Two Tobamoviruses, Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV) and Zucchini green mottle mosaic virus (ZGMMV), occurred in Korea in 463 ha in 1998, 33.9 ha in 1999, and 44.2 ha in 2000. CGMMV was detected in watermelon, cucumber, oriental melon, and melon, whereas ZGMMV was mainly detected in zucchini squash. Thirty-six CGMMV isolates wee classified into three types by analysis of single strand cDNA conformational polymorphism (SSCP) of the coat protein gene. In a comparison of serological relationships among CGMMV, ZGMMV, and Kyuri green mottle mosaic virus (KGMMV), the three tobamoviruses specifically reacted with each homologous antibody in the double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay and rapid imunofilter paper assay (RIPA), although ZGMMV and KGMMV were slightly biologcially similar. In a survey of the three tobamoviruses in cucurbitgrowing field in Korea by RIPA, CGMMV and ZGMMV were detected but KGMMV was not found in commercially growing cucurbit crops so far. Seed contamination ratio of CGMMV in bottle gourd seeds tested was 84%, while seed trasmission ratio from the virus-contaminated seeds was 2.0%. Soil transmission ratio was 0-3.5% in fields naturally infested with CGMMV or ZGMMV. Control measures of the virus diseases are roguing and sanitation. These suggest that it is important to rogue the first infected crops, which include the seed and soil, especially early in the season. This may be practicable to control the diseases because CGMMV and ZGMMV have a narrow host range restricted to cucurbitaceous crops.
We immunized BALB/c mice with purified Cucumber green mottle mosaic virus isolate HY1 (CGMMV-HY1). Through the selection of positive clones that were grown on the HAT medium, four sensitive monoclonal clones (CG99-01, CG99-02, CG99-03, and CG99-04) were selected from 500 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase positive hybridoma cells. Four sensitive clones of CGMMV-HYI were determined as IgM type of the subclass of mouse immunoglobulins Ig group. The titer of monoclonal antiserum against CGMMVHY1 was estimated 1:12,800 by the indirect ELISA. Although monoclonal antibodies (MAbs) from CG99-01 and from CG99-04 cross-reacted with Zucchini green mottle mosaic virus and Kyuri green mottle mosaic virus, MAb from the cell line CG99-03 was highly specific to CGMMV. No MAbs cross-reacted with Cucumber mosaic virus-Fny. Only CG99-04 reacted with Pepper mild mottle virus weakly and CG99-02 reacted with both CGMMV and KGMMV. CGMMV was detected from the rind of watermelon fruit by DAS-ELISA of CGMMV-HY1, but not from the flesh of watermelon. Average seed transmission rate of CGMMV in watermelon was $24\%$ from symptomatic watermelon collected from 5 regions of Gyeongnam province. CGMMV was detected by DAS-ELISA with specific MAb of CGMMVHY1 periodically from root stock, during the sequential process for nursery seedling in Haman. Necrotic spots on cotyledons of root stock seedling progressed to reveal the typical symptomatology on the primary leaves of scion upon grafting. Here, we have established MAb based ELISA system, which could accurately detect CGMMV from watermelon seeds, nursery seedlings, transplants and field samples from greenhouse or open out door field as well.
박과는 스쿼시, 호박, 애호박, 조롱박, 오이 및 수박 등 100여 속이 넘는 속이 포함된 식물과이며, 종자의 수입량이 매우 많은 작물이다. 이들이 우리나라로 수입될 때, 규제바이러스인 Squash mosaic virus (SqMV), Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV) 및 Kyuri green mottle mosaic virus (KGMMV)에 대하여 검역을 수행한다. 본 연구에서는 SqMV, CGMMV 및 KGMMV를 신속·높은 감도로 검출할 수 있는 특이적 RT-PCR 및 nested PCR 프라이머 조합과 유전자변형-양성대조구 플라스미드를 개발하였다. 또한 본 연구에서 개발한 진단시스템을 2010년부터 2014년 상반기까지 현장적용하여, SqMV 47건, CGMMV 67건 및 KGMMV 17건을 검출하였다.
A single-step multiplex reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) assay was developed for the simultaneous detection of five cucurbit-infecting viruses: cucumber mosaic virus (CMV), watermelon mosaic virus 2 (WMV2), zucchini yellow mosaic virus (ZYMV), cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV), and kyuri green mottle mosaic virus (KGMMV). The multiplex RT-PCR provides a simple and rapid method for detecting various viruses in cucurbit plants, which will help diagnose many cucurbit plants at a time.
