyme activity were 30^{circ}C and 7.5, respectively. The enzyme activity was significantly inhibited in the presence of 0.1 mM $HgCl_2$. whereas it was elevated 3 times by $MnSO_4$ at 1 mM concentration. The Km value and Vmax were 16.67 mg/ml and 3.77 unit/ml.min. The agarase gene was cloned into Escherichia coli MC1061 using the plasmid vector pBR322. A 1.4 Kb DNA fragment of PstI-digested chromosomal DNA of C. fermentans KY-l was inserted into the PstI site of pBR322. expressed in the E. coli. and up to 60% of the total enzyme was extracellularly secreted. Enzymatic properties of the extracellular agarases produced by both the transformant and the donor were very similar in terms of optimal pH and temperature.
The effect of phenol on the change of bacterial community in the effluent water from a wastewater treatment plant was analyzed by PCR and terminal restriction fragment length polymorphism (T-RFLP). The fragments of 16S rDNA were amplified by PCR with bacterial primers, where one of the primers was biotinylated at the 5'-end. After digestion with restriction enzymes, HaeIII and AluI, the biotinylated terminal restriction tragments (T-RFs) of the digested products were selectively isolated by using streptavidin paramagnetic particles. The single-stranded DNA of T-RFs was separated by electrophoresis on a polyacrylamide gel and detected by silver staining technique. When 10 standard strains were analyzed by our method, each strain had a unique T-RF which corresponded to the calculated size from the known sequences of RDP database. The T-RFLP fingerprint generated from the effluent water was very complex, and the predominant T-RFs corresponded to members of the genus Acinetobacter, Bacillus and Pseudomonas. In addition, the perturbation of bacterial community was observed when phenol was added to the sample at the final concentration of 250 $l^{-1}$. The number of T-RFs increased and the major bacterial population could be assigned to the genus Acinetobacter, Comamonas, Cytophaga and Pseudomonas. A intense band assigned to the putative genera of Acinetobacter and Cytophaga was eluted, amplified, and sequenced. The nucleotide sequence of the T-RF showed close relationship with the sequence of Acinetobacter junii.
For elucidating excessive growth of biofilm that subsequently leads to the clogging problem in a small town's sewer lines of Wisconsin, the FISH method was employed. At the beginning of the simulated experiments, ${\beta}$-subclass proteobacteria prevailed in runs fed with industrial wastewater, while ${\gamma}$-subclass proteobacteria dominated in runs with domestic wastewater. However, the bacterial community structure changed significantly over six weeks; Cytophaga-Flavobacterium (CF)group bacteria dominated in most runs fed with the small town's wastewater regardless of their source, while CF-group decreased strongly in run fed with domestic sewage from another city (Madison). It was also microscopically confirmed that most of those clogging materials was toilet tissue, which in turn may lead to vigorous growth of cellulose-degrading CF-group bacteria. This dominant presence of CF-group bacteria in the small town's sewer indicates that the main constituent of biofilm, toilet tissue (cellulose) in sewage, might have induced the unique pattern of their microbial community structure. Therefore, it suggests that molecular technique is useful for monitoring the clogging problems in sewer lines.
For elucidating the effect of salinity to the effect of wastewater treatment, the heterotrophic bacterial numbers, total bacterial numbers, and the bacterial community structure by FISH method were analyzed. The total bacterial numbers were not significantly changed by the salinity. But the heterotrophic bacterial numbers and bacterial community structures were drastically changed by the increase of salinity. In case of 1% salinity, the heterotrophic bacterial numbers and structure were slightly changed comparing to those of contol. In case of 2% and higher salinities, the numbers of heterotrophic bacteria and the proportions of Eubacteria, Proteobacteria $\alpha$-group, $\rho$-group and Cytophaga-Flavobacterium groups were deceasing. By these results, the salinity stress to bacterial community in waste water treatment was unveiled, and for sustaining the waste water treatment system, the salinity should be lower than 1%.
Three kinds of samples, Trachpenalus curiviostris, Astroconger myriaster and Cantherines modestus which were pre-treated in a processing plant were frozen at $-40^{\circ}C$ in a contact freezer and stored for 32 days.The numbers of general bacterium, coliforms and E. coli were measured at 8 day intevals during frozen storage and the isolated strains was classified. The results are as follows; 1. The numbers of coliforms and E. coli in the samples before freezing were much higher, than those during frozen storage and it tended to decrease. 2. General bacteria showed little change in number before and after being frozen. Among 97 strains of isolated coliforms, only 4 strains of K. aerogenes I ana 4 strains of K, cloacae were classified and the rest was not determined. 3. Ninety percent of coliforms was found to be psychrotrophic coliforms, which were able to grow at $5^{\circ}C$ within a week. 4. Vibrio and Pseudomonas were superior in number before freezing while Flavobacterium cytophaga and Moraxella were superior during frozem storage.
Bacterial community structure in the Juam Reservoir was analysed using fluorescent in situ hybridization (FISH) technique from April 2005 to January 2006. Total bacterial numbers varied in the range of 1.58 ${\sim}\;2.73{\times}\;10^6\;cells\;mL^{-1}$ proportional to the concentration of chi-a and had the minimal value in January. The ratios of ${\alpha}\;{\cdot}\;{\beta}\;{\cdot}\;{\gamma}$-subclass proteobacteria and Cytophaga-Flavobacterium (CF) group to total bacteria ranged from 45.1% to 77.5%, and the ratios of ${\alpha}\;{\cdot}\;{\beta}\;{\cdot}\;{\gamma}$-subclasses to total bacteria in June and September with the concentration of chi-a measured were lower than those ratios in April and January. It suggests that enriched growth of Microcystis aeruginosa may inhibit the metabolic activlty of ${\alpha}\;{\cdot}\;{\beta}\;{\cdot}\;{\gamma}$-subclass proteobacteria. However, the ratio of CF group bacteria represented no large change depending on algal bloom. In terms of nitrifying bacteria, the numbers of ammonia-oxidizing bacteria ranged from 9.9 ${\times}\;10^4\;to\;25.5\;{\times}10^4\;cells\;mL^{-1}$ with sharp fluctuation whereas those of nitrite-oxidizing bacteria varied in 8.7${\sim}9.8{\times}10^4\;cells\;mL^{-1}$ without noticeable change except the maximal value of $20.3{\times}10^4\;cells\;mL^{-1}$ in January maybe due to the high DO.
Agar hydorlysates or agarooligosaccharides from agar prepared by Cytophaga agarase showed eight spots on TLC plate and the degree of polymerization of the spots were in the reange of 2.5 - 6.5. Each component of the hydrolysate as tested the several functionalities such as antimicrobial activity, anticavity activity, and anticoagulant activity. The anticativity activity and anticoagulant acitvity were found in all fractions of hydrolysates and several spot on TLC, whereas the anticoagulant activity was very low.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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