캐비어에 대한 수요가 증가하면서 캐비어 종류의 진위여부를 확인 할 수 있는 분석법 마련이 필요해졌다. 본 연구에서는 캐비어 종류을 나누는 철갑상어 종 특이 KASP 마커를 개발하였고 모니터링을 통해 국내 유통중인 불법 캐비어 제품을 확인하고자 하였다. 본 연구에서는 16S ribosomal RNA gene, cytochrome b gene, cytochrome coxidase subunit I gene, cytochrome c oxidase subunit II gene, NADH dehydrogenase subunit 5 gene에서 철갑상어종 특이적인 SNP를 선정하고 이를 표적하는 KASP 마커 11종을 개발하였다. 개발한 KASP 마커를 이용하여 한국의 온라인 마켓에서 유통중인 캐비어 10종을 모니터링 분석한 결과 2개의 제품에서 제품에 표기된 철갑상어 종과 다른 것으로 확인하였으며 두 제품 모두 실제보다 더 비싼 캐비어로 둔갑하여 판매한 것으로 확인되었다. 본 연구를 통해 제작한 KASP 분석방법으로 유통되는 캐비어 종류 분류가 가능하였고 모니터링을 통해 국내 유통되고 있는 불법 캐비어 제품도 확인하였다. 이에 따라 본 연구에서 개발한 SNP기반 KASP 분석법으로 불법 캐비어 제품 유통 근절에 기여 할 수 있을 것으로 기대한다.
본 연구는 우리나라 무안, 태안, 여수, 제주 지역 및 중국 영성, 대련 지역의 낙지 개체군의 종 및 집단분석을 위해 미토콘드리아 CO1유전자의 염기서열을 조사하였다. 유전자 분석은 총 60 개체로부터 6개의 haplotype이 조사되었다. 제주 개체군인 경우 모든 개체 (N = 10) 가 다른 집단에서는 관찰되지 않은 A haplotype으로 구성되어 있어 다른 지역과 뚜렷한 차이를 나타내었다. 이들 haplotype은 MEGA 4 분석에 의해 두 개의 clade로 나뉘어지는데 하나는 무안, 태안, 여수, 중국 대련집단이었고 다른 하나는 제주, 중국 영성집단으로 나뉘는 구조를 하고 있었다. 집단 간 유연관계 분석에서도 같은 현상이 관찰되었다. Group A에 속하는 무안, 태안, 여수, 대련 집단의 낙지 개체군은 group B (제주, 영성) 에 속하는 집단 개체군 보다 유전적 거리가 아주 가까웠다. 본 연구에서 사용한 CO1 universal primer는 종 판별 유전자 마커로서 낙지류에서도 유용하게 활용될 수 있었으나 partial CO1 유전자 내의 변이가 많지 않기 때문에 집단분석에는 한계가 있으나, 지역적 거리 및 장벽 그리고 서식지 차이 등에서 오는 제한적 gene flow에 대한 논의는 가능할 것으로 판단된다.
미토콘드리아가 포함하고있는 결정한유물의 미새구조와 면역황금표식법에 의한 분석을 위하여 우심근 세포의 미토콘드리아에서 전자전달체에 관여하는 효소를 분리하였다. 우심근 미토콘드리아에서 분리된 효소는 실험토끼에 주사하여 (복합체I,NADH-conezyme Q reductase; 복합체 III,Ubiquinol-cytochrome-c-oxldoreductase; 복합체 IV, Cytochrome-c-oxidase)들에 대한 면역항체를 얻었다. 이들 면역항체들은 우심근과 정상인의 골격근 미토콘드리아와 미토콘드리아에 결정함유물을 포함하는 mitochondrical myopathy환자의 골격근 미토콘드리아에 반응시켜 황금입자를 표식하고 전자현미경을 이용하여 이들 면역항체반응을 관찰하였다. 미토콘드리아가 포함하는 결정함유물의 미세구조에는 paracrystalline inclusions body와 multilamellar strudure inclusion body그리고 구형결정함유물(globular crystalline inclusions body) 및 윤형구조 (whirl shaped structure)의 크리스테 중심에 있는 구형결정함유물 등의 4종류로관찰되었다. 복합체 I,복합체 Iv의 효소에 대한 항체를 우심근과 정상인 골격근 그리고 mitochondrical myopathy환자의 골격근에 동일한 면역반응을 시켰을때 미토콘드리아 크리스테에 부착하는 황금입자의 표식 정도는 각각의 근조직에서 유사한 반응이 관찰되었다. 복합체 III의 효소에 대한 항체는 우심근과 정상인의 골격근에서는 유사한 반응이 나타났으나 mitochondrical myopathy환자의 골격근에서는 극히 소수의 황금입자가 관찰되었다. 구형결정함유물은 복합체 I,III,IV의 3종류의 효소에 대한 면역반응 결과 황금입자표식은 관찰되지 않았다. 따라서 mitochondrical myopathy환자의 미토콘드리아에는 복합에 III의 효소가 결핍되었으며 구형결정함유물은 전자전달체 효소들인 복합체 I,III,Iv 효소단백질과는 상관없는 물질로 생각된다.
