An Efficient in vitro regeneration system and an optimized Agrobacterium mediated transformation protocol are described, based on the use of young seedling cotyledons of Capsicum annuum L. Optimal regeneration efficiency can be obtained by cultivating cotyledon explants on media containing 4 mg/L benzyladenine and 0.1 mg/L indolacetic acid. The effect of antibiotics used to eliminate Agrobacteria, as well as the toxic level of some generally used selection agents (kanamycin, geneticin, hygromycin, phosphinotricin and methotrexate) in regenerating pepper tissues were determined. To enable the comparison of different selection markers in identical vector background, a set of binary vectors containing the marker genes for NPTII, HPT, DHFR and BAR respectively, as well as the CaMV 35S promoter/enhancer-GUS chimaeric gene was constructed and introduced into four different Agrobacterium host strains.
The inhibition of chlorophyll formation in cucumber cotyledons by N-phenyl oxadiazolidinedione derivatives Ia-u showed similar trend as their herbicidal activities. In case of oxadiazolidinedione Iq, with a propargyloxy substituent, both the highest herbicidal activity and inhibitory action(pI$_{50}$ = 6.37) were observed. The accumulation of protoporphyrin IX and cellular electrolyte leakage by oxadiazolidinedione Ia, Ik and Iq were well correlated with their inhibition of chlorophyll biosynthesis. These results suggest that the herbicidal activity of oxadiazolidine Ia-u is originated from the inhibition of chlorophyll biosynthesis.
Five different poplar hybrids were tested for rescuing embryo to elongate in vitro plantiets after hybridization. Ovaries and ovules were cultured on Woody Plant Medium (WPM) supplemented with cytokinins, 6-benzylamine (BA) and zeatin. Multiple shoots were initiated from half section of capsule with immature embryos after 21 days from pollination and tiny shoots were formed after the expansion of cotyledons in ovule cultures. Germinating response was better in intraspecific hybrids $(6.53\pm1.66)$ than interspecific crosses $(0.93\pm0.54)$ from half section of capsules on WPM medium. In general, zeatin was better than BA in inducing multiple shoots from isolated ovules. The highest average number $(19.40\pm4.53)$ of shoots was produced from immature ovules of 21 days post-pollination of WPM medium supplemented with 5.0 mg/L zeatin. The highest percentage of germination was 93% from the half section of in vitro ovary cultures. Soil acclimation was successfully conducted in cell tray containing artificially mixed soil with 96% survival rate.
This study was carried out in Mt. Backdu which is located at the borderland between Korea and China, to offer the information and help the people who in order to study and utilize the northernresource plants in future. Actually, the exploration and investigation were executed only in china sideof Mt. Backdu and its outskirts.Totally, 100 families, 281 genus and 703 species were investigated. They were classified into 26 spe-cies of pteridophyta, 14 species of gymnospermae, 101 species of monocotyledons and 562 species of di-cotyledons by general taxonomic classification, and 594 medicinal plants(84.5% ), 296 ornamentalplants(38.3% ), 161 edible plants(22.9% ), 92 industrial plants, 67 honey plants and 17 forage plantsby use.
We investigated expression of cucumber senescence-associated genes (SAGs) from developing cotyledons and flower petals. Several cucumber SAGs have been reported in earlier reports. This is an extension of the previous findings. Semi-quantitative RT-PCR revealed that most of the cucumber SAG transcripts were consistently produced until the organ senescence. These results imply that many cucumber senescence-related genes are still active during the final development stage, playing some executive biological roles, possibly in remobilization of nutrients to the other parts of tissues or organs. These results were used to search for possible functions of senescence-related genes during organ development.