We isolated the Cucumber green mottle mosaic virus(CGMMV) particles from watermelon leaves and designated as CGMMV-HY1 as a watermelon isolate and attempted to characterize the pathogenic isolate responsible for such an epidemic in watermelon and also to monitor dominant viral isolates in greenhouse. The watermelon plants infected with CGMMV generally showed mottle mosaic, mosaic, growth stunting, necrosis and deformed fruit. The reactions of indicator plants to CGMMV-HY1 were the local lesions on Nicotiana tabacum cv. White Burley, Nicotiana tabacum cv. Samsun, and Chenopodium amaranticola, and the mosaic symptoms only on Cucumis sativus, but the CGMMV-HY1 did not infect Nicotiana sylvesytis, Datura stramonium, Chenopodium quinoa, and Petunia hybrida. Purified virus particles were rod-shaped and about 300 nm long. The coat protein (CP) of purified CGMMV-HY1 was single band with molecular weight of about 16.5 kDa which was confirmed by western blot analysis probed with monoclonal antibody of CGMMV-HY1. The genomic and subgenomic RNAs of 6.4 kb and 0.75 kb were revealed by the electrophoresis on 1.2% formaldehydedenatured agarose gel. Viral and complementary CGMMV-specific primer sets were designed for spanning the genome using previously reported CGMMV sequences. A 464bp of CP gene of CGMMV-HY1 was amplified by RT-PCR and cloned into PGEM-T easy vector. The nucleotide sequence of CP gene of CGMMV-HY1 shared 98%, 99%, and 100% identities with that of CGMMV strains W, KOM, and KW respectively. Based on these results, we identified CGMMV-HY1 as a CGMMV isolate of watermelon, a member of Tobamovirus.
오이녹반모자이크바이러스(CGMMV)가 오염된 포장에서 이 바이러스병의 토양전염율은 0.2∼3.5%였다. 경작지 토양과 같이 습도가 적당히 유지된 토양에서 CGMMV의 생물활성 지속기간은 17개월 후에는 바이러스의 활성이 손실되었으나, 담수 토양에서는 33개월 이상 이 바이러스의 생물활성이 유지되었다. CGMMV의 토양전염을 억제하기 위하여 정식직전 수박 묘의 뿌리를 10% 탈지분유액에 침지하여 정식한 처리구에서는 이 바이러스병이 발병되지 않았으나, 무처리구에서는 5.0∼7.6%가 발병되었다. 탈지분유액을 처리한 뿌리를 주사전자현미경으로 관찰한 결과 뿌리 주위로 얇은 막이 형성되어져 있었다.
Plant virus coat (CP) gene-mediated protection is one of the best known approaches to protect against virus resistant transgenic plants. Transgenic N. benthamiana plants containing the CP gene of Zucchini green mottle mosaic virus (ZGMMV) were used for the environmental risk assessment of the living modified (LM) plants with plant virus resistance. The most optimal co-infection method of both ZGMMV and CMV (Cucumber mosaic virus) on Non-LM and CP-expressing LM tobacco plants was established and co-infection of CMV and ZGMMV was confirmed by polymerase chain reaction (PCR). To address the effects of LM tobacco plants on the mutation of the virus, in-vitro transcripts of CP and Replicase (Rep) derived from CMV and/or ZGMMV were inoculated onto Non-LM or LM tobacco plants. Mutation frequency of CP and Rep from CMV and ZGMMV was examined through six serial passages in Non-LM and LM tobacco plants. Little actual frequency of mutation was estimated, probably due to the limited number of transgenic plants tested in this study. However, it does not suggest environmental safety of these CP-mediated LM plants. Further study at a larger scale is needed to evaluate the environmental risk associated with the CP-expressing LM plants.
Disease incidences of cucumber virus diseases in Jeonnam province were 52.5%, 16.1%, 35.2%, and 50.9% in 1999, 2000, 2001, and 2002, respectively. Rod- and flexuous rod-shaped virus particles were observed with the frequencies of 63.2% and 10.5%, respectively from the samples collected in 1999 under EM observation. Rod-shaped virus particles are considered as tobamovirus while flexuous rod shaped particles are considered as potyviruses. To further confirm their nature, total of 312 diseased virus samples were collected from 2000 to 2002, and tested by RT-PCR. Disease incidences of tobamoviruses including Cucumber green mottle mosaic virus and Kyuri green mottle mosaic virus were 48.7% and 3.8%, respectively while those of potyviruses including Zucchini yellow mosaic virus, Papaya ringspot virus, and Watermelon mosaic virus were 15.7%, 9.3%, and 5.1%, respectively. Interestingly, Cucumber mosaic virus was hardly detected. About 5.8% of tested samples were infected with more than one virus. Tobamovirus infection was consistently observed from September to December regardless of planting time, whereas infection of potyviruses was observed in many cucumber cultivating areas where it was planted in September and October.
Kim, Jeong-Soo;Cho, Jeom-Deog;Park, Hong-Soo;Kim, Kyung-Soo
The Plant Pathology Journal
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제16권4호
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pp.211-215
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2000
Symptoms on 4 varieties of watermelons inoculated with watermelon mosaic potyvirus II isolated from watermelon (WMV-W) were severe mosaic and leaf malformation while those inoculated with cucumber green mottle mosaic tobamovirus from watermelon (CGMMV-W) were mild mosaic and chlorotic spots. Inoculation of the mixture of WMV-W and CGMMV-W produced extremely severe mosaic along with necrotic spots and general necrosis. Doubly infected plants were also stunted. Cells infected with WMV-W or CGMMV-W alone exhibited the intrinsically ultra-structural properties of each virus infection. WMV-W induced potyvirus-characteristic cylindrical inclusions in the cytosol. Virus particles were orderly aligned along the tonoplasts. CGMMV-W induced tobamovirus-characteristic stacked crystalline arrays of virus particles in the cytosol. Cells infected doubly with WMV-W and CGMMV-W contained striking cytopathic effects that were not present in single infection of each virus. The unique ring structure, nonagon, was that a single potyvirus particle was surrounded by 9 CGMMV-W tobamovirus particles.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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