Kim, So Yeon;Yi, Chang Ho;Kim, Ji Min;Choi, Woo Yong;Kim, Hyoung Seop;Kim, Min-Seop
Animal Systematics, Evolution and Diversity
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제36권2호
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pp.159-163
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2020
Parasesarma bidens(De Haan, 1835) has been designated as a marine protected species by the Act on conservation and management of marine ecosystems. This crab has been recorded only from Jeju-do and Geomun-do, Republic of Korea. In this study, we describe for the first time the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I(COI) sequences of P. bidens. The intra-specific genetic distance among the Korean populations and between the Korean and Chinese populations ranged from 0% to 0.9% and 1.9% to 2.7%, respectively. The inter-specific genetic distances among the four Parasesarma species ranged from 10.9% to 12.8%. The finding of this study will be helpful to better describe P. bidens using COI DNA barcodes and can be used as basic data for their restoration and conservation research.
Park, Hyun-Chul;Bae, Chang-Hwan;Jun, Ju-Min;Kwak, Myoung-Hai
Journal of Ecology and Environment
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제34권3호
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pp.323-331
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2011
Biodiversity and the community composition of micro-eukaryotic organisms were investigated in the Upo wetland in Korea using molecular analysis. Molecular identification was performed using cytochrome oxidase I (COI) and small subunit ribosomal DNA (SSU rDNA). The genomic DNA was isolated directly from soil samples. The COI and SSU rDNA regions were amplified using universal primers and then sequenced after cloning. In a similarity search of the obtained sequences with BLAST in the Genbank database, the closely related sequences from NCBI were used to identify the amplified sequences. A total of six eukaryotic groups (Annelida, Arthropoda, Rotifera, Chlorophyta, Bacillariophyta, and Stramenopiles) with COI and six groups (Annelida, Arthropoda, Rotifera, Alveolata, Fungi, and Apicomplexa) with SSU rDNA genes were determined in the Upo wetland. Among 38 taxa in 20 genera, which are closely related to the amplified sequences, 10 genera (50%) were newly reported in Korea and five genera (25%) were shown to be distributed in the Upo wetland. This approach is applicable to the development of an efficient method for monitoring biodiversity without traditional taxonomic processes and is expected to produce more accurate results in depositing molecular barcode data in the near future.
Nucleotide sequences of about 500 bp from the 5' end of mitochondrial (mt) DNA Cytochrome Oxidase I (COI) were analyzed to estimate the genetic variation between wild and cultured populations of the ascidian Halocynthia roretzi from two sites along the coast of Korea. A total of 25 haplotypes were defined by 21 variable nucleotide sites in the examined COI region. Genetic diversity (haplotype diversity and nucleotide divergence) of wild populations was higher than that of the cultured population. These data suggest that reduced genetic variation in the cultured population may have results from bottleneck effect caused by the use of a limited number of parental stock and pooling of gametes for fertilization. Pairwise population $F_{ST}$ estimates inferred that wild and cultured populations were genetically distinct. The combined results suggest that sequence polymorphism in the COI region would be preferable for estimating the genetic diversity of ascidian populations.