Xanthoceras sorbifolium Bunge (yellowhorn) is a woody tree in the soapberry family, Sapindaceae, native to northern China. This species has been identified as a major woody bioenergy plant for bio-diesel production because of high oil content in seed. But the flowers do not bear fruit well while the many flowers blooming. This study was performed to regenerate in vitro plantlet using adventitious shoot formation. To establish the protocol of plant regeneration, adventitious shoots formation rate in the culture of cotyledon of immature zygotic embryos was 68.6% in 1/2 MS medium with 0.5 mg l-1 BA and 3% sucrose (w/v). In the culture of cotyledons of mature zygotic embryos, induction of adventitious shoots was needed to contain high sucrose in pre-culture medium and the frequency of shoot induction was 64.4%. Multiple shoots were induced in 0.5 mg l-1 TDZ, and rooting of shoot was induced 4.0 mg l-1 IBA. Flow cytometry analysis revealed that all the regenerated plantlets were diploid.
검정종피와 녹색자엽을 가진 콩 품종이나 유전자원은 눈의 피로 등 시신경 보호와 눈 질환 예방에 도움을 줄 수 있는 루테인 성분과 인체 내 활성산소 제거, 콜레스테롤 저하, 항산화 및 항암 작용, 면역증강, 노화 방지 등의 작용을 하는 안토시아닌 성분을 풍부하게 함유하고 있다. 그러나, 성숙 종자에는 알러지 유발 및 품질을 저하시키는 P34, 7S α' subunit 및 렉틴 단백질도 포함되어 있다. 따라서, 본 연구는 P34, 7S α' subunit 및 렉틴의 3가지 단백질이 부재하면서 검정종피와 녹색자엽을 가진 콩 계통을 개발하기 위하여 진행되었다. 갈색종피와 녹색자엽을 가지면서 7S α' subunit 및 렉틴 단백질이 부재한 모본과 검정종피와 녹색자엽을 가지면서 P34 및 렉틴 단백질이 부재한 부본과의 교배로 검정종피와 녹색자엽을 가진 157개의 F2 종자가 선발되었다. P34 및 7S α' subunit 단백질의 존재와 부재는 각각 3:1로 관찰되었고, 두 단백질 간에는 9:3:3:1의 분리비와 일치하여 서로 독립적임을 나타내었다. 두 단백질에 대하여 모두 열성(cgy1cgy1p34p34)을 보인 14개의 F2 종자로부터 형질이 양호하면서 P34, 7S α' subunit 및 렉틴 단백질이 모두 없고 검정종피와 녹색자엽을 가진 한 개의 개체가 선발되었다. 선발 개체의 F3 종자를 이용하여 3가지 단백질의 부재에 대한 유전적 고정이 확인되었다. 온실에서 6월 14일 파종 시 선발 개체의 성숙일은 10월 3일, 경장은 약 68 cm였고 백립중은 26.5 g 정도였다. 선발 개체는 항영양성분이 부재하면서 녹색자엽을 가진 유색콩 품종 육성을 위한 모본으로 이용될 수 있을 것으로 보인다.
Cryclohexylarnine(CHA)에 의한 부정근 억제가 spermidine 과 spermine에 의한 부정근 형성 회복에 미치는 영향을 알아 보고자 대두 자엽 절편을 이용하여 조직내의 polyamine함량을 조사하였다. 부정근 형성 배지에 CHA를 처리한 결과 $10^{-2}$ M CHA 처리시에는 spermidine이나 spermine을 혼합처리함에도 불구하고 부정근이 형성되지 않았다. 또한 2.5 $\times$$10^{-3}$ M CHA 단독처리시에는 부정근 형성이 억제되었으나, $10^{-4}$ M spermine 혼합처리시에는 부정근 형성능이 회복되었다. Putrescine 함량은 부정근이 형성돠지 않았던 $10^{-2}$ M CHA 단독 처리구 및 $10^{-2}$ M CHA와 $10^{-3}$ M Spermine 혼합처리구에서는 배양 3일 이후 대조구보다 감소하였지만 부정근이 다소 형성되었고, 부정근 회복능이 가장 높았던 2.5 $\times$$10^{-3}$ M CHA와 $10^{-4}$ M spermine 혼합처리구에서는 대조구보다 높은 함량을 나타내었다. Spermidine 함량은 모든 처리구에서 대조구보다 낮아서 함량이 낮을수록 부정근 형성이 억제되었으며, spermine의 함량은 대조구에 비하여 모든 처리구에서 급격히 증가되어 대조구에 비하여 함량이 높을 수록 부정근 형성이 억제되었다.
비배유종자인 두류는 발아시 자엽내 전분 energy원이 어떻게 분해 전이되어 배아부로 공급되는가를 구명하고자 자엽에 당질이 많고 종자수명이 긴 강남콩을 공시하여 발아과정중 경시적으로 유식물체를 부위별로 절취하여 건물중과 당류의 경시적 소장 및 이동을 HPLC로 분석한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 강남콩 종자에서 자엽 부위의 수분 함율은 6.4 ∼6.5%이나 발아 기간중 ( 1∼8일) 흡수율은 45.8∼71.2%로 증가되며 자엽 하반부가 후엽 상반부보다 1.1∼3.8% 높았다. 자엽을 제외한 근부(유아 + 유근 + 유축부)의 조직 기관에서는 더욱 많은 72.2∼93.3%로 자엽조직보다 현저한 함수율을 보였다. 2. 발아중 강남콩 종자의 주요 당류는 raffinose, sucrose, glucose, fructose이며 경시적 당류 소장이 부위별로 현저한 차이를 보였다. 3. 종자가 파종 흡수되면 각 기관 조직에 raffinose가 급증하나 발아가 완료되면 유아부에서는 소진되고 자엽 하반부에서는 다소 잔존함을 알 수 있었다. 4. Sucrose는 발아초 신생 유아부와 종자의 자엽에 많이 생성되나 발아 후 유아부에서는 급감되고 자엽 조직에서는 계속 생성되어 증가됨을 알 수 있었다. 5. Glucose와 fructose는 종자의 자엽부에서는 발아 기간중 5∼l0%와 5∼l5% 범위의 적은 변화였으나 유아 및 생장부위에서는 발아 초기부터 후기까지 현저히 계속 증가됨을 인정할 수 있었다.
고추 형질전환은 Agrobacterium (LBA4404/pBI101 cyc600-syna-elicitin)을 이용한 cyc600 promoter에 구축된 elicitin 유전자의 형질전환시 shoot의 형성율은 수비초의 경우 3 mg/L zeatin과 0.05 mg/L NAA 함유 배지에서 11.1%, 4 mg/L zeatin과 0.05 mg/L NAA 함유 배지에서 12.8%였다. 전배양 3일, 공동배양 $3{\sim}4$일에서 재분화율이 높았다. 자엽으로부터 재분화된 형질전환체의 NPTII 유전자의 primer를 이용한 PCR 반응에서 형질전환된 재분화 식물체는 536 bp의 밴드를 확인하였다. Membrane에 blot하여 NPTII gene을 probe로 사용하여 Southern blot 분석에서 고추형질전환 식물체는 536 bp 부위에 강한 signal을 보였다. elicitin 유전자를 이용한 역병 저항성 형질전환체 수비초 $T_{0}$세대의 생육은 계통간에 다소 차이는 보였고, 계통 모두 생육은 저조한 반면 개화 및 수정 등의 임성은 정상적이었다. 자식을 통해 채종한 $T_{1}$ 식물체의 유전자 도입을 확인하기 위하여 PCR을 수행한 결과 $T_{0}$ 식물체 $S1{\sim}S5$ 계통에서 elicitin 밴드가 나타나 형질전환체임을 확인하였고, $T_{1}$식물체인 S1-1 등 7계통에서 elicitin 밴드가 나타났고, S1-2 등 4계통에서는 밴드가 나타나지 않아 형질전환체가 후대에서 분리가 일어남을 확인할 수 있었다. Syn ${\alpha}$ clone을 이용하여 Southern blot analysis를 한 결과 band가 나타난 300 bp 정도의 위치에서 blot이 나오는 것을 관찰할 수 있었다. 위의 결과에서 cyc600 promoter-syn ${\alpha}$의 construct가 수비초의 genomic DNA에 삽입되었는 것을 확인할 수 있었다. 고추형질전환체의 유묘에 역병균을 접종한 결과 유주포자 $10^{3}$개/mL에서 형질전환체의 저항성 계통선발이 가능하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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