A DNA barcode based on 648 bp of cytochrome c oxidase I (COI) gene aims to build species-specific libraries for animal groups. However, it is hard to recover full-length (648 bp) barcode gene from environmental fecal samples due to DNA degradation. In this study, we designed a new primer set (K_Bird), which amplifies a 226 bp fragment targeted an inner position of full-length COI barcode based on 102 species of Korean birds to improve amplification success, and we attempted to identify bird species from 39 avian fecal samples collected during 4 months from Jinan, South Korea. Simultaneously, we conducted a dietary analysis using a universal DNA mini-barcode (Uni_Minibar) from same fecal samples. In silico analysis on newly designed mini-barcode represented that genetic distances were 0.5% in species and 9.1% in genera. Intraspecific variations of 149 species out of 174 species (86%) between Korea and North America were within the threshold (5.3% threshold in this study). From environmental fecal samples collected in Jinan, we identified seven avian species, which have high similarity (99-100%) with registered COI sequences in GenBank. Eight kinds of prey species, such as moth, spider, fly, and dragonfly, were identified in dietary analysis. We suppose that our strategy applying mini-barcode for environmental fecal samples, might be a useful and convenient tool for species identification and dietary analysis for birds.
We compared the DNA sequences of the genus Metagonimus: M. yokogawai, M. takahashii, and M. miyatai. We obtained 288 D1 ribosomal DNA (rDNA) and mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (mtCOI) fragments from the adult worms by PCR, that were cloned and sequenced. Phylogenetic relationships inferred from the nucleotide sequences of the 28S D1 rDNA and mtCOI gene. M. takahashii and M. yokogawai are placed in the same clade supported by DNA sequence and phylogenie tree analysis in 28S D1 rDNA and mtCOI gene region. The above findings tell us that M. takahashii is closer to M. yokogawai than to M. miyatai genetically. This phylogenetic data also support the nomination of M. miyatai as a separate species.
Kim, Ji Min;Kim, Jong-Gwan;Kim, So Yeon;Choi, Woo Yong;Kim, Hyung Seop;Kim, Min-Seop
Animal Systematics, Evolution and Diversity
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제36권3호
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pp.228-231
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2020
Pseudohelice subquadrata (Dana, 1851) is endangered due to its restricted habitat; hence, it has been designated as a marine protected species and endangered species by law in Korea. It has been recorded only Jeju-do and Geomun-do, Republic of Korea. The present study, is the first report on a cytochrome c oxidase subunit I DNA barcode for P. subquadrata. The maximum intra-specific genetic distance among all P. subquadrata individuals was found to be 0.5%, whereas inter-genetic distance within the same genus was 17.2-21.5% compared with Helice tientsinensis (Rathbun, 1931), H. tridens (De Haan, 1835), H. epicure (Ng et al., 2018), and Helicana wuana (Rathbun, 1931). Our barcoding data can thus be used as reference for restoration and conservation studies on P. subquadrata, which are designated as marine protected species.
Huy Van Nguyen;Minh Tu Nguyen;Nghia Duc Vo;Nguyen Thi Thao Phan;Quang Tan Hoang
Fisheries and Aquatic Sciences
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제25권12호
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pp.637-647
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2022
A spotted scat, Scatophagus argus, has a high nutritional value and is among Asia's most widely consumed fish species. Thua Thien Hue's consumption market considers this species to be of high economic value and requires protection and conservation of the population. However, the studies on the identification and genetic diversity of S. argus distributed in Vietnam are still lacking. Therefore, mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene was utilized to distinguish different populations and investigate the genetic diversity of two populations of S. argus from Tam Giang lagoon, Thua Thien Hue province (n = 31) and Ca Mau province (n = 14). The sequencing results indicated 13 distinct haplotypes among 45 sequences. Five single nucleotide polymorphisms were observed to distinguish Hue spotted scat population. The S. argus population in Ca Mau province was higher haplotype diversity (Hd) and nucleotide diversity (π) than those of Thua Thien Hue province, which demonstrates that there are minor differences between haplotypes. There were genetic distances ranging from 0%-4% within the populations and 6.67% between the two populations. In addition to the sequencing, the comparison of morphology, biology, culture, and the growth rate was sufficient to distinguish the spotted scat S. argus in Thua Thien Hue from Ca Mau.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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